实验9 酱油中氨基酸的测定

实验九酱油中氨基酸总量的测定

—甲醛法（微型滴定）实验目的实验原理实验步骤注意事项仪器试剂问题讨论数据处理实验目的1.了解酱油的用途及其制备。2.掌握酱油中氨基酸含量测定的原理和方法。3.学会微型滴定操作。4.掌握移液管和容量瓶的使用。实验原理氨基酸是一类两性物质，在溶液中以偶极离子的形式存在，不能用直接法滴定氨基酸上的羧基。

氨基与甲醛加成后，由于羟基为吸电子基团，氮原子上电子云密度显著降低，消弱了它接受质子的能力，使氨基的碱性消失，则可用强碱如NaOH来滴定氨基酸的羧基，从而测定酱油中氨基酸的总量。仪器与试剂1.仪器微型滴定管（3mL）、容量瓶（100mL）、移

液管（5mL、10mL）、锥形瓶（25mL）、烧

杯、电子天平（0.01g）、抽滤装置等。2.试剂酱油、HCHO（18%）、NaOH(约0.1mol·L-1)、

活性炭、酚酞指示剂（0.04%醇溶液）、滤纸等

实验步骤酱油脱色减压过滤微型滴定定容100mL用移液管取10.00mL酱油，加入4g活性炭，加热煮沸，脱色（搅拌）10min。减压过滤垫2层滤纸，倾注法过滤，洗涤时每次用水5mL，洗2-3次。酱油脱色定容将滤液转移至容量瓶中，并洗涤抽滤瓶2-3次，定容至100mL。

固液分离技术——减压过滤

容量瓶、比色管的使用——定容操作微型滴定从容量瓶中吸取5.000mL酱油稀释溶液，加3d酚酞，用NaOH滴定多余的酸.再加入中性甲醛4mL（18%），放置1min后，用NaOH滴定，终点颜色为微红色。主要操作1.移液操作

(1)移液管准备：自来水清洗三次，蒸馏水润洗3次，管壁外的水用滤纸擦干，管内的水用洗耳球吹干。移取溶液时，再用待取液润洗3次。

(2)取液：右手拿移液管，左手拿洗耳球，将溶液吸至刻度线以上，食指封口。

(3)放液：减轻食指压力，缓慢将溶液放至刻度处，将移液管口与承接容器轻靠，移液管竖直，承接容器倾斜，将溶液缓慢放至承接容器中（半滴处理）。2.定容操作

检漏—洗涤—无损转移—直立混匀—定容(1)检漏：容量瓶装满水，倒置、静置1min。(2)洗涤：自来水洗三次，蒸馏水润洗三次。(3)无损转移：将溶液无损转移至容量瓶中。(4)直立混匀：2/3刻度处，不盖容量瓶盖子摇匀。(5)定容：加入蒸馏水至刻度线，摇匀。3.微型滴定操作

微型滴定管的使用与酸碱滴定管相似(1)洗涤时类似移液管。

(2)插入塑料尖嘴以减少半滴误差，

尖嘴可重复使用。

(3)读数时3位小数。

项目IIIIII中和酱油中其它酸NaOH滴定的终体积Ve/mLNaOH滴定的初体积V0/mLNaOH中和酸体积V/mL氨基酸滴定NaOH滴定的终体积Ve/mLNaOH滴定的初体积V0/mLNaOH滴定氨基酸的体积V/mL氨态氮含量（g·100mL-1）平均值（g·100mL-1）偏差相对平均偏差数据处理注意事项1.抽滤瓶洗涤干净，抽滤时垫2层滤纸。2.洗涤时少量多次，每次用水5mL。3.用小烧杯取NaOH溶液。4.甲醛禁止敞口放置，滴一份加一份。5.微型滴定管的读数。6.移液管和容量瓶的使用。问题讨论1.实验所用中性甲醛为什么呈微红色？

答：甲醛中常含有微量甲酸，应预先以酚酞为指示剂，用NaOH溶液中和至溶液呈微红色。2.NaOH为非基准试剂，采用什