液相基本术语及其实际操作

1、液相色谱检测1仪器的基本常识及术语1.1 仪器结构：液相色谱仪主要包括泵、进样器、色谱柱、检测器;1.2 仪器分类：液相色谱仪属于精密仪器中的色谱仪器； 按照分为离机制，吸附、分配、离子交换、亲和色谱，体积排阻色谱;1.2.2按照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法;高效液相色谱法的应用范围：高效液相色谱法适用于高沸点不 易挥发、受热不稳定易分解、分子量大的，不同极性的有机化合物， 生物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。1.3仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期内进行 次期间核查，也可以根据情况增加核查次数;1.4维护保养：对于液相维护方式主要是周

2、维护和日维护，其中周维护包括联机系统及中工作站软件维护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查维护、溶剂瓶清洗 等；日维护包括环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样 口是否洁净、进液处的砂芯过滤头是否洁净、流动相交换时是否有沉 淀;1.5色谱法的常用基本术语 基线：在色谱操作条件下，没有被测组分通过鉴定器时，记录器所记录 的检测器噪声随时间变化图线称为基线 死时间，保留时间及校正保留时间：从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间，以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间，以tr表示.保留时间与死时间之差称校正保留时间.以Vd表死体积

3、，保留体积与校正保留体积：死时间与载气平均流速的乘积称为 死体积，以Vd表示,载气平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留时间与载气 平均流速的乘积称保留体积，以Vr表示,Vr=trxFc 峰面积：流出曲线（色谱峰）与基线构成之面积称峰面积，用A表示.拖尾因子：是反映峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子W0.05h/2d1 （其中W0.05h为5%筆高处的峰宽，d1为峰顶点至峰前沿之 间的距离）。峰高与半峰宽：由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交 点间的高度称为峰高，一般以h表示.色谱峰高一半处的宽为半峰宽般以x1/2表示;1.7色谱检测的特性(1)灵敏度高;线性范围宽;分离度与柱效

4、、选择因子、容量因子、分析时间的关系: 分离度与柱效的平方根成正比，选择因子一定时，增加柱效;分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化：一般通过改变固定相和流动 相的性质和组成或降低柱温，可增大选择因子;（6）增大选择因子的最有效方法是选择合适的固定液。对于液相色谱，改变流动相的组成，可以有效控制k;2仪器的操作规程 2.1日立液相设备 L-2000/2400操作规程 2.1.1使用环境环境温度：4C 55C；相对湿度：小于95%RH2.1.2使用前准备检查所用溶液(如流动相，乙腈等)是否足够。检查线路是否连接正常。2.1.3设备操作方法具体操作

5、如下:(1) 依次开启泵开关，检测器开关，自动进样器开关，柱温箱开关;initialize 打开软件，点击“ i ”按钮，出现联机界面，点击ni ?.laiz按钮，当文本框出现文字时，表示联机成功;(3)检查所用方法是否符合要求。如不符合，进行设置;开泵。检测 具体操作如下:(1) 建立所需样品盒;(2) 点击检测按钮，选择刚建立的样品盒;(3) 首先进行走基线; 当基线走平时，点击系列样品检测按钮，进行标样，样品检测;(5)当标样检测结果出来时，打开结果窗口，选择所需标样结果，点击“ Recalculate'ri:'k ?lkjuleit进行重新计算，然后点击“ Calibr

6、ation ” k? li'brei?刘进行定标;(6)当样品结果出来时，打开结果窗口，选择所需样品进行重新计算，然结果，点击“ Recalculate ” 'ri:'k?lkjuleit 后点击“ ModifyReport ” 'm?difai, ri'p ?:t,出现结果报告，即可查看样品具体结果。2.1.4更换流动相具体操作如下:(1) 当流动相快不够时或异常时，及时更换流动相; 先把泵关闭，将流动相入口放入新流动相中;(3)将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭排气功能;(4) 排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵;(5) 走基线，当基

7、线走平时，开始做标样，做样。2.1.5关机具体操作如下:(1) 先把泵关闭，将流动相入口更换为超纯水;(2) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭排气功能;(3) 排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵;用超纯水冲洗管路大约20分钟; 把泵关闭，将超纯水更换为 100%甲醇或100%乙腈;(6) 将泵阀逆时针旋转，进行排气。大约3分钟后，关闭排气功能;(7)排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵;(8)用100%甲醇或100%乙腈冲洗管路大约30分钟;(9)关泵，关液相软件，关泵开关，检测器开关，自动进样器开关，柱温箱开关。2.1.6维护保养、注意事项(1) 进行旬维护检查工作，主要

8、检查事项：软件是否正常、温度、 清洗、进样器、泵单元；(2) 每次测量前进行标样检测，斜率达到99.99%要求才能检测样品，测完样品及时清理。(3) 按要求进行每天2个小时以上的清洗。2.2 Waters 高效液相色谱-2695/24892.2.1开机自检具体操作如下：(1) 打开 Alliance ?'lai ?ns 2695 和 2489 的电源开关至 ON (1) 的位置，仪器开始进行自检；(2) 仪器将进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle ” 'aidl状态，表示开机测试正常。2.2.2 流动相有机溶剂要求用

9、色谱纯(进口名牌最好)，水或缓冲盐溶液要用超 纯水(电阻率：18.2M Q )，每48小时制备新鲜的水相流动相，尤其是100% 含水流动相使用时间不超过两天。6根管子都在液面以下。溶剂的位置必须高于溶剂混合阀(GradientProportioningValve)。 'greidi ?ntpr?'p?:?ni? v? Iv清洗柱塞密封垫(Seal Wash) si:i w?|的溶液：含5%-10%甲醇的 超纯水。洗针液(Needle Wash) 'ni：d ?i w?|: 50%甲醇：50%水 (该比例仅适 用于反相试验)。注：以上溶剂或溶液均需用0.45卩m的膜过滤并

10、超声脱气1分钟， 用洁净的玻璃容器盛放，避免污染，同时玻璃容器应用超纯水来清洗而 不能用自来水。2.2.3灌注柱塞密封清洗清洗操作步骤：回到Menu'menju：画面，选择Diag ;(2) 确定Seal Washsi：iw ?的管路放在正确的位置；(3) 按 Prime Seal Wash praim si：i w ?，再按 Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按Halt ; h?：lt按Close。注意：密封圈清洗(Seal wash) si：l w ?溶齐U,在反相液相色谱中 可使用 Water/ MeOH methyl alcohol 甲醇 =90/10 或 Wa

11、ter/Acetonitrile ? sit ?u'naitril乙腈=95/5(根据实际需要使用不同溶剂)。2.2.4 灌注针头清洗操作步骤：回到Mainmein的画面，选择Diag，选择Prime praim Ndl Wash设定值为30秒，若想要多清洗几次时，请按Start Again 。清洗溶剂：50%勺甲醇溶液注意：若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染，使用较强的 溶剂系统来进行清洗操作。2.2.5打开真空脱气机如液相仪管路干，可进行使用，如管路不干则按照以下步骤进行操作：按“ Menu/Status ” 'steit ?s键，进入 Status (1) 画面；利用

12、方 向键将光标移至“ Degasser ” di：g? s?位置，按Enter ;利用上下键选 择模式为ON注意：在开启除气装置时，要确认所有溶剂管路都充满溶剂；若 没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime drai praim操作。226执行干灌注确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器(Detector di'tekt ?)废液管及定量环(Sampie Loop lu：p)的废液管是否放置于适当 的废液容器中。摇动溶剂瓶内的过滤器(Solvent Filter) 's?iv?nt fiit ?，防止气 泡附着在过滤器的外表面。中，以逆时针的方向将空的针筒插入抽液阀(P r

13、ime/Vent value)旋转3圈。按“ Menu/Status ” 'steit ?s键，进入 Status(1)画面，按“ Direct Function ” di'rekt 'f ?k?n功能键，选择 Dry Prime，按 Enter。按下面使用的溶剂开启阀门(例如：Open A)，然后将针筒向外拉， 抽出510mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭 Prime/Vent 阀门。在“ Enter a duration ” dju'rei ?n中输入 3分钟，按“ Continue 键，泵即以3.0mL/min的流速进行清洗(Purge)。可重

14、复上两个步骤，将所要使用的流动相溶剂Dry Prime。2.2.7执行湿灌注按“ Menu/Status ”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标 移至“ Composition ” k?mp?'zi?m字段，将欲 Wet Prime 的溶剂输入 100%按“ Direct Function ” di'rekt 'f ?k?n 功能键，选择 Wet Prime , 按 Enter。Wet Prime 的原设定值，一般为 Flow Rate:7.5mL/min , Time: 3.0min，然后按下“ OK键，泵即开始进行 Wet Prime操作。重复上述的步骤

15、直到所有溶剂Wet Prime进行完毕。2.2.8设定流动相平衡色谱柱按“ Menu/Status ” 键，进入Status (1) 画面，利用方向键将光 标移至“ Com position ” k?m p? 'zi ?n字段，利用仪器面板右侧的数字 键设置试验要求的溶剂组成比例，此时会在原溶剂比例表的下方出现 新编辑溶剂比例表(New Comp osition)。设定好新的溶剂组成比例后，按“Change Comp” t?eind ? k?mp功能键(改变溶剂组成比例change composition)，此设定的溶剂组成 比例即为当前的比例。利用方向键将光标移至“ Flow ” f

16、i?u字段，利用仪器面板右侧的 数字键设定流速，此时仪器即设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱 柱。特别提示：对于常规的反相色谱试验至少要用30倍柱体积来平衡，而对于离子对色谱的平衡可能需要多达500柱体积的流动相来平衡。2.2.9 冲洗进样器溶齐J管理系统的前处理 (Prime the solvent management system) 要求如下：改变溶剂；(2) 发现注射针头内有气泡；(3) 每天开机的时候。冲洗进样器执行步骤：(1) 按“ Menu/Status ”键，进入Status(1)画面，在设定溶剂的画 面中设定适当的流速与溶剂比例；(2) 按 “ Direct Function

17、 ” di'rekt 'f?k? n键, 选择 Purge Injector p?:d? in'd?ekt?，按 Enter ;(3) 输入Sam pie Loop体积清洗的倍数(原定值为6倍)，按Enter ;(4) 压缩测试(Compression Check)请先不需要测试，设定完成后 按OK2.2.10 放入样品盘打开计算机，运行Empowepm'pau ?软件，选择存放数据文件的Project ，运行 Run Samples; 按 Develop Methodsdi'vei ?p 'me e?按钮， 建立方法；按Monitor '

18、;m?nit?按钮，观察基线，待基线平稳，可准备 进样。2.2.11 关机p ?:d? in'd?ekt?，冲洗进样器(针对离子对试首先关闭检测器电源；在 2695溶剂槽中换上适当的清洗溶剂，清 洗系统约60分钟(针对离子对试验，建议 50%乙腈：50%水 1mL/min流速 冲洗色谱柱2小时以上)；按2695面板Diag键，选择Prime SealWash , 清洗泵头约1分钟；再选择 Prime NdlWash，清洗进样针12次；按 Menu/Status 键进入手动控制模式，按 Direct Function di'rekt 'f ?k? n 键，选择 Purge

19、 Injector 验，建议设定50%乙腈：50%水的溶剂来冲洗进样器)；降低流速至0, 待系统压力回零后，关闭2695电源，关闭计算机及显示器电源。2.3岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程2.3.1准备工作在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标 样及样品。流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。打开 LC-20AX 2SETS,CTO-10ASvp SPD-M20A或 RF-10AXL）电源, 待自检通过。打开SCL-10AVP电源，检查开机屏幕应显示各单元，如果某单元 没有显示，则不能控制该单元，需按键取消屏幕Fixed标志即可显示并控制该单元。否则

20、检查通讯设置打开计算机电源或重新启动计算机，待正常进入 WINXP操作系统。排空操作：打开键，泵开始排空运行。检查流动相入口压力调零：如果LC-20AT泵排空阀（逆时针180度以上）,按PurgeTeflon管路没有气泡后，再按|Purge|键停止排空。 purge时，压力不为零，需要进行压力调零 ，按LC-20ATvp泵|Func|键选择|C0NTrO项,按FUN键直至屏幕显示ZERO AdJ项/按Enter |键，再按CE键，即完成调零。然后关紧排空 阀（顺时针旋紧）。在计算机中双击 LC SOLUTION图标，进入工作站。再双击 Op eration e Analysis 14进入实时分

21、析窗口 （根据不同的检测器选择）。Admin,不需输入 Password,点击Ae B表示在A菜单下选择B,以在开机画面中，User ID 选中OK（可听到峰鸣一声），在下面操作中 此类推。选中表示在中打"号。在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即 可（可以跳过执行）：（1）System configuration系统配置（第一次安装或更换检测器时配置，通常跳过不操作）；（2）System Check编辑仪器检查参数：并且RuN运行检查。通常不操作（跳过）；（3）点击Data acquisition进入采集数据编辑方法界面点击Instrument Parameter

22、进入仪器参数设置界面：选中Normal（通用简单）或Advanced（高级详细）项，分别设定ControllerPumps泵参数，Oven柱箱参数,Detecter 检测器参数, 系统控制器参数，Time Program时间程序参数等。仪器配置不同，控 制单元项的数目多少;Pumps泵参数:Mode控制方式，Flow流速，B, C DConc各 项浓度，P Max最大压力；Oven柱箱参数：Oven设定温度，T Max最大保护温度；Detecter 检测器参数:Cell设定池温。Wavelength设定波Controller 系统控制器参数；选中AcquisitionTimeD后，设置分析时长

23、;Data acquisition间，等等；LC Time Prog时间程序参数：编辑泵梯度洗脱程序，也可以控制柱箱，检测器等等；(4) 点击 Method Data Analysis Parameter 编辑积分参数：设置 Width峰宽,Slope斜率,Min Area最小峰面积等等。新建方法推荐 使缺省值，待分析完样品后再设置此项参数，得到优化的色谱数据结 果后，将参数保存在当前方法中；*(5) 保存方法：点击 File Save Method as如图：起文件名保存后，该方法即作为当前运行的方法；Load键，向仪器传送参数。(6) 下载方法：点击Down232运行方法系统开/关)系统开

24、始运行，点击如图图标(Instrument On/Off检查各单元参数应与方法设定一致。等待系统平衡。一般情况下，由 于流动相不同，交换平衡时间不定。可以观察Detecter检测器吸收变 化,如果吸收值稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，确认不变后，准备进样分析。可以通过改变衰减或予览基线观察基线变化，待 基线平稳(初始化显示时与横轴平行)，准备进样操作。2.3.4进样分析如下：(1) 单针进样分析：如图点击Single Start 图标：出现如下采样对话框；(2) 编辑样品参数：Sample ID样品信息，Method Name方法文件 名，Data Path 数据存储路径，Data N

25、ame数据文件名，Vial样品瓶号(无),Tray#架号(无),Injection 进样量等;(3) 点击OK后，开始进样操作(重复单针进样，重复执行第7步骤即可 );所有色谱数(4) 每个样到时间分析结束，根据方法中的积分参数，据会自动进行积分处理。235报告予览和打印O点击Top返回上级引导操作栏。点击Post Run Analysis 进入数据后处理界面：点击report进入报告界面：点击report format进 入格式界面：调入报告格式文件也可以自己编辑报告格式，然后点击 Data打开数据文件，将左侧数据文件拖入右侧报告栏即可。关于报告 格式，可以通过内容选择图标，在报告中确定位置

26、后，添加即可。右 键功能很强大，用户可以参考说明书灵活使用。选择快捷图标的预览 或打印图标执行报告预览或打印。2.3.6关机步骤如下：(1) 更换洗液清洗流路系统(如用缓冲液，先用水清洗 1小时，再 用有机溶剂清洗30分钟以上)，最后用有机溶剂封存；(2) 清洗结束后，停止系统运行，在LC SOLUTION工作站中，按Instrument on/off键即停止所有单元工作；(3) 退出LC SOLUTION可听到峰鸣一声)，再完全退出；(4) 关系统控制器 SCL-IOAvp电源开关；Vo(5) 关主机 SP D-M20A(或 RF-10AXL)检测器，LC-20AT 泵， CTO-10ASv

27、p柱箱电源开关。2.3.7清洗流路系统要求如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟；如果使用有机溶剂(水)，直接更换甲醇清洗 40分钟 即可。2.4安捷伦高效液相色谱操作规程2.4.1开机打开计算机，进入 Windows XP(或 Windows 2000)画面，并运行 Boot P Server 程序。打开1100 /1200LC 各模块电源。待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online 图标，化学工作站自动与 1100LC/1200LC。从“ View”菜单中选择“ Method and Run control ”画面，单击”View”菜单中

28、的 “ShowTop Toolbar ”,Showstatus toolbar ”，'SystemSampling diagram ”，使其命令前有“/”标志，来调用I-”diagram ,所需的界面。把流动相放入溶剂瓶中打开Purge阀。单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。设 Flow : 5ml/min，单击 OK单击PumP图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，中On单击OK则系统开始 Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入选口 ）无气泡为止，切换通道继续 Purge，直到所有要用通道无气泡为止。单击PumP图标，

29、出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，Off，单击 Ok关泵，关闭 Purge valve 。单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进选中入 Pump编辑画面，设 Flow: 1.0mL/min。单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入 停泵的体积，单击Ok。2.4.2关机关机前，用100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系 统10分钟（如ACN）,然后关泵（适于反相色谱柱，正相色谱柱用适当 的溶剂冲洗）。退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut down 关）。关掉 Agilent 1100/1200电源开关2.5

30、C8柱修复操作规程2.5.1目的为节约检测成本，同时统一操作方法，特制定本作业指导书。2.5.2适用范围本标准适用于爱杰尔、天津兰博生产的C8柱修复方法（其它厂家可以尝试使用）。C8柱使用一段时间后，会出现柱压高、峰变形问题， 大部分的原因为C8柱污染，通过对污染C8柱柱头过滤网进行超声清洗， 然后再生，解决问题。2.5.3工具、试剂2个扳手，1把钝剪刀。乙腈（色谱纯）、异丙醇2.5.4修复过程（1）将故障C8柱柱头处拧开用2个扳手将C8柱两柱头拧开，取下两端柱头 料封口，取下塑料封口，过滤网就在封口处。观察（色谱纯）用钝的剪刀夹住塑 C8柱内填料是否有污染，如有污染，用干净的滤纸轻轻擦掉污染

31、物。注意：只能擦去表 不能太多，否则会损坏柱子。'll；、. t f r、 H r IJ.两端端口两端端口图 1: C8柱面有过滤网J图2： C8柱内部塑料封口，内有过滤网（2）对两端柱头进行超声清洗 （或者对另一支旧C8柱的后端柱头进行 清洗，并代替此C8柱前端柱头）准备小烧杯，倒入10%乙腈，然后将第一步取出的两端柱头(包括过滤网)放入烧杯，超声半小时；然后将10%乙腈更换为100%乙腈超声 半小时；最后将100%乙腈更换为超纯水，超声半小时。或者将以前用 过的旧C8柱的后端柱头卸下，进行清洗，并代替此C8柱的前端柱头。A%图3:对端口，塑料封口，过滤网进行超声清洗(3) 安装柱子

32、将过滤网放入塑料封口处，安装塑料封口，用扳手拧紧柱子。(4) 连接柱子，进行再生然后将C8柱装到液相色谱仪，等基线走平后，进标品。观察峰形、 柱压等是否正常，如果正常则可以不进行此步骤，否则进行再生：(1),然后换上流动相，然后走用10%腈冲洗30分钟，流速为 0.6ml/min。(2)用100%乙腈冲洗2 小时。流速为 1.0mlmin。( 3)用100%异丙醇冲洗 2小时。流速为 0.5mlmin。( 4)用100%乙腈冲洗 2小时。流速为 1.0mlmin。( 5)用 10%乙青冲洗 30分钟，流速为 0.6ml/min 流动相，等基线走平后，进标品。(5) 验证修复效果验证方法(1)

33、观察柱压，柱压正常。(2) 观察标品出峰情况，峰形良好。85%-105%C8柱可以继续进行使用。(3) 进行回收率验证，回收率达到 通过以上方面，说明修复成功，此(6) 注意事项拆装C8柱注意事项清洗手，防止污染柱子内部。拆装柱子时，防止柱头部螺纹变形。2.5.5连接C8柱与液相色谱仪注意事项C8柱出口流出液体， 防止有异物流入检测池。连接C8柱入口与液相色谱仪，打开泵，使 冲5分钟，连接C8柱与液相色谱仪检测器端 3色谱检测的项目和关键控制点3.1样品检验流程图（1）核实检验计划认真核实检验计划，明确检验项目和批次， 核实可以开展的项目。（2）样品接收经相关检验人员对送检信息及样品的符合性确

34、认后在送检单上签 字，检验人员即可进行样品的检验。（3）样品确认t=r.号、注意检查样品规格、型号、商标、批次等级内容是否清楚，状态 是否完好、变质、污染等。如发现有任何问题，要询问送检单位。（4）记录样品信息将样品名称、批次、送样日期等信息完整的记录到带有编码的原始记录上，要尽可能的保证信息的完整性，和可追溯性。（4）样品前处理按照相应的检验方法进行处理，并做好记录。（5）上机检测样品待仪器平衡完毕后，装满洗瓶内的清洗溶剂（清洗溶剂要当天用 当天配置），根据作业指导书或者国标，走标准曲线或者单点， 可。（6）记录检验结果仪器走完样品后，根据峰的保留时间定性，峰面积定量，如实记 录检验结果于原

35、始记录中，（7）核实出具结果对于外部样品的检测， 检验结果。（8）核实检验计戈1对于内部样品的检测，上机即原始记录按方法要求进行实际记录检测值。记录好检验结果后，核实无误后即可出具输入结果前需再次核实检验计划，保证没 有漏检后方可输入检验结果。（9）输入 unliab打开unliab系统，选择正确的样品类型和业务类型，创建样品， 创建完毕后如实填写 unliab系统中的信息卡，正确分配检测项目，输 入结果。结果报出时，检测结果在检出限以下时，均报未检出；检测 结果在检出限以上时，报实测值。如检验处均使用程序输单，则要求各岗位的输单密码不能外漏；结果输入后不允许随意改动，如需修改则上报直属领导同

36、意后则 进行修改，其他人员无权修改；所有过程检验结果均在出具结果的当班下班前提交系统或输入固 定文件夹中；按照规定的程序进入预定的表格，不允许输入的内容和文件名称 不对应、存在相同或能引起误解的名称，不能保证储存的唯一性。检验报告储存要求：如使用Unilab系统出具结果，由于起系统有 自动保存功能，故不需要对其进行下载保存，其他电子版检验报告要 求每半年进行备份刻盘一次。3.2三聚氰胺检测原理：试样用三氯乙酸溶液-乙酸铅提取，经阳离子固相萃取柱净化后，用高效液相色谱法测定，外标法定量。二聚氰胺检验方法流程图：接样7称量样品宀加0.1%二氯乙酸50mlT加0%乙酸铅2ml T超声20min宀离心

37、10min (8000r/min )宀过混合型阳离子交换柱7净化7氮吹720%甲醇溶液定容 1ml7 0.45um过滤上机。3.1.1称量样品：严格按照天平的使用规程操作即可。具体如下: 天平使用前检查:(1) 准备使用天平时观察周围是否存在震动的情况，如果存在应在震动结束后再称取样品。(2) 检查天平的使用环境是否符合温度1030C、湿度2585%的要求，水平泡是否处于中央位置。(3)打开天平，待天平完成自检显示“0.0000 ”时，可以使用。(4) 对于过冷、过热和含有挥发性及腐蚀性的物体，不可放入天平内称 量，被测物不得超过天平最大的负载。3.2.2 称量(1) 将被测物放在称盘中央，待

38、显示器左侧边的“O”标志熄灭后，该 数字即为被称物的质量;(2) 如称量需盛放物质，先称量容器，按TAR键，显示为零即去皮，再 置被称物质于容器中，这时显示的是被称物的净重;(3) 每次称量时都应将天平门关闭，称量样品过程中，避免出现抽拉抽 屉、人员走动、倚靠实验台等对结果有影响的动作;(4) 称量完毕后关闭天平开关，但不必断掉电源;(5) 称样时所使用的离心管等要编号与样品一一对应，并且记录下样品 的质量;323力口药品323.1加入药品时注意要边加边摇，让药品与样品充分接触，使粉 末状样品充分的溶解在药品中。3.2.4超声处理：超声样品时执行超声波操作规程即可。具体如下:3.2.4.1工作

39、前准备:(1)检查电源连接线是否有破损，电源插头是否插入220V的三芯电源 插座并连接牢固;(2) 检查清洗槽是否有异物;(3) 检查排水阀门是否关闭;324.2 超声处理:(1) 样品在超声时要求超声波清洗机中的液面一定要高于样品的液面(2)时间控制符合要求；(3)样品超声处理完成后，关闭电源开关，将槽内水放净，并将机体擦洗干净；断开电源，让机体自然散热 3.2.5离心样品：样品离心时执行离心机的操作规程即可。如下:(1) 检查电源及数据线连接是否牢固，打开仪器电源，设定所需温度(2) 待温度达到设定温度时， 打开仪器上盖，将需离心的样品对称放入 离心机内，关闭仪器上盖，设定转速，设定运转时

40、间，点击开始离心(3) 离心结束后将样品取出，如暂时不使用，需将仪器上盖盖好，如长 时间不使用，需将腔体内冷凝水清理后，关闭仪器电源326 过混合型阳离子交换柱离心结束样品离心时准备好所需要的阳离子小柱和试管并一一编号。后活化阳离子小柱、上样、淋洗等。整个萃取过程要求衔接紧密不可以使小柱干燥，并且每一种液体按要求控制流速在1ml/min左右;3.2.7氮吹：执行氮吹仪操作规程即可，具体如下: 3.2.7.1 用前检查 (1)检查电源线路是否正常;(2) 检查氮气连接管路是否正常;(3) 检测氮吹针是否清洁，并进行必要的清洁工作 327.2 使用(1)连接电源，打开氮吹仪开关，调节温度，准备升温

41、;(2)将针头放置好，调节氮气流路畅通。将氮气开关打开，使用调压阀调节氮气流速适合;(3) 待温度和压力达到检验要求，则放置样品;调节针头位置(距离液面1-2cm)，使氮气开始吹干样品; 样品吹干后，关闭氮气。关闭氮吹仪开关，取下电源插头;取出样品； 3.2.7.3注意事项 (1)注意保持氮吹仪清洁，氮气管路一定要连接紧密； 三聚氰胺要求氮吹的温度是50± 5 (C)，并且吹针要用甲醇擦拭 干净，防止样品间交叉污染，氮气流量以液面有轻微的波动即可，不 可以吹的液面飞溅。并且所使用的试管是玻璃的，在氮吹时小心不要发生强烈得磕碰，以免碰碎试管 328 浓缩完全的吹干后用所需的溶液 1毫升

42、定容，漩涡1分钟，过相应的0.22um或0.45um针头过滤器（针头过滤器分水系和有机系）缓慢地过 滤样品到已经一一编号的进样瓶中准备上机。329 上机 仪器参考条件:流动相：离子对缓冲盐：乙腈=90:10 流速：1.0ml/min 柱温：40 C波长;240nm 进样量：20ul 备注：以上仪器条件是参考条件，在实际操作过程中可以根据样品特 性和仪器状态做适当调整 3.2.10 此方法的检出限 2mg/kg 3.3山梨酸、苯甲酸3.3.1山梨酸、苯甲酸检测原理：去除试样中脂肪和蛋白质，甲醇稀 释，过滤后，采用反相液相色谱法奋力测定。3.3.2方法检测流程图：称量样品7加入0.1M氢氧化钠溶液

43、25ml宀超 声水浴15min宀调节PH到8-分别先后加入2ml亚铁氰化钾溶液和乙0.45um滤膜过滤取清液上机 333色谱参考条件: 色谱柱：C18,250mm*4.6mm 5um 流动相：甲醇：磷酸盐缓冲溶液 =1: 9 流速：1.2ml/min 检测波长：227nm 柱温：室温 进样量：10ul3.3.4山梨酸、苯甲酸检出限1mg/kg 3.4安赛蜜、糖精钠 3.4.1安赛蜜、糖精钠检测原理：样品中安赛蜜、糖精钠经高效液相 反相柱C18分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。3.4.2方法流程图：称量样品7加入氢氧化钠溶液25ml宀超声15minT调节PH到8 （用0.5mol/l的硫

44、酸）T分别先后加入 2ml亚铁氰化钾和乙酸锌溶液宀振摇静止15min宀加入40ml甲醇宀定容到100ml 静止15min宀0.45um有机滤膜取清液过滤上机检测。3.4.3仪器参考条件: 柱温箱：30-40 C 紫外检测器：230nm 进样量：20ul和10ul 色谱柱：C18 或 C8 (250*4.6mm,5um) 流速：1.0ml/min备注：以上仪器条件是参考条件，在实际操作过程中可以根据样品特性和仪器状态做适当调整。344安赛蜜、糖精钠的检出限3mg/kg3.5对羟基苯甲酸乙丙酯3.5.1对羟基苯甲酸酯类检测原理：试样用甲醇超声波提取，取上清液过滤，以高效液相色谱分离， 二极管阵列检

45、测器检测，外标法定量。3.5.2 依据 DB37/T1100-20083.5.2方法检测流程图：称取样品于25ml比色管宀加入15ml甲醇T漩涡2min宀超声10min宀用甲醇定容至 25ml宀静止分层，取上清液经0.2um有机滤膜过滤上机检测。3.5.3仪器条件:色谱柱：C18柱，250*4.6nm流动相：甲醇：0.02mol/l乙酸铵溶液=60:40流速：1.0ml/min柱温：35 C进样体积：10ul检测波长扫描范围：210nm-400nm 定量波长 256nmb3.5.4 本方法检出限为 1mg/kg3.6山梨酸、苯甲酸、安赛蜜、糖精钠、对羟基苯甲酸乙丙酯的前处理很相似，注意事项统一为:3.6.1超声时液面应高于样品的液面。3.6.2亚铁氰化钾和乙酸锌的位置不能调换。363用力振摇。3.7食品中合成着色剂的测定3.7.1食品中合成着色剂的测定原理：食品中人工合成着色剂用聚酰 胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪， 经 反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。3.7.2检测方法流程图:样品称取20.0