液相色谱应用

液相色谱应用第一页，共五十九页，编辑于2023年，星期三高效液相色谱

应用第二页，共五十九页，编辑于2023年，星期三高效液相色谱法的

发展历史第三页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

在所有色谱技术中，液相色谱是最早（1903）发明的。起初，在常压下操作的液相色谱，分离一个样品往往长达几小时至几十小时，因此工作效率很低。第四页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速，以缩短分离时间，但是结果失败了。第五页，共五十九页，编辑于2023年，星期三因为，根据液相色谱理论，随着载液（流动相）流速的提高，理论塔板高度则增大，所以柱效会明显降低。第六页，共五十九页，编辑于2023年，星期三随着生产技术的提高，人们制成了细小（<10μm）而高效的填充物，从而使柱效大大提高。但是随着填充物（固定相）粒度的减小，柱阻力迅速增大。为了获取一定的流速（1-5ml/min)，必须解决高压输液设备。第七页，共五十九页，编辑于2023年，星期三随着工业技术的发展，高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用，逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。被称之为高效液相色谱（HPLC）或现代液相色谱，以区别于经典液相色谱。1969年，第一代商品化仪器诞生。第八页，共五十九页，编辑于2023年，星期三高效液相色谱法

与气相色谱法

的比较第九页，共五十九页，编辑于2023年，星期三（l）气相色谱法分析对象只限于分析气体和沸点较低的化合物，它们仅占有机物总数的20％。对于占有机物总数近80％的那些高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质，目前主要采用高效液相色谱法进行分离和分析。第十页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

(2)气相色谱采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用。而高效液相色谱法中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。第十一页，共五十九页，编辑于2023年，星期三HPLC在各领域的主要应用应用领域分析对象举例环境常见无机阴阳离子、多环芳烃、多氯联苯、硝基化合物、有害重金属及其形态、除草剂、农药、酸沉降成分。农业土壤矿物成分、肥料、饲料添加剂、茶叶等农产品中无机和有机成分。石油烃类族组成、石油中微量成分。化工无机化工产品、有机化工产品、合成高分子化合物、表面活性剂、洗涤剂成分、化妆品、染料。材料液晶材料、合成高分子材料。食品无机阴阳离子、有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素、多核芳烃。生物氨基酸、多肽、蛋白质、核糖核酸、生物胺、多糖、酶、天然高分子化合物。医药人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物化学成分。第十二页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第十三页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第十四页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第十五页，共五十九页，编辑于2023年，星期三二、液相色的流相

1.流动相特性（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变，极性改变，可显著改变组分分离状况；

第十六页，共五十九页，编辑于2023年，星期三（2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。第十七页，共五十九页，编辑于2023年，星期三（3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。第十八页，共五十九页，编辑于2023年，星期三2.流动相类别

按流动相组成分：单组分和多组分；

按极性分：极性、弱极性、非极性；

按使用方式分：固定组成淋洗（等梯度）梯度淋洗。

第十九页，共五十九页，编辑于2023年，星期三常用溶剂：己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、甲醇、水。采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。第二十页，共五十九页，编辑于2023年，星期三3.流动相选择

在选择溶剂时，溶剂的极性是选择的重要依据。采用正相液-液分配分离时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，逐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。

第二十一页，共五十九页，编辑于2023年，星期三常用溶剂的极性顺序：水(最大)>甲酰胺>甲醇>乙腈>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六环>四氢呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>异丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)第二十二页，共五十九页，编辑于2023年，星期三4.选择流动相时应注意的几个问题（1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。第二十三页，共五十九页，编辑于2023年，星期三（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。

第二十四页，共五十九页，编辑于2023年，星期三（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。

第二十五页，共五十九页，编辑于2023年，星期三（4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。第二十六页，共五十九页，编辑于2023年，星期三高效液相色谱的

分类第二十七页，共五十九页，编辑于2023年，星期三液-固吸附色谱

liquid-solidadsorptionchromatography

第二十八页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第二十九页，共五十九页，编辑于2023年，星期三基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；

适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；

缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；

第三十页，共五十九页，编辑于2023年，星期三液-液分配色谱

liquid-liquidpartitionchromatography

第三十一页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第三十二页，共五十九页，编辑于2023年，星期三流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相

normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相

reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；

第三十三页，共五十九页，编辑于2023年，星期三固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；

化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。第三十四页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

乳酸中的苯甲酸和山梨酸测定

色谱柱：C18柱流动相：甲醇-（0.02M乙酸铵）10-90检测器：紫外

（236nm）流速：1.0ml/min进样量：10μl组分：1.乳酸2.苯甲酸3.山梨酸第三十五页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

聚合级丙烯酰胺中微量杂质的测定

色谱柱：C18柱流动相：乙腈-水25-75流速：1.0ml/min检测器：示差折光进样量：10μl组分：1.丙烯醛2.丙烯腈3.丙烯酰胺

第三十六页，共五十九页，编辑于2023年，星期三杂醇油HPLC曲线

色谱柱：C18流动相：乙腈-水

（40-60）流速：1.0ml/min进样量：5μl组分：1.乙醇2..丙醇3.丁醇4.戊醇5.己醇第三十七页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

特种油脂成分分析

色谱柱：C18柱流动相：乙腈-丙酮30-70流速：1.0ml/min检测器：示差折光进样量：10μl组分：1.1，3-二乙酸-2-油酸甘油酯2.1，3二油酸-2-乙酸甘油酯

3.三乙酸甘油脂4.1，3-二乙酸-2-硬酯酸甘油酯

5.1，3二硬酯酸-2-乙酸甘油酯6.三油酸甘油脂

第三十八页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

水溶性未知混合物色谱柱：（美国）YPW-C18流动相：纯水检测器：示差折光流速：1.0ml/min进样量：10μl组分：1.甲醇2..乙醇3.硫醇4.异丙醇第三十九页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

邻甲苯胺中的甲苯

色谱柱：（美国）NH2

基柱流动相：二氯甲烷-己烷20-80检测器：紫外

（254nm）流速：1.0ml/min进样量：10μl组分：1.邻甲苯胺2..甲苯

第四十页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

两种紫外吸收剂的HPLC曲线

对比色谱柱：（美国）CN基柱流动相：环己烷-异丙醇90-10检测器：紫外

（230nm）流速：1.0ml/min进样量：10μl组分：1.黑：

合成样2..红：对比样第四十一页，共五十九页，编辑于2023年，星期三离子交换色谱

ion-exchangechromatography第四十二页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第四十三页，共五十九页，编辑于2023年，星期三基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+

阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-

应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。第四十四页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

自来水离子色谱图色谱柱：（美国）PRP-X100阴离子柱流动相：0.4MPHBA（Bis-Tris缓冲体系）检测器：电导流速：1.0ml/min进样量：2μl组分：1.系统峰（水）2..氯离子3.硝酸根4.硫酸根

第四十五页，共五十九页，编辑于2023年，星期三羟基亚乙基膦酸中甲酸、乙酸的测定色谱柱：（美）PRP－X100阴离子柱流动相：Bis-Tris缓冲液（0.4MPH=8.2）l流速：1.0ml/min检测器：电导进样量：2µl组分：1.甲酸2..乙酸3.膦酸第四十六页，共五十九页，编辑于2023年，星期三体积排阻色谱凝胶渗透色谱（GPC)

size-exclusionchromatography第四十七页，共五十九页，编辑于2023年，星期三第四十八页，共五十九页，编辑于2023年，星期三原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。第四十九页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

右旋糖酐的GPC曲线

色谱柱：（日Shodex）SB-806MHQGPC柱流动相：Na2SO4(0.7%)流速：1.0ml/min检测器：示差折光进样量：10μl

峰序号重均分子量数均分子量分子量分布相对含量1#1608665902.4495.472#171813741.254.35

第五十页，共五十九页，编辑于2023年，星期三

用GPC研究聚合物的共