乙型肝炎实验室检测技术

病毒形态与基因结构嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)正肝DNA病毒属电镜：3种形态当前第1页\共有30页\编于星期三\20点当前第2页\共有30页\编于星期三\20点HBV基因组和基因表达产物3200bp4openreadingframes7proteins

大蛋白(preS1-preS2-S)中蛋白(preS2-S)小蛋白(HBsAg)核衣壳(HBcAg)HBeAg聚合酶X蛋白当前第3页\共有30页\编于星期三\20点当前第4页\共有30页\编于星期三\20点当前第5页\共有30页\编于星期三\20点HBVcarrierdistributioninChinain19924-8%8-12%4-8%当前第6页\共有30页\编于星期三\20点海南黑龙江吉林辽宁山东福建江西安徽湖北湖南广东广西上海河南山西内蒙古陕西宁夏甘肃青海四川贵州云南西藏新疆江苏浙江北京台湾over7%3~7%Lowerthen3%HBsAgdistributionintheyearof2006Nodata当前第7页\共有30页\编于星期三\20点ComparingofHBsAgprevalencebetween1992and2006age当前第8页\共有30页\编于星期三\20点

世界高流行区≥8%中流行区2～7%低流行区＜2%

我国农村>城市南方>北方中南和华东>华北

地区分布当前第9页\共有30页\编于星期三\20点

年龄和性别高流行区青少年和30～40岁的成人中流行区仍以成人感染为主低流行区多20～29岁年龄组发病高峰

职业高危人群医务人员托幼机构儿童妓女静脉内滥用毒品者男性同性恋者

家庭聚集性明显人群分布当前第10页\共有30页\编于星期三\20点基因型血清型主要地区Aadw2,ayw1北欧、西欧、非洲、美洲Badw2,ayw1东南亚、中国、日本Cadr,ayr,adw2东亚、中国、日本、波利尼西亚等Dayw2,ayw3南欧、地中海、印度Eayw4西非Fadw4,adw2,ayw4美国土著人、波利尼西亚、中南美Gadw2美国、法国H?尼加拉瓜、墨西哥、美国HBV不同基因型和血清型的地区分布当前第11页\共有30页\编于星期三\20点Source:NNDSS/VHSP经血传播医源性传播母婴传播性接触传播日常生活接触传播

传播途径当前第12页\共有30页\编于星期三\20点

HBsAg最早出现的血清学标志之一是HBV感染的基本标志HBsAg阳性见于乙肝的潜伏期、急性期慢性乙肝病毒携带与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌抗原抗体系统当前第13页\共有30页\编于星期三\20点抗-HBs特异性中和抗体、保护性抗体抗-HBs阳性可见于乙型肝炎恢复期，在HBsAg消失后间隔一定时间抗-HBs出现隐性感染的健康人，自身产生了免疫力注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫球蛋白(HBIG)后，产生的主动或被动免疫当前第14页\共有30页\编于星期三\20点HBcAg不能从血清中直接检出Dane颗粒经去垢剂处理HBcAg释放检测抗-HBc

非中和抗体、分IgM和IgG主要见于慢性感染和既往感染抗-HBcIgM通常在出现症状时即可检出，一般持续约6个月，提示HBV复制，是急性感染的重要指标，也是慢性活动性肝炎的重要标志抗-HBcIgG

在抗-HBcIgM下降及消失后出现，可伴随感染者终生存在当前第15页\共有30页\编于星期三\20点HBeAg

与HBsAg平行出现，较HBsAg消失早意义体内HBV复制、传染性强的标志急性乙型肝炎的辅助诊断判断预后的指标：HBeAg转阴，表示HBV复制减少或终止，预后好；若HBeAg持续阳性，则预后不良，易转为慢性抗-HbeHBeAg消失后出现无症状HBV携带者及非活动期慢性肝炎患者表示HBV在体内复制减少或终止，传染性减弱或消失当前第16页\共有30页\编于星期三\20点HBV感染血清学常见模式临床及流行病学意义HBsAg抗-HBs抗-HBcIgGIgMHBeAg抗-HBe潜伏期末期+﹣﹣﹣+/﹣﹣急性乙肝，病毒长期携带+﹣+++﹣HBsAg阴性的急性感染﹣﹣﹣+﹣﹣感染消除，抗-HBs尚未出现﹣﹣+﹣﹣﹣健康携带者+﹣++/-﹣+慢性乙肝，病毒长期携带+-++/-+-HBV近期感染，恢复期﹣+++/-﹣+HBV既往感染，已恢复﹣+/-+﹣﹣﹣﹣乙肝疫苗接种﹣+﹣﹣﹣﹣当前第17页\共有30页\编于星期三\20点ELISA（最常用，定性）免疫层析法（胶体金或硒标法）发光免疫分析（定量）反相间接血凝试验（少用）HBV感染的血清学诊断方法当前第18页\共有30页\编于星期三\20点利用抗原和抗体特异性结合方法间接法:测定抗-HBs夹心法：测定HBsAg和HBeAg竞争法：测定抗-HBc和抗-HBe酶联免疫吸附试验ELISA当前第19页\共有30页\编于星期三\20点优点快速简便，成本低敏感血清标本用量少缺点精密度差难以自动化容易出现交叉反应酶标技术当前第20页\共有30页\编于星期三\20点临床ELISA检验影响因素临床ELISA测定现通常为采用手工操作的以微孔板条为固相的测定模式，测定操作非常简单，一般涉及到标本的收集保存、试剂准备、加样、温育、洗板、显色、比色、结果判断和结果报告及解释等方面，其中任一步骤的不当都会影响测定结果，且尤以加样、温育和洗板等步骤为甚当前第21页\共有30页\编于星期三\20点一、临床标本的收集和保存要注意避免出现严重溶血样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时，应离心沉淀后取上清检测当前第22页\共有30页\编于星期三\20点二、试剂准备实验开始前，将试剂盒先从冰箱中拿出来，在室温下放置20分钟以上后，再进行测定蒸馏水或去离子水应保证质量当前第23页\共有30页\编于星期三\20点三、加血清样本及反应试剂加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡当前第24页\共有30页\编于星期三\20点四、温育要保证在设定的温度下有足够的反应时间温育温度的选择“边缘效应”的排除当前第25页\共有30页\编于星期三\20点五、洗板固相免疫测定技术是一种非均相免疫测定技术，需以洗涤操作将特异结合于固相的抗原或抗体与反应温育过程中吸附的非特异成份分离开来，以保证ELISA测定的特异性当前第26页\共有30页\编于星期三\20点六、显色在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性临用前配制当前第27页\共有30页\编于星期三\20点七、比色