第三章理化检测(食用菌粗蛋白杂质)

1、可溶性糖类的检测可溶性糖类的检测(还原糖还原糖蔗糖蔗糖总糖总糖)(一)还原糖的测定u费林热滴定法(SP法)铁氰化钾法u萨氏萨氏(Somogyi)(Somogyi)法法(费林法测糖) 蔗糖（无还原性）蔗糖（无还原性）果糖果糖+ +葡萄糖（还原性）葡萄糖（还原性） 非还原性糖酸水解还原性单糖 按还原糖法测定按还原糖法测定 酸本身存在的还原性单糖（1）滴定必须在沸腾条件下进行不能把锥形瓶从热源上取下来滴定可以加快还原糖与的反应速度；保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝被氧化而增加耗糖量。（2）不能随意摇动锥形瓶 以免空气进入反应液中，使亚甲基蓝被氧化项目三 产品 理化指标检测模块六模块六 食用

2、菌产品其他理化指标检测技术食用菌产品其他理化指标检测技术灰份灰份总糖总糖VC检测技术检测技术粗蛋白粗蛋白杂质杂质 VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法 简便/须脱色、干扰多（深色、其他还原性物质）二甲苯二氯靛酚比色法 深色荧光法：准确度高，较复杂2，4-二硝基苯肼法还原型VC的测定总VC的测定总VC=氧化型VC+还原型VC+二酮古乐糖酸少氧化+还原+二酮古乐糖酸操作复杂，结果易受影响氧化型+还原型 VCVC检测技术检测技术 2,6二氯靛酚滴定法1、原理 VC的提取: 用草酸/偏磷酸（不常用,需要在合适的PH下进行提取)将样品中的VC提取出来 用蓝色的碱性染料标准溶液(2,6二氯靛酚标准

3、溶液),对提取液进行氧化还原滴定 根据消耗的染料的量可计算出样品中还原型VC的含量 终点指示原理:染料被还原为无色,当到达滴定终点时,多余的染料在酸性介质中则表现为浅红色,2,6二氯靛酚碱性 酸性蓝色 红色 VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法2、试剂（1）2,6二氯靛酚(2,6二氯靛酚吲哚酚钠盐)溶液 配制 碳酸氢钠 热蒸馏水溶解加2，6二氯靛酚溶解 冷却后定容 过滤保存备用棕色瓶低温滴定度的测定：每次使用均要进行该操作 VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法2、试剂 1ml抗坏血酸标准溶液 10ml浸提剂 用2 ，6二氯靛酚溶液滴定 呈粉红色15s不褪色取 10ml浸提剂做空

4、白试验 （2%草酸OR2%偏磷酸） CV 滴定度 T(mg/ml) V1V2 T每毫升2，6二氯靛酚溶液相当于抗坏血酸的毫克数C抗坏血酸的浓度,mg/mlV吸取抗坏血酸的体积, mV1滴定抗坏血酸溶液所用 2，6二氯靛酚溶液的体积，mlV2滴定空白所用2，6二氯靛酚溶液的体积，ml。 VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法2 2、试剂、试剂（2）抗坏血酸标准溶液）抗坏血酸标准溶液(1mg/ml) u称取称取 100mg(准确至准确至 0.1mg)抗坏血酸，溶于抗坏血酸，溶于浸提剂浸提剂中并稀至中并稀至100mlu现配现用现配现用u试剂发黄，则弃去不用试剂发黄，则弃去不用 VCVC检测技术

5、检测技术2,6二氯靛酚滴定法3、实验步骤(VC的提取/滴定/空白滴定)取样品浸提剂捣成匀浆称取部分匀浆浸提剂定容到100ml 过滤滤液有颜色用白陶土脱色0.4g /g样品 取滤液10ml 2,6二氯靛酚溶液滴定 自身为指示剂 浅红色酸式滴定管空白实验：浸提剂10ml VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法3、实验步骤 (VV0)TA 维生素C(mg/100g)-100 WV滴定样液时消耗染料溶液的体积，mlV0滴定空白时消耗染料溶液的体积，mlT2，6二氯靛酚染料滴定度，mg/mlA稀释倍数 定容体积/吸取体积W样品重量，g VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法4、注意事项 （1

6、）15秒钟红色不褪为终点 样品中可能有其他杂质也能还原2，6-二氯靛酚，但一般杂质还原该染料的速度均较抗坏血酸慢（2） 必须做空白实验 VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法4、注意事项（3）样液制备时浆状物泡沫可能太多，可加数滴丁醇或辛醇（4）整个操作过程要迅速防止被VC氧化 滴定过程一般不超过2min 滴定所用的染料应在1-4ml之间 （微量滴定管） 如果太多？太小？ 选择合适的滴定管滴定开始时，染料溶液要迅速加入，直至红色不立即消失,而后尽可能一滴一滴地加入 （先快后慢） VCVC检测技术检测技术2,6二氯靛酚滴定法4、注意事项（5）取样后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中2%草酸有

7、抑制抗坏血酸氧化酶的作用（防止被氧化）1%草酸无此作用 VC检测技术二甲苯二氯靛酚比色法1、原理 用定过量的 2,6二氯靛酚染料与试样中的维生素C进行氧化还原反应，多余的染料在酸性环境中呈红色 用二甲苯萃取后比色，在一定范围内，吸光度与染料浓度呈线性相关，测剩余染料浓度，用差减法计算维生素 C含量。2、仪器与试剂基本同二氯靛酚比色法/偏磷酸浸提 VC检测技术二甲苯二氯靛酚比色法2、实验步骤（1）样品处理 定容到100ml（同二氯靛酚比色法）（2）测定 30min内完成食用菌中杂质检测5ml2%偏磷酸和5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液 6支试管/标准曲线（A500染料体积）5ml2%偏磷酸样品浸出

8、液 样品测定不同体积2,6二氯靛酚溶液 10ml二甲苯 用力摇动 取有机层测A500 用力摇动 +5mlpH4.0的乙酸钠缓冲液+2ml染料溶液 用力摇动 VC检测技术二甲苯二氯靛酚比色法2、实验步骤（3）计算 (2V)TA 维生素 C(mg/100g)100 W食用菌中杂质检测2所用 2,6二氯靛酚染料的体积，ml V查得 2,6二氯靛酚溶液的体积，mlA稀释倍数T染料滴定度，mg/mlW样品重量，g VC检测技术 荧光法（氧化型VC+还原型VC）1、原理(1)偏磷酸提取样品中的VC(2)活性炭氧化提取液中的VC 还原型VC氧化型VC 样品中本来的氧化型VC 喹喔啉（具有荧光性）荧光强度与氧

9、化型VC的浓度在一定条件下成正比食用菌中杂质检测+邻苯二胺（OPDA） VC检测技术荧光法（GB第一法）2、试剂 （1）100g/ml抗坏血酸标准溶液 先用偏磷酸-乙酸溶解并定容配成1mg/ml测pH食用菌中杂质检测2.2 偏磷酸-乙酸-硫酸溶液稀释2.2 偏磷酸-乙酸（2）活性C（活化）活性C1mol/L盐酸 加热回流1-2h VC检测技术荧光法（GB第一法）2、试剂食用菌中杂质检测过滤水洗烘箱中干燥洗到洗液中无Fe3+加入洗液蓝色检验：2%亚铁氯化钾+1%盐酸等量混合洗液中有Fe3+ VC检测技术荧光法（GB第一法）3、实验步骤（1）样品提取食用菌中杂质检测称取样品偏磷酸-乙酸溶液匀浆取适

10、量匀浆含有1-2mgvc调酸碱度百里酚蓝指示剂显红色（2.8）偏磷酸-乙酸-硫酸定容到100ml过滤样品滤液(2)用活性C氧化 VC检测技术荧光法（GB第一法）3、实验步骤（2）氧化处理食用菌中杂质检测取样品滤液100ml活性C过滤样品氧化液振摇1mi取抗坏血酸标准溶液100ml标准氧化液取滤液最初几ml舍去（3）制备试液（待测液）、标准液、空白液 VC检测技术荧光法（GB第一法）3、实验步骤食用菌中杂质检测（3）制备试液（待测液）、标准液、空白液5ml 标准氧化液5ml 标准氧化液标准液标准空白液5ml 样品氧化液5ml样品氧化液试液（待测液）试液空白液5ml 硼酸-乙酸钠加水定容到25ml

11、摇动15min5ml 50%乙酸钠加水定容到100ml加水定容到25ml加水定容到100ml VC检测技术荧光法（GB第一法）3、实验步骤食用菌中杂质检测（4）测荧光值标准液试液标准空白液试液空白液各2ml 5ml邻苯二胺 避光放置35min 测荧光值（荧光分光光度计） 改为不同体积的标准液（0/0.5/1/1.5/2)标准曲线法样品荧光值标样荧光值样品空白荧光值标样空白荧光值 VC检测技术荧光法（GB第一法）3、实验步骤食用菌中杂质检测（5）计算样品中维生素C含量(mg/100g)=(IIb)c5D100(IsIsb)m100I样品荧光值； Ib样品空白溶液荧光值；Is标样荧光值； Isb标

12、样空白溶液荧光值c标样质量浓度，0.1mg/mL（100g/ml）；m样品的质量，g。 D样品(测荧光值时)稀释倍数；5-5ml标准氧化液100-样品滤液100ml VC检测技术荧光法（GB第一法）4、注意事项（1）尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生素C （2）不易过滤可改为抽滤或离心后取上清液过滤（3）活性炭用量应适当与准确 （有吸附抗坏血酸的作用 ）（4）本法为外标法测定，也可通过标准曲线法测定（5）全部实验应避光操作（6）空白液中硼酸的加入消除产品中丙酮酸的干扰食用菌中杂质检测 VCVC检测技术检测技术2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （GBGB第二法）第二法）1、

13、原理 样品中还原型样品中还原型VC经活性炭氧化为氧化型经活性炭氧化为氧化型VC 原有的氧化型原有的氧化型VC 脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。 食用菌中杂质检测2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼红色脎红色脎 VCVC检测技术检测技术2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （GBGB第二法）第二法）2、实验步骤（1）样品提取）样品提取 同前法同前法（2）氧化）氧化取25ml 样品滤液2g活性C 振摇1min 过滤取滤液10ml 10ml2%硫脲溶液样品氧化液 （3）呈色反应）呈色反应食用菌中杂质检测最初滤液舍去4ml氧化液4ml氧化液4ml

14、氧化液空白平行实验2，4二硝基苯肼373h防止防止VC继续被氧化继续被氧化促进脎的形成促进脎的形成氧化剂氧化剂+脱色剂脱色剂 VCVC检测技术检测技术2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （GBGB第二法）第二法）2、实验步骤食用菌中杂质检测冷却空白液室温样品液冰水冰水冷却2，4二硝基苯肼10-15min后 （4 4）85%85%硫酸处理硫酸处理本步已成脎，但显色不稳定本步已成脎，但显色不稳定用浓硫酸处理，转变为用浓硫酸处理，转变为橘红色的双橘红色的双-2，4-二硝基苯二硝基苯每支+5ml 85%硫酸 边加边摇至少加1min室温下放置30min VCVC检测技术检测技术2 2，4-4-二硝

15、基苯肼法二硝基苯肼法 （GBGB第二法）第二法）2、实验步骤食用菌中杂质检测 （5 5）比色测定）比色测定 测测A A500500 （6 6）绘制标准曲线）绘制标准曲线 50ml1mg/ml抗坏血酸标准溶液1g活性C 振摇1min 过滤取滤液10ml 5g硫脲 1%草酸定容到500ml （浓度为20g/ml ） 1%硫脲稀释到不同浓度（1/2/4/6/10/12g/ml） 以下操作同样品测定取4ml 2，4二硝基苯肼 373h 5ml 85%硫酸室温下放置30min A500 标准曲线 VCVC检测技术检测技术2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （GBGB第二法）第二法）2、实验步骤食用

16、菌中杂质检测 （7 7）计算）计算X=（cV/m）F(100/1000)X样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g；c由标准曲线查得或由回归方程算得样品溶液浓度，g/ml；m试样质量，g；F样品氧化处理时的稀释倍数；V呈色反应所用试样体积，ml。 VCVC检测技术检测技术2 2，4-4-二硝基苯肼法二硝基苯肼法 （GBGB第二法）第二法）3、注意事项（1 1）试管自冰水中取出后，颜色会继续变深，所试管自冰水中取出后，颜色会继续变深，所以，加入硫酸后以，加入硫酸后30分钟应准时比色。分钟应准时比色。 （2）活性）活性C氧化剂氧化剂+脱色剂（深色样品）脱色剂（深色样品）无色或已脱色样品无

17、色或已脱色样品溴或溴或2，6二氯靛酚作氧化剂二氯靛酚作氧化剂（3）硫脲的加入）硫脲的加入防止防止VC继续被氧化继续被氧化 促进脎的形成促进脎的形成食用菌中杂质检测食用菌中蛋白质检测测定蛋白质的方法可分为两大类测定蛋白质的方法可分为两大类利用蛋白质的共性利用蛋白质的共性，即含氮量（，即含氮量（16%16%） 、肽键测定、肽键测定蛋白质含量蛋白质含量 ；利用蛋白质中特定利用蛋白质中特定氨基酸残基、酸性和碱性基团以氨基酸残基、酸性和碱性基团以及芳香基团等测定蛋白质含量。及芳香基团等测定蛋白质含量。具体测定方法具体测定方法水杨酸比色法水杨酸比色法、紫外分光光度法、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法、红

18、外光谱、紫外分光光度法、双缩脲反应、染料结合反应、酚试剂法、红外光谱蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法蛋白质含量测定最常用的方法是凯氏定氮法食用菌中蛋白质检测测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质测出样品中的总含氮量再乘以相应的蛋白质系数系数（1/16%1/16%）而求出蛋白质的含量而求出蛋白质的含量为为粗蛋白含量（含有少部分含粗蛋白含量（含有少部分含N N非蛋白核酸、非蛋白核酸、生物碱等）生物碱等）18331833年年KieldahlKieldahl首先提出首先提出常量常量K氏定氏定N法法微量微量K氏定氏定N法法自动自动K氏定氏定N法法半微量半微量K氏定氏定N法、改良法等法、改良法等食用

19、菌中蛋白质检测1 1、原理、原理样品与浓硫酸和样品与浓硫酸和催化剂催化剂一同加热消化，使蛋白质分解一同加热消化，使蛋白质分解 碳和氢被氧化为碳和氢被氧化为COCO2 2和和H H2 2O O逸出逸出 有机氮转化为氨，与硫酸结合成有机氮转化为氨，与硫酸结合成硫酸铵硫酸铵常量常量K氏定氏定N法法硫酸铜作催化剂常量、微量、半微量硫酸铜+二氧化钛改良 2NH2(CH2)2COOH+13H2S04 (NH4)2S04+6C02+12S02+ 16H2O 食用菌中蛋白质检测1 1、原理、原理常量常量K氏定氏定N法法l加硫酸铜加硫酸铜催化剂催化剂指示消化终点指示消化终点：溶液为蓝绿色（：溶液为蓝绿色（硫酸铜

20、溶液颜色）硫酸铜溶液颜色），清澈透明，清澈透明l加氧化剂加氧化剂 如双氧水、次氯酸钾等加速有机物氧化速度如双氧水、次氯酸钾等加速有机物氧化速度蒸馏时碱性反应的指示剂蒸馏时碱性反应的指示剂（判断加碱量是否足够）（判断加碱量是否足够）C+CuSO4 Cu2SO4+SO2+CO2Cu2SO4+2H2SO4 2CuSO4+2H20+SO2 蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色而不成褐色蒸馏前若加碱量不足，消化液呈蓝色而不成褐色（氢氧化（氢氧化铜沉淀、铜沉淀、CUO沉淀、铜离子与氨的络合物），沉淀、铜离子与氨的络合物），此时需再增加氢氧化此时需再增加氢氧化钠用量。钠用量。食用菌中蛋白质检测常量常量K氏定氏定

21、N法法 2NH2(CH2)2COOH+13H2S04 (NH4)2S04+6C02+12S02+ 16H2O 消化l一定是浓硫酸：一定是浓硫酸：浓硫酸具有脱水性浓硫酸具有脱水性使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮使有机物脱水后被炭化为碳、氢、氮浓硫酸又具有氧化性浓硫酸又具有氧化性2H2SO4 C 2SO2 2H2O CO2二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫二氧化硫使氮还原为氨，本身则被氧化为三氧化硫H2SO42NH3 (NH4)2SO4l加硫酸钾加硫酸钾增温剂，提高溶液沸点（增温剂，提高溶液沸点（330400）浓硫酸酸性浓硫酸酸性食用菌中蛋白质检测1 1、原理、原理用硼酸吸收氨用硼酸吸收

22、氨以标准以标准HClHCl溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出溶液滴定。根据标准酸消耗量可以计算出蛋白质的含量。蛋白质的含量。 也可以用过量的标准也可以用过量的标准H H2 2SOSO4 4或标准或标准HClHCl溶液吸收后再溶液吸收后再以标准以标准NaOHNaOH滴定过量的酸。滴定过量的酸。常量常量K氏定氏定N法法整个过程：消化、碱化、蒸馏、吸收、滴定整个过程：消化、碱化、蒸馏、吸收、滴定2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O(NH4)2B407+H2S04+5H20 (NH4)2SO4+4H2BO2 加碱蒸馏，使氨蒸出加碱蒸馏，使氨蒸出(NH4)2SO4+2NaOH2NH3

23、+2H2O+Na2SO4食用菌中蛋白质检测2 2、仪器与试剂、仪器与试剂（1）通风橱 （2）消化装置（3）蒸馏装置（4）盐（硫）酸标准溶液 配制、标定（5）奈氏试剂奈氏试剂Nessler试剂，试剂，K2（HgI4） 常量常量K氏定氏定N法法3.5 g KI + 1.3 g HgCl2 溶于溶于70 毫升水。加毫升水。加30毫毫升升4 mol/L氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，必要氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，必要时过滤，并存于玻璃瓶中盖紧口。时过滤，并存于玻璃瓶中盖紧口。溶解溶解11.5 g HgI2 + KI 10 g于适量少许水，后加水稀释至于适量少许水，后加水稀释至50 ml,静置后，取其澄清

24、液，弃去沉淀，储存于棕色瓶中。静置后，取其澄清液，弃去沉淀，储存于棕色瓶中。食用菌中蛋白质检测3 3、实验步骤、实验步骤（1）消化 常量常量K氏定氏定N法法5克样品+10克结晶硫酸钾+l克硫酸铜 +浓硫酸25毫升小火加热保持和缓的沸腾使火力集中在凯氏瓶底部（以免溅附在壁上的蛋白质处于无硫酸存在的情况，使氮有损失。 ） 液体为蓝蓝绿色透明绿色透明继续加热微沸1h冷却l样品放入定氮瓶内时，样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上不要沾附颈上.(用水冲用水冲洗洗)l消化时如不呈透明溶消化时如不呈透明溶液，可放冷后，慢慢加液，可放冷后，慢慢加入入30%过氧化氢过氧化氢2-3ml，促使氧化。促使氧化。l消化时应

25、注意不时转消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，动凯氏烧瓶， 利用冷凝酸液将附在利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下瓶壁上的固体残渣洗下 促进其消化完全促进其消化完全食用菌中蛋白质检测3 3、实验步骤、实验步骤（2）蒸馏、吸收常量常量K氏定氏定N法法B 25毫升硼酸吸收液 甲基红溴甲酚绿混合指示剂 l 下端插入液面下 l40（可放在冷水浴中）A少量水、消化液、玻璃球C 80毫升50%氢氧化钠溶液 D 加热蒸馏 将全部氨蒸出:l估计时间1-2hl奈氏试剂检查是否蒸完lPH试纸检查冷凝管下端用水冲洗后继续蒸馏1min后关闭热源（防止倒吸） 检验检验NH4+离子，遇铵根离子，遇铵根离子析出黄色或红棕色沉离

26、子析出黄色或红棕色沉淀淀食用菌中蛋白质检测3 3、实验步骤、实验步骤（3）滴定常量常量K氏定氏定N法法馏出液 标准盐酸溶液滴定 甲基红溴甲酚绿混合指示剂 蓝色微红色别忘记做空白实别忘记做空白实验！验！不称样不称样消化消化蒸馏蒸馏吸收吸收滴滴定定食用菌中蛋白质检测3 3、实验步骤、实验步骤（4）计算常量常量K氏定氏定N法法 C(V1-V) X 0.014 总氮()= X 100 W C盐酸标准溶液的摩尔浓度； V1样液滴定消耗的盐酸标准溶液的量(毫升)； V空白滴定消耗的盐酸标准溶液的量(毫升)； W样品重量(克)； 0.014氮的毫摩尔 粗蛋白质()=总氮() K K换算系数，食用菌产品等于4

27、.38 食用菌中蛋白质检测4 4、注意事项、注意事项（1 1）样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上，万一沾）样品放入定氮瓶内时，不要沾附颈上，万一沾附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果附可用少量水冲下，以免被检样消化不完全，结果偏低。偏低。（2 2）消化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷）消化时如不容易呈透明溶液，可将定氮瓶放冷后，慢慢加入后，慢慢加入30%30%过氧化氢过氧化氢2-3ml2-3ml，促使氧化。，促使氧化。 （3 3）消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷）消化时应注意不时转动凯氏烧瓶，以便利用冷凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗下，并促进其消凝酸液将附在瓶壁上的固体残渣洗

28、下，并促进其消化完全。化完全。常量常量K氏定氏定N法法食用菌中蛋白质检测（4 4）蒸馏装置不能漏气）蒸馏装置不能漏气（5 5）各种试剂及装置的作用及影响）各种试剂及装置的作用及影响浓浓H H2 2SOSO4 4 脱水炭化脱水炭化( (生成生成CHN)CHN)、氧化、与、氧化、与NHNH3 3作用作用CuSOCuSO4 4 催化剂、指示剂（消化、蒸馏前加碱）催化剂、指示剂（消化、蒸馏前加碱）K K2 2SOSO4 4 提高沸点提高沸点有时加入硒粉、氧化汞有时加入硒粉、氧化汞催化剂（为了防止污染通常采用催化剂（为了防止污染通常采用硫酸铜）硫酸铜）50%NaOH50%NaOH的作用：释放铵盐中的的作

29、用：释放铵盐中的NHNH3 3 。常量常量K氏定氏定N法法食用菌中蛋白质检测K K氏烧瓶和取样量氏烧瓶和取样量1g1g以上的样品，以上的样品，K K氏烧瓶最小氏烧瓶最小500ml 500ml （加热均匀（加热均匀 缩短消化时间）缩短消化时间）H H2 2SOSO4 4和和K K2 2SOSO4 4的添加量的添加量 ( (一般指导原则一般指导原则) ) 1g样品样品 K2SO4： H2SO4=7g：12ml 若取样量较大，如干试样若取样量较大，如干试样5 g 可按每克试样可按每克试样5 m1的比例增加硫酸用量。的比例增加硫酸用量。吸收液吸收液 标准标准H2SO4 溶液：用标准碱返滴定，甲醛溶液：

30、用标准碱返滴定，甲醛(基基)红指示剂红指示剂 硼酸硼酸 ：用：用HCl进行滴定，混合指示剂进行滴定，混合指示剂蒸馏蒸馏 常量法常量法直接蒸馏直接蒸馏 微量法微量法水蒸汽蒸馏水蒸汽蒸馏常量常量K氏定氏定N法法l不需要精确知道体积l不需要标定浓度l弱酸对酸碱滴定要求低食用菌中蛋白质检测微量微量K氏定氏定N法法原理及适用范围同前原理及适用范围同前与常量法不同点与常量法不同点 样品质量、试剂量变少样品质量、试剂量变少 微量滴定管微量滴定管 微量凯氏定氮微量凯氏定氮装置（水蒸气蒸馏）装置（水蒸气蒸馏）实验操作（1）消化 最后加水定容到100ml ,其他与常量法一样（2）蒸馏 食用菌中蛋白质检测微量微量K

31、氏定氏定N法法（1）按图安装好按图安装好微量定微量定氮蒸馏装置氮蒸馏装置（2）装水2/3甲基橙、硫酸数ml（保持酸性）（3）10ml 4%硼酸硼酸2滴混合指示剂滴混合指示剂（4）10.00ml样品消化稀释液（5）少量水冲洗（6）10ml10%氢氧化钠（7）少量蒸馏 水冲洗， （8）加热蒸馏吸收液变为绿色计时蒸馏10min 冷凝管提离液面继续蒸馏1min（9）滴定食用菌中蛋白质检测自动自动K氏定氏定N法法1、原理及适用范围同前、原理及适用范围同前2、特点：、特点：（1）消化装置用优质玻璃制成的凯）消化装置用优质玻璃制成的凯氏消化瓶，红外线加热的消化炉。氏消化瓶，红外线加热的消化炉。（2）快速：一次可同时消化）快速：一次可同时消化8个样个样品，品，30分钟可消化完毕。分钟可消化完毕。（3）自动：）自动：自动加碱蒸馏自动加碱蒸馏，自动吸自动吸收和滴定收和滴定，自动数字显示装置。可，自动数字显示装置。可计算计算总氮百分含量并记录总氮百分含量并记录，数分钟，数分钟完成完成1个样。个样。食用菌中蛋白质检测1 1、原理、原理( (标准曲线法标准曲线法) )样品中的样品中的propro经经H H2 2SOSO4 4消化转化为铵盐溶液消化转化为铵盐溶液在一定的酸度和温度下