生物安全实验室操作技术规范

1、20092009年，北京理工大学爆炸事故年，北京理工大学爆炸事故原因：厌氧培养箱压力不稳定原因：厌氧培养箱压力不稳定20152015年，清华大学实验室爆炸事故年，清华大学实验室爆炸事故原因：氢气瓶爆炸起火原因：氢气瓶爆炸起火20082008年，云南大学实验室发年，云南大学实验室发生化学爆炸，导致一名男博生化学爆炸，导致一名男博士毁容断掌士毁容断掌20102010年，东北农业大学动物医年，东北农业大学动物医学实验室因未按规定对山羊标学实验室因未按规定对山羊标本进行检疫，导致本进行检疫，导致2828人感染严人感染严重布鲁氏杆菌传染。重布鲁氏杆菌传染。生物危险生物危险辐射危险辐射危险个体防护个体防护

2、危险废物的处理危险废物的处理常用仪器使用的注意事项常用仪器使用的注意事项化学危险化学危险主要是由标本携带的可传染病毒等主要是由标本携带的可传染病毒等生物危险生物危险 生物安全实验室（生物安全实验室（Biosafety laboratory）是通过实验室设计建造、实验）是通过实验室设计建造、实验设备的配置、个人防护装备的使用，通过严格遵守预先制定的标准操作程序和设备的配置、个人防护装备的使用，通过严格遵守预先制定的标准操作程序和管理规范等综合措施，确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害，管理规范等综合措施，确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害，确保周围环境不受其污染的实验室

3、。确保周围环境不受其污染的实验室。 根据实验室生物安全防护等级分为：根据实验室生物安全防护等级分为：lBSL-1（最低）：适用于通常情况下不会引起人畜疾病的微生物（最低）：适用于通常情况下不会引起人畜疾病的微生物lBSL-2：适合与从事对人和环境有中度危害的生物因子的工作。：适合与从事对人和环境有中度危害的生物因子的工作。lBSL-3：适用于主要通过呼吸途径吸入使人传染上严重的甚至是致死疾病：适用于主要通过呼吸途径吸入使人传染上严重的甚至是致死疾病的微生物及其毒素。的微生物及其毒素。lBSL-4（最高）：适用于对人体、动植物或环境具有高度的危险性，通过（最高）：适用于对人体、动植物或环境具有高

4、度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效疫苗或治疗方法的致病性微气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效疫苗或治疗方法的致病性微生物或未知传播风险的有关病原体及其毒素生物或未知传播风险的有关病原体及其毒素临床样本均具有不同程度的潜在传染性临床样本均具有不同程度的潜在传染性l 血液传播性病原体（如血液传播性病原体（如HBV和和HIV）的操作应在）的操作应在BSL-2下进行下进行l 应由受过培训的人员采集患者的血样应由受过培训的人员采集患者的血样l 操作时应戴手套及眼睛和粘膜的保护装置操作时应戴手套及眼睛和粘膜的保护装置l 血液和血清应当小心吸取，不能倾倒血液和血清应当小心吸取

5、，不能倾倒l 适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出的标本适当的消毒剂来清洗喷溅和溢出的标本l 感染性废物应经过灭菌和焚烧处理感染性废物应经过灭菌和焚烧处理实验室常见化学危险品及标识实验室常见化学危险品及标识化学危险化学危险乙醚、乙醇、乙醛、苯、甲醇强酸（浓盐酸、浓硫酸）、强碱（氢氧化钠）或其他腐蚀品（氯化铜、甲醛溶液）受热、受压或撞击时产生爆炸或燃烧，如叠氮钠、TNT高温、摩擦、撞击等易燃烧，甚至爆炸，如硝酸盐等钋、镭、钴等，高毒甚至剧毒挥发性强，可以通过口鼻等进入身体危害健康Trizol含有苯酚，有毒性和刺激性，应避免皮肤接触。眼睛接触可能导致失明，皮肤大量接触可能致死。如不慎接触皮肤，应立即用大量

6、去垢剂和水冲洗。溴化乙锭溴化乙锭(EB)强诱变剂，嵌入碱基分子中导致错配，高致癌性。应避免皮肤接触或者吸入，操作时穿戴合适的防护服、手套和护目镜。焦磷酸二乙酯（焦磷酸二乙酯（DEPC）是一种潜在的蛋白质变质剂，且为可疑的致癌剂。开启时瓶口不要指向操作者或其他人。瓶内压可导致喷溅。戴好手套并穿实验室工作服，在通风橱内操作。三羟甲基氨基甲烷三羟甲基氨基甲烷( (Tris)吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套、口罩和护目镜氯仿（三氯甲烷）氯仿（三氯甲烷）刺激眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜，为一种致癌剂。有肝、肾毒性。有挥发性。避免吸入蒸汽。戴好手套和护目镜。在通风橱内操作。生物实验室常见危险品生物实验

7、室常见危险品-巯基乙醇巯基乙醇吸入或皮肤吸收可致命，摄入有害。高浓度溶液对黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛有极大损害。-巯基乙醇有难闻气味，应戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。丙烯酰胺丙烯酰胺为一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收（有累积效应）。应戴好手套和面罩，在化学通风橱内操作。蛋白酶蛋白酶K K有刺激性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套口罩和护目镜。四甲基乙烯二胺（四甲基乙烯二胺（TEMED）易燃易挥发，具有腐蚀性和强神经毒性。避免皮肤接触和吸入。过硫酸铵过硫酸铵对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的破坏性。吸入可致命。戴好手套和护目镜，穿好防护服。必须在化学通风橱内操作。操作后要彻底

8、清洗。十二烷基硫酸钠（十二烷基硫酸钠（SDSSDS）有毒性和刺激性，有严重损伤眼睛的危险。吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。戴好手套和护目镜，不要吸入粉尘。甲醇甲醇有毒，可致失明。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。要有足够的通风以减少挥发气。不要吸入这些气体。戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。 丙酮丙酮易燃易挥发，对眼鼻喉有刺激性，对中枢神经有一定的麻醉作用，避免皮肤接触或吸入。甲醛甲醛有剧毒性和挥发性。也是一种致癌剂。可通过皮肤吸收，对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有刺激或损伤。避免吸入气体。戴好手套和护目镜。始终在通风橱内操作。远离热源、火花和明火。 过氧化氢过氧化氢有腐蚀性、毒性，对皮肤有强

9、损害性。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。苯酚苯酚有剧毒性和高度腐蚀性，可致严重烧伤。吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。戴好合适的手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内操作。若有皮肤接触药物，可用大量清水冲洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。化学品的存储化学品的存储u在适宜的温度和湿度下储存化学品，须在适宜的温度和湿度下储存化学品，须远离高热源远离高热源，如烤箱如烤箱；避免阳光直；避免阳光直射，如靠近窗台射，如靠近窗台u定期目测原料和包装容器：颜色、是否溢出、腐蚀等定期目测原料和包装容器：颜色、是否溢出、腐蚀等u不得将化学品存放在实验台上，防止被碰倒不得将化学

10、品存放在实验台上，防止被碰倒u不得将化学品存放在地面上，即使是临时放置也不允许不得将化学品存放在地面上，即使是临时放置也不允许u不能将通风橱用作化学品的存放地，以免破坏通风橱的通风效果不能将通风橱用作化学品的存放地，以免破坏通风橱的通风效果u不得将易漏有害性或腐蚀性化学品存放在视力水平以上的药品架上不得将易漏有害性或腐蚀性化学品存放在视力水平以上的药品架上主要是主要是紫外线紫外线（UVUV）超净工作台超净工作台琼脂糖凝胶电泳成像系统琼脂糖凝胶电泳成像系统紫外灭菌后一定要关闭紫外灯，并且打开鼓风紫外灭菌后一定要关闭紫外灯，并且打开鼓风琼脂糖凝胶回收时一定要加放紫外挡板或者佩戴防护镜。琼脂糖凝胶回

11、收时一定要加放紫外挡板或者佩戴防护镜。辐射危险辐射危险个体防护个体防护实验室人员进出实验室人员进出进入进入退出退出公共公共清洁区清洁区更衣室更衣室缓冲间缓冲间污染区污染区污染区污染区缓冲间缓冲间更衣室更衣室公共公共清洁区清洁区淋浴间淋浴间 在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感在进行可能接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘手套用完后，应先消毒再摘除，随后必除，随后必须须认真认真洗洗手手。在。在处理完感染性实验材料和动物后，以及在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开

12、实验室工作区域前，都必须洗手离开实验室工作区域前，都必须洗手。禁止非工作人员人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可禁止非工作人员人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。进入。在实验室工作区在实验室工作区禁止吸烟禁止吸烟。禁止在实验室放置食物、饮料及类。禁止在实验室放置食物、饮料及类似的存在有潜在的从手到口的接触途径的其他物质。禁止用实验室的似的存在有潜在的从手到口的接触途径的其他物质。禁止用实验室的冰箱（柜）等储存个人物品。冰箱（柜）等储存个人物品。在实验室工作区应在实验室工作区应穿实验服或防护服穿实验服或防护服，服装应符合实验室设备的要，服装应符合实验室设备的要求求, ,鞋子

13、应具有一定的防滑功能。处理腐蚀性或毒性物质时必须做好防鞋子应具有一定的防滑功能。处理腐蚀性或毒性物质时必须做好防护工作护工作, ,应使用安全镜、面罩或其他的眼睛和面部防护用品。应使用安全镜、面罩或其他的眼睛和面部防护用品。严禁穿着严禁穿着实验室服离开实验室工作区域实验室服离开实验室工作区域。在实验工作区头发不可下垂，避免与污染物质接触或影响实验操作，在实验工作区头发不可下垂，避免与污染物质接触或影响实验操作，有此类危险的饰物应避免带入工作区。不可留长胡须。有此类危险的饰物应避免带入工作区。不可留长胡须。常用仪器使用的注意事项常用仪器使用的注意事项离心机离心机u在装载离心管后应在装载离心管后应正

14、确平衡正确平衡u离心管应始终牢固盖紧离心管应始终牢固盖紧u放置好离心管后盖上盖子才可开始离心放置好离心管后盖上盖子才可开始离心u离心机放置高度应使实验人员能看到离心机内部离心机放置高度应使实验人员能看到离心机内部u有危险性的微生物，必须使用可封口的离心桶有危险性的微生物，必须使用可封口的离心桶高压灭菌锅高压灭菌锅灭菌条件组合灭菌条件组合 134oC 3min，126oC 10min，121oC 15min， 115oC 25min注意事项注意事项l物品应放在空气能排出并具有良好渗透性的容器中，物品应放在空气能排出并具有良好渗透性的容器中，包装稍松散，包装稍松散，待灭菌的物品放置不宜过紧。待灭菌

15、的物品放置不宜过紧。l灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，灭菌完毕后，不可放气减压，否则瓶内液体会剧烈沸腾，冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。冲掉瓶塞而外溢甚至导致容器爆裂。待温度下降到待温度下降到80以下以下后才可打开门取出物品。后才可打开门取出物品。烘箱烘箱u烘箱严禁烘焙易燃、易爆物品。烘箱严禁烘焙易燃、易爆物品。u使用烘箱时注意底层散热板上不能放置物品。使用烘箱时注意底层散热板上不能放置物品。u烘箱内物品不要塞得过满，以免影响热气流流通。烘箱内物品不要塞得过满，以免影响热气流流通。u当烘箱进行高温烘焙时（如当烘箱进行高温烘焙时（如200 200 以上），严禁直接打开箱门。以上

16、），严禁直接打开箱门。冷空气突然进入可能使玻璃门及烘箱内玻璃制品因骤冷而破裂。冷空气突然进入可能使玻璃门及烘箱内玻璃制品因骤冷而破裂。u烘箱周围烘箱周围2米范围内不得放置或堆积任何易燃、易爆、易挥发性米范围内不得放置或堆积任何易燃、易爆、易挥发性物品，如：汽油、纸类、二甲苯、稀释剂等。物品，如：汽油、纸类、二甲苯、稀释剂等。u烘箱温度不能超过最高阈值。当利用烘箱灭菌需要较高温度烘箱温度不能超过最高阈值。当利用烘箱灭菌需要较高温度（160160以上）时，不能放置纸、棉塞等低燃点易燃物。以上）时，不能放置纸、棉塞等低燃点易燃物。u严禁过夜使用烘箱，因为当烘箱温控系统出现故障时会导致温度严禁过夜使用

17、烘箱，因为当烘箱温控系统出现故障时会导致温度不断升高，容易引发安全事故。不断升高，容易引发安全事故。应在每个工作台上放置盛放废弃物的容器、盘子或广口瓶，最好是不易破碎的应在每个工作台上放置盛放废弃物的容器、盘子或广口瓶，最好是不易破碎的容器容器( (如塑料制品如塑料制品) )。当使用消毒剂时，应使废弃物充分接触消毒剂。当使用消毒剂时，应使废弃物充分接触消毒剂( (即不能有气即不能有气泡阻隔泡阻隔) )，并根据所使用消毒剂的不同保持适当接触时间。盛放废弃物的容器在，并根据所使用消毒剂的不同保持适当接触时间。盛放废弃物的容器在重新使用前应高压灭菌并清洗。重新使用前应高压灭菌并清洗。废弃物的处理废弃

18、物的处理尿、胸水、腹水、脑脊液、涎液、胃液、肠液、关节腔液等在含有效氯消毒液中尿、胸水、腹水、脑脊液、涎液、胃液、肠液、关节腔液等在含有效氯消毒液中作用半小时以上，随后交由有资质的医疗废弃物处理机构进行处理。作用半小时以上，随后交由有资质的医疗废弃物处理机构进行处理。痰、脓、血、粪痰、脓、血、粪(包括动物粪便包括动物粪便)及其他液体标本在含有效氯消毒液中作用及其他液体标本在含有效氯消毒液中作用2小时以小时以上后交由有资质的医疗废弃物处理机构进行处理。上后交由有资质的医疗废弃物处理机构进行处理。对废酸、废碱等废液采用中和法、稀释法等稀释至对废酸、废碱等废液采用中和法、稀释法等稀释至pH值为中性时方可排入下水道。值为中性时方可排入下水道。液体废弃标本液体废弃标本 带有血凝块等的废弃样品管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和带有血凝块等的废弃样品管，在加盖后应当放在适当的防漏容器内高压灭菌和(或或)焚烧。焚烧。固体废弃物标本固体废弃物标本 剩余标本，如组织器官、动物尸体、检验后的废弃标本及其容器，如塑料袋、纸剩余标本，如组织器官、动物尸体、检验后的废弃标本及其容器，如塑料袋、纸袋袋，应及时交由医疗废弃物处理机构处理。，应及时交由医疗废弃物处理机构处理。检