课件病原微生物样本采集、保存与运输定稿

病原微生物样本病原微生物检验中，样本采集、保存和运输的规范化是及时、准确地提供微生物感染（污染）信息的基础，对突发公共卫生事件的应急处置起着至关重要的作用。样本的质量与样本的采集、保存、运输密切相关，样本采集、保存不当可导致假阴性、假阳性结果的出现。因此，正确地采集、保存、运输样本是保证实验室检测结果准确可靠的前提。采集前

言保存运输第一页，共33页。病原微生物样本用于分离培养的临床样本，尽量在抗菌药物使用前采集。样本采集后应立即送至实验室。一般不超过4h。采集样本时应注意与病程的关系。

如伤寒病人第1~2周血培养阳性率高，3~4周则大便培养阳性率高，败血症高热寒战时血培养阳性率高，用药前血培养阳性率高。注意采样部位，要在疾病发生的确切部位采样，也就是病原菌最多的地方。

如细菌性痢疾的大便，采样要采取脓血部份送检。采集的样本要有足够的量，否则可能会得到假阴性结果。应采集各种可能作为污染源的食物和环境样本，以及各种可能含有病原体的临床样本。对微生物检测样品，应避免采样时对微生物的杀灭和引入新的抑菌物质。

如容器是否有消毒剂的残留，或使用刚烧灼未冷却的采样工具。注意保护目的微生物，同时避免杂菌污染。以棉拭子采集的样本如咽拭子、肛拭或伤口拭子，宜插入运送培养基或生理盐水中送检。做好样品标记，填写采样单。应详细填写检样名称、来源、采样时间、采样方法、患者主要临床症状、检测项目等，使实验室能准确及时接种相应的培养基和适宜的培养环境，提高阳性检出率。根据不同样品的性状，检验项目要求，合理保存和运送样本。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第二页，共33页。病原微生物样本具有与采集病原微生物样本所需要的生物安全防护水平相适应的设备

包括个人防护用品防护材料、器材和防护设施等

隔离衣、帽、口罩、鞋套、手套、防护眼镜等具有有效的防止病原微生物扩散和感染的措施具有保证病原微生物样本质量的技术方法和手段具有掌握相关专业知识和操作技能的工作人员基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第三页，共33页。病原微生物样本突发疫情标本采集要求根据对突发疫情的判断制定处置策略。以科学的态度，本着快速处理的原则，各个工作细节严谨。慎重处理事件，认真对待样本。采集过程中应对样本的来源、采集过程和方法等作详细记录。在采样时间、采样部位、样本采集量的决断上，目的明确，有的放矢。无目的的大范围采集样本，无助于疫情病原的诊断，反而会因为样本过多导致实验室检测时间延长，延误疫情诊断时机（一般10份左右，10例以下全采）。样本不可再获得性，样本采集量应该充分(一式三份：一份用于实验室检测，一份用于检测结果复核，另一份保存起来留作原始样本以备需要)。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第四页，共33页。病原微生物样本细菌分离样本尽量在急性发病期和使用抗生素之前采集病毒分离样本最好在发病初期（1-2天）采集病毒抗原检测样本应在发病初期和急性期采集血清抗体检测样本分别在急性期和恢复期采集不同疾病的特点和临床表现，采集标本的种类、检测目的、采样时间、采样要求不尽相同基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第五页，共33页。病原微生物样本人体：胃内容物、血液、尿液、头发、指甲、牙齿、尸检材料、粪便等环境：水、土壤、气体、餐具、厨具、食品包装、奶瓶等食品：成品、半成品、调料、生鲜原料、跳蚤等媒介：苍蝇、臭虫、蜱、螨、老鼠、蟑螂、果子狸、跳蚤等其他：注射器、可疑药物、动植物等病原菌分离、病毒分离、抗原、核酸检测：粪便、咽拭子、痰液、尿液、血液、脑脊液、组织样本病原体的特异性抗体检测：血清、脑脊液呼吸道传播疾病：鼻、咽拭子、含漱液、痰液、呼吸道分泌物等。

如流感病毒分离用鼻咽拭子、含漱液应在发病的头3天采集，采样前1h患者不要饮水和进食。肠道传播疾病：粪便、肛拭子等。

如脊髓灰质炎病毒分离要求在麻痹后14天内采集双份粪便样本，且2份样本间隔24小时以上。自然疫源性疾病：脑脊液、血液、组织样本等。

如鼠疫耶尔森菌可以在人类血液、腺肿抽取物、痰液、咽拭子分离到，此外在咽部冲洗物、皮肤拭子或刮取物以及患有脑膜炎病人的脑脊液中均可分离到。进行尸体解剖时，应该采集腺肿、肝脏、脾脏以及肺脏样本。对于腐败的尸体应该抽取骨髓和脑组织。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第六页，共33页。样本来源可采集的样本和样品类型病人粪便、血液、尿液、呕吐物、洗胃液、肛拭子、咽拭子从业人员粪便、肛拭子、咽拭子、皮肤化脓性病灶样本可疑食品可疑食品剩余部分及同批次产品、半成品、原料加工单位剩余的同批次食品，使用相同加工工具、同期制作的其他食品使用相同原料制作的其他食品基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集食品制作环境加工设备、加工用具、容器、餐饮具上的残留物或物体表面涂抹样品或冲洗液样品；食品加工用水其他刚被稀便污染的尿布、衣服、床单等宿主动物粪便、昆虫等媒介生物由毒蕈、河豚等有毒动植物造成的中毒，要搜索废弃食品进行形态鉴别常见的食品安全事故可采集的样本和样品采集类型保存运输病原微生物样本第七页，共33页。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集细菌性食品中毒的主要检验样本食物中毒细菌常见食品主要检验样本沙门菌肉类、蛋品粪便、食品、血液副溶血性弧菌水产品、醃制品粪便、食品金黄色葡萄球菌肉类、乳品、淀粉制品食品、呕吐物蜡样芽胞杆菌米饭、肉、乳、淀粉制品食品、呕吐物致泻性大肠杆菌凉拌菜、肉制品粪便、食品椰毒假单胞菌玉米面、银耳食品、呕吐物产气荚膜梭菌肉制品粪便、食品肉毒梭菌堆放牛羊肉、罐头、香肠、鱼、豆制品食品、呕吐物变形杆菌动物性食品特别是熟肉和内脏制品、冷盘食品、粪便、呕吐物保存运输病原微生物样本第八页，共33页。病原微生物样本

样品种类检验目的样品量饮用水全分析及致病菌>5L

液体食品致病菌或毒物分析可疑食物>200mL

固体食品致病菌或毒物分析可疑食物>200g

呕吐物致病菌或毒物分析>50g(mL)

洗胃液致病菌或毒物分析>200mL

腹泻物致病菌或毒物分析>50g(mL)

血液病原分离、抗体分析>5mL

脑脊液病原分离>2mL

皮损分泌物病原分析灭菌生理盐水浸泡棉签涂取基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第九页，共33页。病原微生物样本咽拭子

采集病人发病3日内的咽拭子样本，用于病原检测（病原分离、核酸检测的阳性率较高）。用压舌板将舌向下向外压，用专用拭子在咽后壁或悬雍垂后侧适当用力涂抹数次，应避免触及口腔及舌部，迅速将棉签放入装有3-4mL保存液（Hank氏液或生理盐水）的15mL外螺旋盖采样管中，在靠近顶端处折断棉签，注明患者的姓名、样本的种类、采样时间、采样人等基本信息。

（5岁以下婴童采样时先将拭子用保存液蘸湿，在试管壁挤干后在进行采样）基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十页，共33页。病原微生物样本咽拭子

基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法正确错误采集保存运输第十一页，共33页。病原微生物样本鼻咽拭子

插入干的拭子到鼻孔深入鼻咽部，

停留片刻，缓慢旋转退出，另一个鼻

孔使用另一个棉签，将尾部弃去，拧

紧管盖。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十二页，共33页。病原微生物样本含漱液

先让病人咳嗽，用生理盐水或自配淡盐水15mL反复洗漱咽部1min，直接将洗漱液吐入试管内。痰液

以清晨采集为佳，病人用清水充分漱口后，用力自气管深处咳出痰液，吐至无菌容器中，加盖，标识，塑料袋密封，冷藏条件下送检。下呼吸道样本（适用于气管插管病人）

只采集重症病人，无时间限制。收集气管吸取液或支气管灌洗液5-10mL放入无菌、带垫圈的50mL螺口塑料管中。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十三页，共33页。病原微生物样本疱疹液、瘀点瘀斑

先用75％洒精对疱疹、瘀点或瘀斑周围皮肤进行消毒，待皮肤干燥后，用消毒针将疱疹、瘀点或瘀斑挑破用棉签蘸取液体，迅速将棉签放入内装3-5mL保存液的采样管中（或直接涂片），在靠近顶端处折断棉签，旋紧管盖。可同时采集多外疱疹液作为一份样本。注明患者的姓名、样本的种类、采样时间、采样人等基本信息。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十四页，共33页。病原微生物样本粪便样本应在发病早期（3天以内）并且尽量在用抗生素治疗前采集，可以提高检出率（注：无论病人是否已经服药，均应进行大便采集。对氨苯甲酸可中和磺胺类抗生素。硫酸镁可中和四环素、土霉素、新霉素、多粘菌素、链霉素等抗生素）粪便样本中含有很多杂菌，但也应该在样本采集过程中注意无菌操作，防止杂菌污染。为提高检出率，最好采集新鲜粪便，采集脓血便或粘液便，陈旧样本影响检出率。液状粪便采集水样便或含絮状物的液状粪便2-5mL；成形粪便至少取蚕豆大小粪便1块（约5g）放于无菌采便管内，采样时注意勿将尿液或水混入粪便容器内，采样后尽快塞紧或旋紧容器。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十五页，共33页。病原微生物样本肛拭子样本

若无法获得粪便时，可用专用棉签用保存液或增菌液湿润过后插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm）轻轻转动一圈，取直肠表面的黏液后取出，迅速放入运送培养基或保存液中送检，为保证多个检验项目的开展，同一患者至少采集2支肛拭。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十六页，共33页。病原微生物样本尸检样本

应于死后尽可能早地无菌采取，放于无菌容器内，不要使用防腐剂；对于各种器官样本，解剖器材和盛装容器要分开。采集脑、肝、肺和肠淋巴结等重要组织样本，每一采集部位分别使用单独的消毒器械。每种组织应多部位取材，每部位应取2-3份约5-10g的组织，淋巴结2个，分别置于15-50mL无菌的有外螺旋盖的冻存管中，采样管外贴上标签，注明患者的姓名、样本种类、采样时间采样人等基本信息。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十七页，共33页。病原微生物样本脑脊液样本当患者出现神经系统症状时，可采集脑脊液样本，进行病原分离或核酸，抗体检测。采集时间为出现神经系统症状后3天内，采集方法采用腰椎穿刺，采集量至少1mL，尽可能3~5mL。采集后立即装入无菌带垫圈的冻存管中，脑膜炎奈瑟菌离体后会迅速自溶，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很容易死亡，因此，样本应立即送检并注意保温、防干燥，切不可置冰箱保存。采样管外贴上标签，注明患者的姓名、样本种类、采样时间采样人等基本信息。当患者出现神经系统症状时采集，检测IgM只需一份脑脊液。而检测IgG则需收集两次，分别于发病初期和恢复期采集。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十八页，共33页。病原微生物样本血液样本于患者发热初期或发热高峰时采集，并应尽量在抗菌药物治疗之前。如患者已用药，则应在下次给药前采集做血液病原培养时，严格用无菌穿刺法采肘静脉血，移入无菌的有螺口的抗凝的容器或血培养瓶中送检，或直接接种血平皿。血培养瓶接种比例一般按1:5-1:10，目的是稀释血液中的抗菌药物等杀菌物质。每例间隔0.5-1h采血两次，可提高阳性率和区分感染菌与皮肤污染菌。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第十九页，共33页。病原微生物样本血清需采集多份血清样本，至少急性期（发病7d内或发现时，主要用检测IgM和IgG）和恢复期（与急性期间隔2-4周，主要用于检测IgG）分别采集外周静脉血各5-6mL，分离后的血清分装于3个塑料螺口血清管中（每份0.5mL左右，一份用于检测，一份检测备份、一份留存），贴上标签注明相关信息。静脉采血时部位的局部皮肤应严格消毒，采血针头的内径适当，采血针头太细，将损伤红细胞，造成溶血。采血时，穿刺静脉的速度要快，而抽取血液时速度要适度，不能用力过猛。抽完后应卸下针头，将血液沿管壁缓慢注入试管内。如有抗凝剂，应缓慢将血液与抗凝剂轻轻摇动混匀。切忌在静脉注射处采取血样本。一般抽血时用7号针头；采血量大时，用8号针头。基本原则采集条件采集要求采样时间样本种类样本数量采集方法采集保存运输第二十页，共33页。病原微生物样本病原微生物样本的保存取决于运送时间的长短及不同病原微生物对干燥、温度、营养、pH值的耐受能力等。要能确保目标病原微生物的存活并抑制其它微生物的过度生长，应选择合适的培养基和保存温度。采集总体要求保存运输检测抗体的血清样本可在4℃保存约一个星期，超过一个星期必须在-20℃下冷冻保存。用于检测抗原或抗体的其它样本可以4-8℃保存24-28h，在-20℃可保存时间更长。注意全血/血细胞的样本不可冷冻运输。要求低温快速送检。4℃暂存立即（12h内）送达实验室，－20℃以下低温冷冻保藏，需长期保存的样本存于－70℃冰箱，防止核酸降解。免疫样本核酸样本第二十一页，共33页。病原微生物样本用于分离培养细菌的样本应在运送培养基中运送并保存于合适的温度。分离不同的病原菌使用的运送培养基也不同，一般冷藏运送（奈瑟菌属、流感嗜血杆菌应在20-36℃保温运送）。采集细菌样本保存运输用于分离病毒的样本，一般应放在保温容器（4℃）里，最好12h内送达实验室，最长不可超过24h，如不能立即分离病毒时，应将样本-20℃冷冻暂时保存。若长期储存，应在-70℃以下冻存。采集病毒拭子推荐使用灭菌人造纤维拭子（如聚丙烯纤维）和塑料棒注意：采集咽拭子或肛拭子等用于检测核酸时不能使用棉拭子和木质拭子棒，因为这类材料中含有核酸扩增抑制剂病毒采样液推荐使用：病毒保存液（含有蛋白质稳定剂、阻止细菌和真菌生长抗生素、缓冲液）目前市场有专用的病毒采样试剂盒卖病毒样本第二十二页，共33页。采集保存运输病原微生物样本样本必须放在大小合适的带螺旋盖、内有橡圈的塑料管里柠紧在塑料管上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、姓名等将密闭后的样本放入大小适合的塑料袋里密封，每袋装一份样本。同一患者两分以上样本，可放在同一个塑料袋内再次密封填写样本送检登记表（应包括的基本信息：姓名、性别、年龄、职业、现住址、发病日期、样本种类、采集日期、一般临床症状等），连同塑料管用另一塑料袋密封。将装样本的密封袋放入专用运输箱内，放入冰排用具有吸水和缓冲能力的材料填充所有容器必须印有生物危险标识运输，并在外包装上有标签标明寄送人和接收人的详细联系方式、包括日期和运输日期等样本应在带有冰袋或者冰排的专用运输箱中运输为维持4-8℃条件，运输箱中可填充冰袋或冰排；为保证-20℃条件，在运输箱中装干冰，但需确保二氧化碳能释放以防爆炸；为保证-70℃条件，可采用液氮来储存和运送样本运送要求专人（最好2人）专车总

体

要

求第二十三页，共33页。采集保存运输病原微生物样本根据其所运输病原体的传染性和感染后对个体或群体的危害程度不同，分为A类和B类。A类指人感染后发病的可能性大，传染性强，对人群危害性大的烈性感染性物质。高度怀疑具有严重危害性的感染性物质也属于A类。A类之外，仅具有一般危险性，引起感染的机会较少的感染性物质为B类联合国对感染性物质的运输分类第二十四页，共33页。采集保存运输病原微生物样本感染性及潜在感染性物质的运输应使用三层包装系统：内层容器、中层包装、外层包装将样品采用防水、防漏的内层容器包装并贴上指示内容物的标签后装入中层容器内层容器和中层容器间应放置足量的吸水性材料，以便内层容器打破或泄漏时能吸收溢出的所有液体。然后将中层容器固定在硬质外层容器中以免中层容器在运输过程中受到物理性损坏。感染性物质运输的包装系统第二十五页，共33页。采集保存运输病原微生物样本报卫生主管部门批准安排运送日期，安排日期确定后，通知接收实验室。（跨省：出发地初审，报国务院卫生部/兽医主管部门批准）样本运送的时间和运输方法

《病原微生物实验室生物安全管理条例》《人间传染的病原微生物名录》

《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）或样本运输管理规定》

样本应尽快运送到实验室，不应持续等待更多样本的收集。

样本的包装、容器和标识应符合《规定》要求，短途运送加冰保冷即可；

长途运送需加干冰保冷，不少于2人的专人护送，并采取相应的防护措施；

尽量陆路运输，不得通过公共电(汽)车和城市铁路，

发生样本被盗、被抢、丢失、泄漏，2小时内报告。高致病性物质运输要求第二十六页，共33页。H7N9近期重点采集的临床标本包括上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）血清标本应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清。如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。为避免标本反复冻融，保证标本检测质量，采集的呼吸道标本每份分为3管，每管不少于1ml。血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml。填写《不明原因肺炎病例/聚集性病例标本送检表》。标本的采集第二十七页，共33页。H7N9近期重点H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。病例的临床标本采集后，县级疾病预防控制机构和病例收治的医疗机构要密切配合，按照生物安全的相关规定进行包装，在24小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测。标本

的转送

和

检测第二十八页，共33页。H7N9近期重点当地流感监测网络实验室收到标本后24小时