兰花组织培养

1、兰花组织培养兰花组织培养 兰花是整个兰科植物兰花是整个兰科植物( Orchidaceae)的总称，是开花植物的总称，是开花植物中最大的家族之一，是单子叶植物中最高度演化的一科，中最大的家族之一，是单子叶植物中最高度演化的一科，有有6个亚科个亚科730多属多属25000余种，广泛分布于全球各地。余种，广泛分布于全球各地。 兰花在中国约有兰花在中国约有170个属个属1200余种，分布较为广泛，几乎余种，分布较为广泛，几乎全国各省都有分布。全国各省都有分布。 兰花具有极高的观赏价值，形成兰花产业。兰花具有极高的观赏价值，形成兰花产业。 兰花具有药用价值。兰花具有药用价值。兰花主要繁殖方法 分株繁殖分

2、株繁殖 种子繁殖种子繁殖 组织培养组织培养原球茎和原球茎和类原球茎类原球茎原球茎原球茎(Protocorm)是指兰花种子萌发过程中的一种形态学结构：种是指兰花种子萌发过程中的一种形态学结构：种子的幼胚吸水膨胀，中部的胚细胞分裂增殖，突破合点端种皮形成球子的幼胚吸水膨胀，中部的胚细胞分裂增殖，突破合点端种皮形成球形或椭球形形或椭球形 。在兰科植物的组织培养中，根尖、叶片等适宜外植体也可诱导类似原在兰科植物的组织培养中，根尖、叶片等适宜外植体也可诱导类似原球茎组织结构，即类原球茎或拟原球茎。球茎组织结构，即类原球茎或拟原球茎。类原球茎类原球茎(Protocorm-like body, PLB)一词

3、是由一词是由Morel在在1960年提出的，年提出的，用来描述兰科植物组培过程中产生的类似种子萌发过渡形态用来描述兰科植物组培过程中产生的类似种子萌发过渡形态原球原球茎的一种特殊组织结构茎的一种特殊组织结构:在兰花组织培养中，可由茎尖分生组织等在兰花组织培养中，可由茎尖分生组织等（而不是种子）诱导形成类似其种子原球茎的组织结构。（而不是种子）诱导形成类似其种子原球茎的组织结构。 兰花外植体的选择和类原球茎增殖兰花外植体的选择和类原球茎增殖 外植体的选择直接关系到类原球茎的诱导。外植体的选择直接关系到类原球茎的诱导。 在组织培养中幼嫩部位一般不容易褐化，因此常选取较幼在组织培养中幼嫩部位一般不容

4、易褐化，因此常选取较幼嫩且生长旺盛的部位诱导类原球茎。嫩且生长旺盛的部位诱导类原球茎。 茎尖、叶片和种子是诱导类原球茎的理想外植体来源。茎尖、叶片和种子是诱导类原球茎的理想外植体来源。 花瓣、萼片、子房、休眠芽、侧芽、花梗节间段、根尖等花瓣、萼片、子房、休眠芽、侧芽、花梗节间段、根尖等均可作为外植体诱导出原球茎。均可作为外植体诱导出原球茎。茎尖和侧芽作为外植体茎尖和侧芽作为外植体茎尖和侧芽是最早也是使用频率最高的兰花外植体。茎尖和侧芽是最早也是使用频率最高的兰花外植体。茎尖和侧芽顶端分生区细胞的分裂能力强，容易诱导出类原球茎。茎尖和侧芽顶端分生区细胞的分裂能力强，容易诱导出类原球茎。大花蕙兰（

5、大花蕙兰（Cymbidium） 、卡特丽亚、卡特丽亚(Cattleya) 、石斛兰、石斛兰( Dendrobium )、墨兰和建兰等均成功用茎尖诱导出大量类原球茎。、墨兰和建兰等均成功用茎尖诱导出大量类原球茎。对蝴蝶兰对蝴蝶兰( Phalaeanopsis ) 、仙指甲兰、仙指甲兰( Aerides) 等用茎尖作为外植体等用茎尖作为外植体有可能影响开花性状，有可能影响开花性状， 因此需要寻找其他外植体。因此需要寻找其他外植体。叶片作为外植体叶片作为外植体 叶片作为外植体既可减少对母株的伤害，取材又不叶片作为外植体既可减少对母株的伤害，取材又不受季节的限制，且数量多，是比较理想的外植体材受季节的

6、限制，且数量多，是比较理想的外植体材料来源。料来源。 研究表明虽然叶片具有诱导出类原球茎的能力，但研究表明虽然叶片具有诱导出类原球茎的能力，但成熟叶诱导出类原球茎的能力极弱。成熟叶诱导出类原球茎的能力极弱。 幼叶诱导出类原球茎能力较成熟叶强，但诱导率也幼叶诱导出类原球茎能力较成熟叶强，但诱导率也很低对，于大花蕙兰仅为很低对，于大花蕙兰仅为33%左右左右Plant regeneration through direct somatic embryogenesis from leaf explants of Phalaenopsis amabilis: 种子作为外植体种子作为外植体在自然条件下兰花

7、种子虽多，但由于其不具有发育完全的胚，在自然条件下兰花种子虽多，但由于其不具有发育完全的胚，且种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物使种子很难萌发。且种皮致密、透性差或种皮中含有抑制物使种子很难萌发。自自Noel Bernared在在1899年创立了兰花种子共生萌发法后，研究年创立了兰花种子共生萌发法后，研究者们接着发现大部分兰花种子可以通过无菌萌发的方式进行，者们接着发现大部分兰花种子可以通过无菌萌发的方式进行，即非共生萌发。即非共生萌发。兰花种子的非共生萌发已在蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等兰花中兰花种子的非共生萌发已在蝴蝶兰、石斛兰、文心兰等兰花中取得成功。取得成功。兰花蒴果消毒及果实内部兰花蒴果

8、消毒及果实内部 开裂果实种子消毒方法开裂果实种子消毒方法过滤方法过滤方法1http:/ 一般较少用花梗节间段作为外植体。一般较少用花梗节间段作为外植体。 但蝴蝶兰组织培养中多采用花梗作为外植体，从花梗节间但蝴蝶兰组织培养中多采用花梗作为外植体，从花梗节间段诱导出类原球茎，并且通过研究表明花梗节间段形成类段诱导出类原球茎，并且通过研究表明花梗节间段形成类原球茎的频率明显高于其它外植体（茎尖、根尖）。原球茎的频率明显高于其它外植体（茎尖、根尖）。栽培条件下蝴蝶兰花梗节间分化幼芽栽培条件下蝴蝶兰花梗节间分化幼芽蝴蝶兰花梗组织培养蝴蝶兰花梗组织培养根作为外植体根作为外植体 Stewart等用树兰等用树

9、兰(Epidendrum )的根首次成功地培养出了的根首次成功地培养出了原球茎和从愈伤组织分化出不定芽。原球茎和从愈伤组织分化出不定芽。 之后，根的离体培养相继在不同兰花中获得了成功。之后，根的离体培养相继在不同兰花中获得了成功。 由于兰花的根部共生菌根，根作为外植体较难彻底消毒，由于兰花的根部共生菌根，根作为外植体较难彻底消毒， 在组织培养的过程中较容易污染在组织培养的过程中较容易污染。兰花的离体开花兰花的离体开花组织培养基和添加物组织培养基和添加物培养基培养基兰花组织培养中常用培养基为兰花组织培养中常用培养基为MS、VW、Knudson C、Kyoto、White和它们的改良型，应根据不同品种而选择合适的培养基。和它们的改良型，应根据不同品种而选择合适的培养基。目前，市场中有很多商业化培养基。目前，市场中有很多商业化培养基。大花蕙兰大花蕙兰 MS、1/2MS、VW、KC均可应用于原球茎的增殖，但以均可应用于