月季的花药离体培养

1、课题课题2 2 月季的花药培养月季的花药培养 花中皇后花中皇后月季又称月季又称“月月红月月红”，自然花期，自然花期5至至11月月主要知识主要知识 （一）、被子植物的花粉发育和产生（一）、被子植物的花粉发育和产生花粉植株的两条途径花粉植株的两条途径（二）、月季花药离体培养的操作过（二）、月季花药离体培养的操作过程程（三）、影响花药培养的因素（三）、影响花药培养的因素知识回顾知识回顾v单倍体育种的过程？单倍体育种的过程？花药离体培养（花药离体培养（N）单倍体植株（单倍体植株（N）秋水仙素处理，秋水仙素处理，使染色体翻倍使染色体翻倍植株（植株（2N）特点：特点：1 明显缩短育种年限明显缩短育种年限2

2、 后代植株都为纯合子。后代植株都为纯合子。正常植株（正常植株（2N）花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多花粉囊状结构，内有很多花粉雄蕊雄蕊一、被子植物的花粉发育一、被子植物的花粉发育花粉花粉 花粉粒是由花粉粒是由花粉母细胞花粉母细胞经过经过减数分裂减数分裂而形而形成，因此，花粉粒是成，因此，花粉粒是单倍体的生殖细胞单倍体的生殖细胞。 被子植物花粉的发育要经历：被子植物花粉的发育要经历： 四分体时期、单核期和双核期四分体时期、单核期和双核期等阶段。等阶段。造孢细胞造孢细胞 花粉母花粉母细胞细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）4 4个小孢子个小孢子减数分裂减数分裂小孢子四分体小孢子四分体1 1个

3、小个小孢子孢子（单细胞花粉粒）（单细胞花粉粒） 花粉粒花粉粒（双核）（双核）有丝分裂有丝分裂单核单核双核双核花粉粒 花粉母花粉母细胞细胞（小孢子母细胞）（小孢子母细胞）4 4个小孢子个小孢子减数分裂减数分裂小孢子四分体小孢子四分体1 1个小个小孢子孢子 花粉粒花粉粒（双核）（双核）有丝分裂有丝分裂单核单核双核双核营养细胞核营养细胞核营养细胞营养细胞生殖细胞核生殖细胞核2个精子个精子花粉是花粉是单倍体单倍体的生殖细胞的生殖细胞小孢子母细胞小孢子母细胞小孢子小孢子花粉囊花粉囊花药花药 花粉粒花粉粒（双核期）（双核期）成熟成熟花粉花粉8个精子个精子小孢子母细胞小孢子母细胞（ ）时期）时期单核（单核（

4、 ）期）期双核期双核期（ ）细胞核）细胞核 （ ）细胞核）细胞核（ ）细胞）细胞（ ）细胞）细胞（ ）个精子）个精子（ ）分裂）分裂（ ）分裂）分裂单核（单核（ ）期）期（ ）分裂）分裂减数减数小孢子四分体小孢子四分体中中边边有丝有丝生殖生殖生殖生殖花粉管花粉管营养营养有丝有丝22NNNNNNNNN注意：v二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉花粉管细胞核和生殖细胞核管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中（精子在花粉管中形成）形成）v三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，生殖细胞进行一次

5、有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两一个营养核和两个精子。个精子。v两个精子和一个营养核的两个精子和一个营养核的基因型基因型相同相同。v1、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（、关于被子植物花粉发育的说法，不正确的是（ ）vA、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的、花粉粒是在花药中的花粉囊里形成的vB、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果、被子植物精子的形成是直接减数分裂的结果vC、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核、被子植物的花粉的发育要经历四分体时期、单核期、双核期等阶段期、双核期等阶段vD、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，

6、再移、花粉粒在发育过程中，核先位于细胞一侧，再移到细胞中央到细胞中央BD取决：培养基中的取决：培养基中的激素种类激素种类及及浓度浓度配比配比二、产生花粉植株的两条途径二、产生花粉植株的两条途径体细胞胚（胚状体）：体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为合子胚类似，被称为。能否成功：能否成功：1 1、材料的选择、材料的选择2 2、培养基的组成、培养基的组成（ MSMS培养基培养基+ +不同比例的植物生长调节激素）不同比例的植物

7、生长调节激素）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等三、影响花药培养的主要因素三、影响花药培养的主要因素不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；破碎；不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难；料消毒带来困难；挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，菌少，易消毒。菌少，易消毒。1、材料的选择：、材料的选择：不同种类植物的诱导成功率不同。不同种类植物的诱导成功率不同。同一种植物，

8、亲本植株的生理状况对诱导成功同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。率有直接影响。合适的花粉发育时期合适的花粉发育时期：花期早期时的花药最佳。：花期早期时的花药最佳。选择最合适的花粉发育时期选择最合适的花粉发育时期1、材料的选择、材料的选择不同种类植物的诱导成不同种类植物的诱导成功率不同功率不同。同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导同一种植物，亲本植株的生理状况对诱导成功率有直接影响。成功率有直接影响。合适的花粉发育时期：合适的花粉发育时期：花期早期时的花药花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株比后期的更容易产生花粉植株为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？为什么花瓣松动会给

9、材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。给材料的消毒带来困难。 花药（载玻片上）花药（载玻片上）1%的醋酸洋红的醋酸洋红1滴滴用镊用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片柄将花药捣碎，盖上盖玻片镜检（花粉粒的细镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）胞核被染成红色） 花药（在卡诺氏固定液中处理花药（在卡诺氏固定液中处理20min）取出，置于取出，置于载玻片上载玻片上焙花青铬矾溶液染色焙花青铬矾溶液染色盖上盖玻片盖上盖玻片镜检镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）二、材料的消毒：二、材料的消毒：花花蕾蕾（70酒精）

10、酒精）大约大约30s（无（无菌水）菌水）清洗清洗（无菌（无菌吸水纸）吸水纸）吸干水吸干水分分（1氯化氯化汞溶液）汞溶液）24min（无（无菌水）菌水）冲洗冲洗 月季花蕾的消毒与菊花外植体的消月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？毒相比较，二者有何不同？ 在酒精消毒前，花药不需要预先用流在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗 （二）材料的消毒（二）材料的消毒5 5、无菌水冲洗、无菌水冲洗3 35 5次次 花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态1、花蕾用、花蕾用体积分数为体积分数为70%的酒精的酒精浸泡浸泡30秒秒2、无菌水清洗、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入、放入质量分数为质量分数为0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中24分钟分钟 （质量分数为质量分数为1%的的次氯酸钙溶液次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液或饱和漂白粉溶液）5 5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点：项目项目相同点相同点不同点不同点植物组织植物组织培养技术培养技术离体的植物组离体的植物组织经脱分化形织经脱分化形成愈伤组织，成愈伤组织，再分化成丛芽，再分化成丛芽，诱导出根，然诱导出根，然后进行移栽。后