蓝芩口服液质量标准研究课件

蓝芩口服液LanqinKoufuye蓝芩口服液1板蓝根黄芩栀子黄柏胖大海板蓝根黄芩栀子黄柏胖大海2水提醇沉法[1]按处方称取合格药材，加适量水煎煮3次，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.10，加入乙醇，使含醇量在60%左右，于0~5

℃下静置24h以上，取上清液，减压回收乙醇至尽，浓缩至相对密度为1.15~1.20，加适量纯化水调成体积约为药材量的0.6倍，即得蓝芩清膏。药材浓缩乙醇静置取上清液浓缩蓝芩清膏纯化水煎煮水调节pH加水搅匀滤过灌装灭菌参考文献:[1]李赛荣,曹玉明,卜令斌.蓝芩口服液絮凝澄清工艺研究[J].中国药业,2005,14(2):51-52.水提醇沉法[1]药材浓缩乙醇静置取上清液浓缩蓝芩清膏纯化水煎3本品为棕红色的澄清液体，味甜、微苦。

本品为棕红色的澄清液体，味甜、微苦。4鉴别、检查、含量测定1、用薄层色谱法（TLC）对蓝芩口服液中黄芩苷、栀子苷、盐酸小檗碱等主要成分进行鉴别。2、主要通过检验蓝芩口服液的相对密度、PH值及其他有关规定项应符合中国药典规定。3、用高效液相色谱法（HPLC）对蓝芩口服液中栀子苷含量进行测定。鉴别、检查、含量测定1、用薄层色谱法（TLC）对蓝芩口服液5取本品5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

供试品对照品图1黄芩苷TLC图取本品5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为6取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取【鉴别】(1)项的供试品溶液与上述对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

供试品对照品图2栀子苷TLC图取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品7取本品10ml，用正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，加在已处理好的中性氧化铝柱(中性氧化铝3g，100～120目，内径约10mm，干法装柱)上，以氯仿25ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。供试品对照品图3盐酸小檗碱TLC图取本品10ml，用正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提8相对密度

应不低于1.05(中国药典2010年版一部附录ⅦA)。pH值

应为4.0～5.5(中国药典2010年版一部附录ⅦG)。其他

应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录ⅠJ)。相对密度应不低于1.05(中国药典2010年版一部附录9照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸氢二钠-甲醇(70:30)为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于1200。对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品4mg，加50％甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。供试品溶液的制备

精密量取本品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液用0.45μm的微孔滤膜滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

本品每支含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于25.0mg。照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。10HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量[2]1

仪器与试药岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，岛津SPD-10AVP型紫外可见光检测器。甲醇(色谱纯)，磷酸氢二钠(分析纯)，栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所)，蓝芩口服液供试品(江苏扬子江药业集团生产,批号:030426和表1)参考文献:[2]黄淑萍,李雪兰,陈铁山,张玉斌,付永山.HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量[J].中国药事,2005,19(11):667-669.批号030306030531030601030602030819030917030919031017031018031019原方法(mg·ml-1)6.86.65.35.85.66.15.55.85.04.5HPLC(mg·ml-1)6.085.635.356.115.786.295.116.114.474.41表110批样品的栀子苷含量测定表HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量[2]参考文献:批号0112方法及结果2.1色谱条件:色谱柱:KronasilC18柱

(5μm,4.6mmx250mm);流动相:0.05mol·L-1磷酸二氢钠-甲醇(70:30);流速:1.0mol·min-1,检测波长:238nm。柱温:室温;进样量:20μl;理论板数:按栀子苷峰计算应不低于1200。2.2溶液配制对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品4mg,置于100ml量瓶中,加入甲醇-水

(1:1)至刻度,摇匀后作为对照品溶液。供试品溶液的制备

精密量取蓝芩口服液1ml置于10ml量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,静置。取上清液用滤膜(0.45μm)过滤,再精密吸取续滤液1ml置10ml量瓶中,加甲醇-水

(1:1)稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。阴性对照溶液的制备

取除栀子药材之外的其它药材,按【制法】项下的方法制备样品,精密量取样品1ml,同法制备阴性对照溶液。测定

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl,注入液相色谱仪、记录色谱图,测定,即得。2方法及结果12本品中以每支含栀子苷(C17H24O10)计,不得低于25mg。051015t/min051015t/min051015t/min图栀子苷HPLC色谱图abc1212a对照品；b供试品；c阴性对照1栀子苷峰；2黄芩苷峰本品中以每支含栀子苷(C17H24O10)计,不得13

2.3线性关系考察精密称取4.8mg栀子苷对照品,置于100ml量瓶中,摇匀作为贮备液,再精密吸取贮备溶液2、4、6、8、10ml分别置于10ml量瓶中,加入甲醇-水(1:1)稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。再精密吸取各对照品溶液20μl,注入色谱仪,记录栀子苷的峰面积。以进样量为横坐标,栀子苷峰面积为纵坐标,得回归方程:y=280.1+80093.2x,r=0.9999。结果表明栀子苷在

0.192~0.96μg·ml-1范围内线性关系良好。2.4

精密度试验取样品溶液,照含量测定项下的方法进行测定,连续进样6次,测得峰面积平均值为

46061,相对标准偏差为1.3%。2.5

重复性试验取同一批号样品,按含量测定项下方法制备5份供试品溶液进行测定,栀子苷平均含量为4.37mg/支,RSD为1.2%。2.6

稳定性试验将批号

(030426)样品依法制备,每隔

2小时测定一次,平均峰面积为

42459,RSD为1.3%,结果表明10小时之内样品稳定。

2.3线性关系考察142.7

加样回收试验精密吸取蓝芩口服液(含量4.41mg·ml-1)1ml置于10ml量瓶中,再加入精密称取的栀子苷对照品,按照供试品的处理和测定方法进行测定,计算栀子苷的回收率,见表2。样品中栀子苷的量(mg)4.41加入的栀子苷量(mg)3.83.84.04.04.84.8测出的栀子苷量(mg)8.198.158.378.329.109.14回收率(%)99.598.499.097.897.998.5平均回收率(%)98.5RSD(%)0.66表2栀子苷加样回收率的测定结果表2.7加样回收试验样品中栀子苷的量(mg)4.41152.8

样品的测定原方法:精密量取样品溶液10μl,照薄层色谱法试验,点于硅胶

GF254薄层板上,使成条状。另取栀子苷对照品溶液

(1mg•ml-1)5μl点于供试品条斑一侧作为对照,以氯仿-甲醇(3:1)为展开剂,展开,晾干。置紫外光灯(254和365)下检视,刮取样品色谱与栀子苷对照色谱相应位置上的斑点。同时刮取相应位置上等面积的空硅胶GF254,分别置于10ml具塞试管中,各精密加10ml甲醇,剧烈振摇5分钟,离心,倾取上清液。以第二管作空白,用分光光度法试验,测定在239nm波长处的吸收度,根据标准曲线计算出样品溶液中栀子苷的含量。取10批样品,按原含量测定方法(薄层扫描分光光度法)与修改的含量测定方法测定(HPLC法),结果见表

1。批号030306030531030601030602030819030917030919031017031018031019原方法(mg·ml-1)6.86.65.35.85.66.15.55.85.04.5HPLC(mg·ml-1)6.085.635.356.115.786.295.116.114.474.41表110批样品的栀子苷含量测定表结果表明:两种方法测定的结果相差不大,高效液相色谱法可行。2.8样品的测定批号03030603053103060163讨论原方法为薄层扫描分光光度法,操作繁琐,误差大。而高效液相色谱法操作简单方便,系统误差小,故改用高效液相色谱法进行其含量测定。3讨论17清热解毒，利咽消肿。用于急性咽炎、肺胃实热证所致的咽痛、咽干、咽部灼热等症。口服，一次20ml，一日3次。清热解毒，利咽消肿。用于急性咽炎、肺胃实热证所致的咽痛、咽干18每支装10ml。密封，置阴凉处。每支装10ml。密封，置阴凉处。19蓝芩口服液质量标准研究课件20蓝芩口服液LanqinKoufuye蓝芩口服液21板蓝根黄芩栀子黄柏胖大海板蓝根黄芩栀子黄柏胖大海22水提醇沉法[1]按处方称取合格药材，加适量水煎煮3次，合并煎煮液，浓缩至相对密度为1.10，加入乙醇，使含醇量在60%左右，于0~5

℃下静置24h以上，取上清液，减压回收乙醇至尽，浓缩至相对密度为1.15~1.20，加适量纯化水调成体积约为药材量的0.6倍，即得蓝芩清膏。药材浓缩乙醇静置取上清液浓缩蓝芩清膏纯化水煎煮水调节pH加水搅匀滤过灌装灭菌参考文献:[1]李赛荣,曹玉明,卜令斌.蓝芩口服液絮凝澄清工艺研究[J].中国药业,2005,14(2):51-52.水提醇沉法[1]药材浓缩乙醇静置取上清液浓缩蓝芩清膏纯化水煎23本品为棕红色的澄清液体，味甜、微苦。

本品为棕红色的澄清液体，味甜、微苦。24鉴别、检查、含量测定1、用薄层色谱法（TLC）对蓝芩口服液中黄芩苷、栀子苷、盐酸小檗碱等主要成分进行鉴别。2、主要通过检验蓝芩口服液的相对密度、PH值及其他有关规定项应符合中国药典规定。3、用高效液相色谱法（HPLC）对蓝芩口服液中栀子苷含量进行测定。鉴别、检查、含量测定1、用薄层色谱法（TLC）对蓝芩口服液25取本品5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一用4％醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

供试品对照品图1黄芩苷TLC图取本品5ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为26取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取【鉴别】(1)项的供试品溶液与上述对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿-甲醇(3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

供试品对照品图2栀子苷TLC图取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品27取本品10ml，用正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提取液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，加在已处理好的中性氧化铝柱(中性氧化铝3g，100～120目，内径约10mm，干法装柱)上，以氯仿25ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6:3:1.5:1.5:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点。供试品对照品图3盐酸小檗碱TLC图取本品10ml，用正丁醇提取2次，每次10ml，合并正丁醇提28相对密度

应不低于1.05(中国药典2010年版一部附录ⅦA)。pH值

应为4.0～5.5(中国药典2010年版一部附录ⅦG)。其他

应符合合剂项下有关的各项规定(中国药典2010年版一部附录ⅠJ)。相对密度应不低于1.05(中国药典2010年版一部附录29照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸氢二钠-甲醇(70:30)为流动相；检测波长为238nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于1200。对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品4mg，加50％甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，即得。供试品溶液的制备

精密量取本品1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置，取上清液用0.45μm的微孔滤膜滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

本品每支含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于25.0mg。照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录ⅥD)测定。30HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量[2]1

仪器与试药岛津LC-10AT型高效液相色谱仪，岛津SPD-10AVP型紫外可见光检测器。甲醇(色谱纯)，磷酸氢二钠(分析纯)，栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所)，蓝芩口服液供试品(江苏扬子江药业集团生产,批号:030426和表1)参考文献:[2]黄淑萍,李雪兰,陈铁山,张玉斌,付永山.HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量[J].中国药事,2005,19(11):667-669.批号030306030531030601030602030819030917030919031017031018031019原方法(mg·ml-1)6.86.65.35.85.66.15.55.85.04.5HPLC(mg·ml-1)6.085.635.356.115.786.295.116.114.474.41表110批样品的栀子苷含量测定表HPLC法测定蓝芩口服液中的栀子苷含量[2]参考文献:批号0312方法及结果2.1色谱条件:色谱柱:KronasilC18柱

(5μm,4.6mmx250mm);流动相:0.05mol·L-1磷酸二氢钠-甲醇(70:30);流速:1.0mol·min-1,检测波长:238nm。柱温:室温;进样量:20μl;理论板数:按栀子苷峰计算应不低于1200。2.2溶液配制对照品溶液的制备

精密称取栀子苷对照品4mg,置于100ml量瓶中,加入甲醇-水

(1:1)至刻度,摇匀后作为对照品溶液。供试品溶液的制备

精密量取蓝芩口服液1ml置于10ml量瓶中,加入甲醇稀释至刻度,摇匀,静置。取上清液用滤膜(0.45μm)过滤,再精密吸取续滤液1ml置10ml量瓶中,加甲醇-水

(1:1)稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。阴性对照溶液的制备

取除栀子药材之外的其它药材,按【制法】项下的方法制备样品,精密量取样品1ml,同法制备阴性对照溶液。测定

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl,注入液相色谱仪、记录色谱图,测定,即得。2方法及结果32本品中以每支含栀子苷(C17H24O10)计,不得低于25mg。051015t/min051015t/min051015t/min图栀子苷HPLC色谱图abc1212a对照品；b供试品；c阴性对照1栀子苷峰；2黄芩苷峰本品中以每支含栀子苷(C17H24O10)计,不得33

2.3线性关系考察精密称取4.8mg栀子苷对照品,置于100ml量瓶中,摇匀作为贮备液,再精密吸取贮备溶液2、4、6、8、10ml分别置于10ml量瓶中,加入甲醇-水(1:1)稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。再精密吸取各对照品溶液20μl,注入色谱仪,记录栀子苷的峰面积。以进样量为横坐标,栀子苷峰面积为纵坐标,得回归方程:y=280.1+80093.2x,r=0.9999。结果表明栀子苷在

0.192~0.96μg·ml-1范围内线性关系良好。2.4

精密度试验取样品溶液,照含量测定项下的方法进行测定,连续进样6次,测得峰面积平均值为

46061,相对标准偏差为1.3%。2.5

重复性试验取同一批号样品,按含量测定项下方法制备5份供试品溶液进行测定,栀子苷平均含量为4.37mg/支,RSD为1.2%。2.6

稳定性试验将批号

(030426)样品依法制备,每隔

2小时测定一次,平均峰面积为

42459,RSD为1.3%,结果表明10小时之内样品稳定。

2.3线性关系考察342.7

加样回收试验精密吸取蓝芩口服液(含量4.41mg·ml-1)1ml置于10ml量瓶中,再加入精密称取的栀子苷对照品,按照供试品的处理和测定方法进行测定,计算栀子苷的回收率,见表2。样品中栀子苷的量(mg)4.41加入的栀子苷量(mg)3.83.84.04.04.84.8测出的栀子苷量(mg)8.198.