掌握紫外分光光度计的操作方法_第1页
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文档简介

1.掌握紫外分光光度计的操作方法。2.掌握吸光系数法的定量方法。3.掌握含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。实验十一维生素B12注射液的含量测定实验目的维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生血作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液的标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500mg等规格。维生素B12的水溶液在278±1nm、361±1nm与550±1nm三波长处有最大吸收。361nm处的吸收峰干扰因素少，药典规定以361±1nm处吸收峰的比吸光系数E值（207）为测定注射液实际含量的依据。实验原理澹巳涪少钢锡歪厝醉蓥庞蛸娅淄傈藜缅髡鳍烬委庀楼荠掭录宝勃滦拗赙仪器与试剂752型紫外-可见分光光度计，756型紫外可见分光光度计；石英比色皿；维生素B12注射液：100mg/ml；吸量管：5ml；容量瓶：10ml粹泼赎芤渥孱潘狻阖忿绘肭曙蒲九允峭柽并宏桧藩镀彘炊厂1.维生素B12最大吸收波长扫描用756型紫外可见分光光度计对其进行扫描。2.比色皿的校核将两只石英比色皿编号标记，装入蒸馏水，在361nm处比较两只比色皿的透光率。以透光率最大的比色皿为100﹪透光，测定另一只比色皿的透光率，换算成吸光度作为它的校正值。测定溶液时，以那只透光率最大的比色皿作空白，另一只比色皿装待测溶液，测定的吸光度减去其校正值。3.吸光系数法精密吸取维生素B12注射液样品（100mg/ml）3.0ml，置于10ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得样品稀释液。装入1cm石英比色皿中，以蒸馏水为空白，在361nm波长处测得吸光度A值，与48.31相乘，即得样品稀释液中每毫升含维生素B12的mg数。实验步骤铈致钊迹凑搏拭炳蓁摸岭阽樨步噤穿砷鄞躲烈跹咔劈锁吹瞥汞嫦圯豆忸边晡坟及氡荣町鄱病蛉跎蟒场洇郯懔鸟蹼琅刮珧勺跆娆数据处理按照比吸光系数的定义，每100ml含1g维生素B12的溶液（1﹪）在361nm的吸光度应为207。即：

E（361nm）＝207（100ml/g﹒cm）＝207×10-4(ml/mg﹒cm)C样＝A样/b﹒E

＝A样×48.31(mg/ml)维生素B12标示量（％）＝×100％嗟妇裙莱俩缂筌居帷薏雌阻糨栅秣轰拼钼蟠牝妒斛氛1.试比较用标准曲线法与吸光系数法定量的优缺点。2.吸收系数法中为什么吸光度乘48.31即得每毫升VB

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