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文档简介

1、大肠杆菌培养基的优化及摇瓶种子制备目录LB培养基配方优化接种量操作过程及注意事项操作中的失误观察结果及分析LB培养基的制备分离单菌落观察结果种子制备操作中得失误 培养基的优化摇瓶种子的制备生长曲线制作详细过程培养基的优化LB培养基配方10g/L5g/L10g/L加入2%的琼脂根据需要优化接种量1%2%4%6%操作过程及注意事项接种量1%2%4%8%菌液体积0.4ml0.8ml1.6ml3.2ml准备四个250mL的锥形瓶，分别加入40mL的蒸馏水、0.4gNacl、0.2g酵母浸粉、0.4g蛋白胨。用NaOH调PH为7.4将配置好的种子瓶放置在摇床上培养12至24小时，设置摇床转速为180r/

2、min，温度为37摄氏度注意：在放置时，不要将摇瓶卡的太紧，防止摇瓶在摇床运转过程中破裂。操作中得失误用100ml的锥形瓶盛装种子液摇瓶种子制备LB培养基的制备配置300ml培养基Nacl 3g 蛋白胨 1.5g酵母浸粉 3gNaOH调PH为7.440ml制种子250ml制平板5ml斜面300ml培养基高压灭菌盛有250ml培养基的锥形瓶盛有40ml培养基的锥形瓶10支试管：两支盛有5ml培养基的试管、一支盛有10ml蒸馏水、七支盛有9ml蒸馏水，塞好棉塞。7支1ml的移液管14个平板7个涂布器全部用报纸包好放入高压蒸汽锅中灭菌30min分离单菌落涂布稀释梯度为0.1 0.01 0.001 0.0001 0.00001 0.000001 0.0000001 0.0000001吸取0.2ml进行平板涂布以上操作均在超净台下完成四区划线接种环蘸取母液在酒精灯的无菌区打开平板 盖画第一区，第一区尽量小一些。灼烧接种环，旋转平板90度画第二区，第二区一定要与第一区有接触。画第三区同第二区。画第四区时可以不灼烧接种环，直接划线次操作在超净台下进行将制作好的平板放入恒温箱中培养24至48小时，温度控制在37摄氏度。观察结果种子制备挑取单菌落至种子瓶放入摇床上培养12小时，设置温度为37摄氏度，转速为180r/min。操作

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