金凤花种子 超低温保存技术规程

T/CSMAXXXX－2018金凤花种子超低温保存技术规程范围本标准规定了金凤花[Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.]种子超低温保存过程中的术语和定义、种子的选择、种子前处理、种子保存量、种子冷冻方式、恢复培养等技术要求。本标准适用于金凤花种子的超低温长期贮藏。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验GB/T3543.6农作物种子检验规程水分测定GB/T3543.7农作物种子检验规程其他项目检验术语和定义下列术语和定义适用于本文件。金凤花Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.为豆科（Leguminosae）云实属（CaesalpiniaLinn.）常绿小乔木，是一种观赏性药用植物，别称洋金凤、黄蝴蝶。以根、茎皮入药，有解表、出汗之功效。此外，其花冠橙红色，边缘金黄色，如火焰蝴蝶般常年于枝头盛开，常用作园林栽培。收载于《中国中药资源志要（1994）》。金凤花果实Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.fruits荚果扁长圆形，基部稍弯，长6~10cm，宽1.5~2cm，果荚木质，花果期几乎全年，成熟时为浅褐色至黑褐色。内含6~9颗种子。金凤花种子Caesalpiniapulcherrima（L.）Sw.seeds金凤花的播种材料为完整种子，贮藏特性判断为顽拗性种子。种子黄绿色，倒卵形或三角状倒卵形，扁平；表面具水纹状横向网纹，种脐位于种子基部顶端，为灰白色长卵形小点，周围具黑褐色晕圈。种子超低温保存seedofcryopreservation指将经过前处理的金凤花种子置于液氮（-196℃）中保存。种子的选择果实采收花果期几乎全年，当果荚为浅褐色至黑褐色时，即可采收，去除果荚，取出种子。种子选择挑选发育饱满、完整、健康的种子，置于4℃冰箱中保存备用（存放时间不超过2个月）。种子前处理发芽率检测根据《GB/T3543.4农作物种子检验规程发芽试验》对种子进行发芽试验，能正常发芽的种子即为具活力的种子。清洗干净发芽盒，内铺一层滤纸，纯净水浸湿。随机选取50粒种子，清水洗净，整齐安放于发芽盒内，种粒之间保持一定距离以减少霉菌蔓延感染，定期观察发芽情况并记录。发芽率计算对发芽结果进行观察鉴定。记录正常幼苗、不正常幼苗、硬实、新鲜不发芽种子和死种子数。计算：发芽率=正常幼苗种子数/总的种子数×100%待保存的金凤花种子发芽率应≥80%。含水量范围用尼龙网袋包裹金凤花种子，置于盛有变色硅胶的干燥器内，硅胶与种子的体积比为7500:1，室温条件下干燥处理1~35h，在干燥过程中定期测定种子含水量，将种子含水量由20%~25%降至15%~19%。参照GB/T3543.6中的高恒温烘干法（130℃烘干1h）测定种子含水量（W0），W0=（鲜重-绝干重）/鲜重×100%。种子保存量金凤花种子保存量不少于300粒，以便后期的活力检测使用。种子冷冻方式金凤花种子超低温保存的冷冻方式为分步冷冻法，即将待保存的金凤花种子放入加有PVS2（室温）的5mL冻存管（每管25粒种子）中，置于4℃冰箱中0.5h，取出立即放入-20℃冰柜中1h，之后迅速投入液氮中保存。恢复培养种子解冻处理液氮中至少冻存24h后，取出2个冻存管，立即放入40℃水浴中快速解冻2min，然后用洗涤液DS（每升MS溶液中含1.2mol蔗糖）浸泡5min，并用无菌水洗涤3次。冻后种子生活力检测取出25粒解冻后的种子，参照5.1~5.2生活力检测方法，进行超低温保存后的初始生活力检测