AMD3100联合地塞米松对造血干细胞的动员作用

1、 燕备战，等.AMD3100联合地塞米松对造血干细胞的动员作用 WWW. CRTER .org 中国组织工程研究第20卷第36期2016 - 09 - 02出版 Chin ese Journal of Tissue Engin eeri ng Research Sep tember 2, 2016Vol.20, No.36 5352P.O. Box 10002, She nyang110180www.CRTER.org -研究原著 AMD310联合地塞米松对造血干细胞的动员作用 450003) 燕备战，马会敏，孔存权，梁 玉，朱伟彦，蒋舒婷(河南省人民医院输血科，郑州大学人民医院输血科，河南省

2、郑州市 ORCID: 0000-0001-5923-7932(燕备战) 引用本文：燕备战，马会敏，孔存权，梁玉，朱伟彦，蒋舒婷.AMD3100联合地塞米松对造血干细胞的动员作用J.中国组织 工程研究，2016，20(36):5351-5357. D0I: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.36.005 AMD3100 与地塞米松联合动员造血干细胞从骨髓向外周血迁移 AMD3100 或地 (1)对照组 塞米松能够动员 AMD3100 组 检测CD34 + 造血干细胞从骨 C57BL/6 小 随机分为4组 (3)地塞米松组 细胞、白细 髓向外周血迁 鼠60只 iTJi 1

3、/ byj y -J T n. (4)AMD3100+ 地 胞含量，集 移，两者联合应 塞米松组 落形成能力 用对小鼠造血干 细胞动员效果优 于单一药物 文章快速阅读: 中图分类号：R394.2 文献标识码:A 文章编号：2095-4344 (2016)36-05351-07 稿件接受：2016-07-12 燕备战，男，1969年生， 河南省新安县人，汉族， 2014年郑州大学毕业， 硕士，副主任技师，主要 从事临床输血方面的研 究。 文题释义： 造血干细胞：通俗地讲，造血干细胞是指尚未发育成熟的细胞，是所有造血细胞和免疫细胞的起源， 不仅可以分化为红细胞、 白细胞和血小板，还可跨系统分化为各

4、种组织器官的细胞，具有自我更新、 向分化和归巢(即定向迁移至造血组织器官)潜能。因此是多功能干细胞，医学上称其为“万用细胞”， 也是人体的始祖细胞。 (包 造血干细胞移植：是指将异体或自体的造血干细胞移植到体内，担负起造血作用，包括红细胞系统、白 细胞系统、巨核细胞系统及免疫功能的重建。由于多能造血干细胞存在于骨髓、外周血、胎肝、脐带 括胎盘)等组织中，因此造血干细胞也包含在广义的“骨髓移植”中，国际骨髓移植登记处、欧洲骨髓移 植协作组(EBMT)及亚太骨髓移植协作组(APBHTG)均以骨髓移植命名，包括上述造血干细胞移植的内容。 摘要 背景：正常状态下外周血中的干细胞数量很低，将供者骨髓中的

5、造血干细胞动员到外周血是造血干细胞 移植的关键。 目的：探索AMD3100和地塞米松联合用药对小鼠造血干细胞的动员效果，为临床应用奠定基础。 方法：选用C57BL/6小鼠，单独或者联合注射 AMD3100和地塞米松后采集外周血和骨髓造血干细胞， 使用流式细胞仪鉴定外周血和骨髓中 CD34+细胞的含量，常规方法计数外周血白细胞含量，集落形成 实验计数外周血和骨髓中造血干细胞粒-巨噬细胞混合集落形成单位。 结果与结论：AMD3100和地塞米松均可刺激外周血和骨髓中CD34+细胞含量上升，分别在 4h和 2 h时达到高峰，当联合使用AMD3100和地塞米松时，外周血和骨髓中 CD34 +细胞含量上升

6、幅度最大； AMD3100或地塞米松均可刺激外周血中白细胞含量上升，AMD3100和地塞米松联合动员的外周血 白细胞含量高于其他组；AMD3100动员后外周血和骨髓中造血干细胞粒-巨噬细胞混合集落形成数 量显著高于对照组，AMD3100和地塞米松联合动员的外周血和骨髓中造血干细胞粒-巨噬细胞混合集 落形成数高于单用 AMD3100或地塞米松动员组；AMD3100或地塞米松能够动员造血干细胞从骨髓 向外周血迁移，两者联合应用对小鼠造血干细胞动员效果优于单一药物。 关键词： 干细胞；造血干细胞；地塞米松；AMD3100 ;造血干细胞移植；动员 主题词： 造血干细胞移植；地塞米松；造血干细胞动员；组

7、织工程 基金资助： 河南省科技攻关项目(142102310126) Yan Bei-zha n. Master, Associate chief tech ni cia n, Dep artme nt of Blood Tran sfusi on, Henan Provin cial People Hosp ital and People Hosp ital of Zhen gzhou Uni versity, Zhen gzhou 450003, Henan Province, Chi na 0 弓 I言In troduct ion Comb in ati on effect of AMD3

8、100 and dexamethas one on the mobilizatio n of hemat opo ietic stem cells Yan Bei-zhan, Ma Hui-min, Kong Cun-quan, Liang Yu, Zhu Wei-yan, Jiang Shu-ting (De partment of Blood Transfusion, Henan Provincial People s Hospital and People s Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450003, Henan Pr ovi

9、nce, China) Abstract BACKGROUND:The number of hemat opo ietic stem cells in the p eri pheral blood is very low at normal p hysiological state. So it is critical to mobilize hemat opo ietic stem cells from donor bone marrow into the perip heral blood. OBJECTIVE: To study the combination effect of AMD

10、3100 and dexamethasone on the mobilization of hemat opo ietic stem cells in mice, thereby laying the foundation for clinical app lication. METHODS: C57BL/6 mice were injected with AMD3100 and dexamethasone alone or in combination. Then, hemat opo ietic stem cells in the p eri pheral blood and bone m

11、arrow were collected. CD34+ cell concentration in the p eri pheral blood and bone marrow was determined by flow cytometer and the content of leucocytes in the p eri pheral blood was counted by a normal method. The CFU-Mix colony formation ability of hemat opo ietic stem cells was identified by cell

12、colony forming assay. RESULTS AND CONCLUSION:The concentration of CD34 + cells in the peri pheral blood and bone marrow, the content of leukocytes in the p eri pheral blood and the CFU-Mix colony formation ability of hemat opo ietic stem cells were all impr oved by both AMD3100 and dexamethasone and

13、 esp ecially their combined use. This indicates that both AMD3100 and dexamethasone could mobilize hemat opo ietic stem cells to migrate from the bone marrow to the perip heral blood, and when used in combination, the mobilization effect is better than that of single drug. Subject headings:Hemat opo

14、 ietic Stem Cell Trans pl antation; Dexamethasone; Hemat opo ietic Stem Cell Mobilization; Tissue Engineering Funding: the Scientific Tackle Key P roject of Henan P rovince, China, No. 142102310126 Cite this article:Yan BZ, Ma HM, Kong CQ, Liang Y, Zhu WY, Jiang ST.Combination effect of AMD3100 and

15、dexamethasone on the mobilization of hemat opo ietic stem cells. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(36):5351-5357. 落刺激因子(G-CSF)是最常用的造血干细胞动员剂，但 造血干细胞是从血液或骨髓中分离岀来的具有高 度自我更新和分化潜能的细胞，能够分化成所有类型的 血细胞。研究发现，造血干细胞可以横向分化成其他类 是该药作用时间短、价格昂贵，不利于造血干细胞的采 集4。单用粒细胞集落刺激因子，临床上仍有大约 5，寻找其他有效 的患者不能动员岀足够的造血干细胞 35% 型

16、的细胞，如肝细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、上皮细 神经细胞等，为多种疾病的治疗开辟了广阔的前 的造血干细胞动员方法，具有重要的科研价值和临床应 胞、 用前景。 景。 造血干细胞移植是治疗血液和骨髓疾病的重要手 基质细胞衍生因子1(SDF-1)和CXC趋化因子受体 段, 如治疗白血病、淋巴瘤、浆细胞骨髓瘤、骨髓增生 异常综合征等 O按造血干细胞的来源可分为骨髓移植、 4(CXCR4)分别属于趋化因子 CXC亚家族和CTXR类G 蛋白偶联受体超家族。SDF-1/CXCR4在机体的免疫调 外周血干细胞移植和脐血干细胞移植。与其他方法相 比，外周血来源造血干细胞收集时对供者创伤较小，在 节、炎症反应、中

17、枢神经系统发育和肿瘤迁移中起着重 要的作用。它们可以调控多种信号通路从而影响细胞 临床上受到广泛的重视。 的生物学过程。研究证实SDF-1/CXCR4 可以上调 造血干细胞动员、迁移、归巢的关键因素 在正常生理状态下，外周血液中的干细胞数量很 低，如何将供者骨髓中的造血干细胞动员到外周血是进 行造血干细胞移植的关键。临床常利用一些细胞因子、 趋化因子、小分子抑制剂等动员剂将造血干细胞从骨髓 中释放岀来3，使外周血中的造血干细胞数量增加，从 survivin从而调控ERK及PI3K/Akt信号通路，进而影响细 胞周期；SDF-1/CXCR4 也可以影响Rac1/ERK、JNK 信号通路从而促进生

18、长因子的表达 ;抑制CXCR4可以 影响 Wnt/ 3-catenin 信号通路910 o SDF-1/CXCR4 也是 11 O CXCR4 而在外周血中采集到足够数量的造血干细胞。粒细胞集 高表达于骨髓的造血干/祖细胞，SDF-1 表达于成骨细 燕备战，等.AMD3100联合地塞米松对造血干细胞的动员作用 WWW. CRTER .org 胞、内皮细胞以及骨髓基质细胞12，表达CXCR4的造 血干/祖细胞沿着SDF-1浓度梯度实现归巢13 O 积的生理盐水。注射后 0, 2, 4，8，12 h采集外周血和 骨髓血，每个时间点 3只。 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R C

19、ODEN: ZLKHAH5357 SDF-1 对 、硼 AMD3100在临床上有广泛的应用，它对造血干细 胞的动员机制已基本阐明。当使用AMD3100阻断 SDF-1/CXCR4信号通路时，骨髓中高表达的 造血干/祖细胞失去趋化性，造血干/祖细胞无法顺着 SDF-1浓度梯度迁移至骨髓，更多的停留在外周血中， 从而促进了造血干细胞的动员14 O普通方法动员失败的 人群，可利用AMD3100成功动员1517 O AMD3100分别 在2008年和2009年被美国食品药品管理局(Food and Drug Administration ， FDA) 18和欧洲药品管理局 (European Medi

20、cines Agency， EMA) 19作为细胞动员 剂上市，与粒细胞集落刺激因子联用治疗骨髓瘤和淋巴 瘤。 地塞米松是糖皮质激素类药物，常用来促进造血干 细胞的动员。研究表明，外周血造血干细胞采集3 h前 静脉滴注地塞米松10 mg，可以促进骨髓中的造血干细 胞释放到外周血中。地塞米松和其他药物联合作用， 可促进造血干细胞的动员。与地塞米松联用的药物有沙 利度胺21、粒细胞集落刺激因子22-24、环磷酰胺25 替佐米等26 O地塞米松和糖基化的粒细胞集落刺激因子 联合应用，可缩短不良反应的时间27 O 实验以C57BL/6小鼠为模型，探索AMD3100和地塞 米松联合作用对小鼠造血干细胞动

21、员的效果，为临床应 用奠定了基础。 1.4.2 外周血造血干细胞采集小鼠自眼眶静脉丛采 血，置于抗凝管中，采用 Ficoll-Hy pague密度梯度离心 获取外周血单个核细胞，PBS洗涤2次，制成外周血单 个核细胞悬液。 1.4.3骨髓造血干细胞的采集采外周血后即刻颈椎 脱臼处死小鼠，将小鼠浸泡于体积分数为75%乙醇中消 毒1 min，无菌条件下取股骨，尽量去除表面的附着组 织，2 mL IMDM冲岀骨髓细胞，用枪头反复吹打成细胞 悬液，用70卩m孔径的过滤器滤除其中的凝集物， Ficoll-Paque Plus淋巴细胞分离液分离单个核细胞。 4 C，1 000 xg离心5 min，制备成单

22、个核细胞悬液。以 1X10 9 L-1的细胞浓度接种于含体积分数为10%胎牛血 清的IMDM培养基(含青、链霉素各100 U/mL)中，置于 37 C,体积分数为5% CO 2培养箱，培养48 h后收集非 贴壁的悬浮细胞。 1.4.4外周血和骨髓造血干细胞表型CD34的检测吸 取200卩L田胞悬液，分为2组，一组加入FITC标记的大 鼠抗小鼠CD34抗体，另 一组加入 FITC标记的大鼠 lgG2a作为对照，室温避光孵育20 min，流式细胞仪检 测CD34 +细胞百分比。 1.4.5外周血白细胞计数取5卩L卜周血加入195卩L 2%醋酸溶液中，混匀后利用细胞计数板在显微镜下进 行白细胞计数。

23、 1材料和方法Materials and methods 1.4.6 外周血和骨髓造血干细胞集落形成的检测将 细胞悬液以1X108 L-1的细胞浓度接种于半固体培养基 1.1 设计细胞分子生物学体内实验。 中，培养基的成分为1.2% 牛血清白蛋白、胎牛血清、 在37 C,体积分数为5% 巨噬细胞混合集落形成单位 1.2 时间及地点实验于2014年8月至2015年5月在 河南省人民医院病理科完成。 1.3 材料SPF级C57BL/6小鼠60只，8- 12周龄，雌 雄各半，体质量18-24 g，购自中科院上海实验动物中 心O AMD3100、地塞米松、甲基纤维素购自Sigma公司; Ficoll-

24、Hypague、Ficoll-Paque Plus 淋巴细胞分离液购 自美国GE公司；IMDM培养液购自HyClone公司；牛血 清白蛋白、胎牛血清、谷氨酰胺、青霉素、链霉素购自 Gibco公司。 1.4 实验方法 甲基纤维素、0.1 g/mL去离子 3%谷氨酰胺、IMDM培养液。 CO 2条件下培养14 d计数粒- (CFU-Mix)。以40个以上细 胞组成的细胞团为1个集落。 1.5 主要观察指标 小鼠外周血和骨髓造血干细胞 表型CD34 +细胞含量；外周血中白细胞含量；外周 血和骨髓造血干细胞集落形成单位。 1.6 统计学分析 实验数据均以x 5表示，使用 GraphPad Prism

25、5 软件进行处理。组间差异使用t检验 或单因素方差分析，P 0.05为差异有显著性意义。 2 结果 Results 1.4.1 分组给药方法 60只C57BL/6小鼠随机分为 4 组：对照组、 AMD3100组、地塞米松组、AMD3100+ 地塞米松组，每组 15只。依次按AMD31005 mg/kg， 地塞米松0.2 mg/kg的剂量皮下注射，对照组注射等体 2.1实验动物数量分析参加实验60只小鼠，均进入 结果分析，中途没有脱落。 燕备战，等.AMD3100联合地塞米松对造血干细胞的动员作用WWW. CRTER .org 表1不同处理组外周血造血干细胞表型CD34+细胞含量 (x 5，n=

26、3，%) Table 1 Concentration of CD34 + cells in the perip heral blood after different treatments 表2 不同处理组骨髓造血干细胞表型CD34 +细胞含量 (xs，n=3，%) + Table 2 Concentration of CD34 cells in the bone marrow hemat opo ietic stem cells after different treatments 5354P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org 时间(h)

27、 对照组 AMD3100 组 地塞米松组 AMD3100+ 地塞米松组 时间(h) 对照组 AMD3100 组 地塞米松组 AMD3100+ 地塞米松组 0 0.34 ).03 0.35 ).04 0.37 ).06 0.40 ).06 0 5.14 ).07 5.20 ).09 5.11 .06 5.16 ).05 2 0.41 ).05 0.96 ).07a 1.57 ).11b 1.71 ).13 2 5.25 ).12 6.74 ).07a 7.76 ).05b 7.98 ).08 4 0.44 ).02 1.87 ).10b 1.41 ).09b 2.24 ).15d 4 5.19

28、).09 8.45 ).06b 7.23 ).08a 9.13 ).11d 8 0.33 ).04 1.33 ).11b 1.11 ).12a 1.88 ).11c 8 5.31 ).14 7.88 ).16a 6.86 ).13a 8.39 ).13c 12 0.47 ).06 1.05 ).07a 1.01 ).08a 1.65 ).10c 12 5.18 ).08 7.56 ).07a 6.47 ).11a 7.97 ).10c 表注：与对照组比较， cP 0.05，dp 0.01。 aP 0.05，bp 0.01 ;与单一药物组比较， 表注：与对照组比较， cP 0.05，dp 0.0

29、1。 aP 0.05，bP 0.01 ;与单一药物组比较， 表3不同处理组小鼠外周血白细胞含量 9- 1 (X ，n=3，1X10 L ) Table 3 Concentration of leukocytes in the perip heral blood after different treatments 表4 不同处理组外周血造血干细胞CFU-Mix集落形成单位 O (X ，n=3，个/10 ) Table 4 Yields of CFU-Mix in peri pheral blood-derived hemat opo ietic stem cells after differe

30、nt treatments 时间(h) 对照组 时间(h) 对照组 AMD3100组 地塞米松组AMD3100+ 地塞米松组 AMD3100组 地塞米松组 AMD3100+ 地塞米松组 0 14.31 1.35 15.64 1.13 16.65 1.33 14.47 1.33 0 5.25 ).66 6.14 1.24 5.67 ).94 5.88 ).64 2 16.12 ).57 19.32 1.36a 22.56 ).65b 24.65 ).94c 2 5.65 ).45 14.36 1.13a 6.28 1.37 18.87 1.46 4 17.89 1.69 25.65 ).78b

31、19.95 1.46a 28.13 1.87d 4 5.14 ).69 23.13 ).97 b 5.21 1.04 25.63 1.14c 8 15.35 1.96 23.46 ).89b 18.64 1.13a 25.35 1.56c 8 5.43 1.12 20.44 1.34b 5.54 ).65 22.41 0.82c 12 16.78 ).86 21.97 1.12a 17.86 ).84a 24.10 ).74c 12 5.86 ).74 16.25 ).43b 5.33 ).42 19.11 D.65c 表注: 与对照组比较， aP 0.05，bp 0.01 ;与单一药物组比较

32、， 表注: 与对照组比较， aP 0.05，bp 0.01 ;与单一药物组比较， cP 0.05。 cP 0.05，dp 0.01 表5不同处理组骨髓造血干细胞CFU-Mix集落形成单位 6 (xs，n=3，个/10 ) 达到高峰，随后 CD34+细胞数量逐渐下降。在骨髓中 CD34 +细胞含量逐渐上升，与外周血中CD34+细胞含量 Table 5 Yields of CFU-Mix in bone marrow-derived hemat opo ietic stem cells after different treatments 时间(h) 对照组 AMD3100 组 地塞米松组 AMD

33、3100+ 地塞米松组 0 66.67 5.56 67.83 .35 63.25 8.94 66.34 .67 2 68.76 7.83 88.46 .42a 65.47 7.74 107.78 12.54 4 64.31 3.31 118.42 11.73b 66.39 9.46 141.23 14.62c 8 73.35 8.82 97.86 .14b 64.01 6.63 115.68 11.26c 12 67.22 10.33 82.41 .36a 68.56 8.69 94.37 .14 表注：与对照组比较，aP 0.05 , bp 0.01 ；与单一药物组比较, cP 0.05。

34、变化基本一致。当联合使用 AMD3100和地塞米松时，外 周血和骨髓中CD34+细胞含量上升幅度最大，表明联合 使用AMD3100和地塞米松可以促进造血干细胞的动员。 2.3 小鼠外周血中白细胞含 量向小鼠体内注射 AMD3100或地塞米松后，小鼠外周血中白细胞含量在 2 h已经开始上升，小鼠注射AMD3100后4 h外周血白细 胞含量达到高峰，注射地塞米松 2 h后外周血白细胞含 量达到高峰， AMD3100和地塞米松联合用药的小鼠外 周血白细胞含量在 4 h时达到高峰，随后白细胞含量逐 2.2小鼠外周血和骨髓造血干细胞表型 CD34 +细胞含 渐下降，但依然显著高于对照组，见 地塞米松联合

35、用药组外周血白细胞含量高于其他组, 表 3。AMD3100 量 向小鼠体内注射 AMD3100或地塞米松后，采集外 CD34 + 细 明两者具有协同作用。 周血和骨髓造血干细胞，使用流式细胞仪检测 2.4小鼠外周血和骨髓造血干细胞集落形成单位 胞含量，结果见 表1和表2。AMD3100和地塞米松均可 刺激使外周血CD34 +细胞含量上升，分别在 4 h和2 h时射AMD3100的小鼠，外周血和骨髓造血干细胞 CFU-Mix集落形成均高于对照组，并且在2 h时集落形成 燕备战，等.AMD3100联合地塞米松对造血干细胞的动员作用 WWW. CRTER .org 最多，见表4和表5。注射地塞米松的

36、小鼠集落形成数量 与对照组无明显差异，联合注射AMD3100和地塞米松 落形成数高于单用 AMD3100或地塞米松动员组，进一 步证明了 AMD3100和地塞米松联合作用可以加强小鼠 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH5357 形成的集落数高于对照组和单独注射 AMD3100 的小 鼠，表明地塞米松可以加强 AMD3100对造血干细胞 造血干细胞的动员效果。实验中注射地塞米松的小鼠造 Pap off 等39 血干细胞集落形成数量和对照无明显差异。 CFU-Mix集落形成的作用。 利用体外实验证实，将地塞米松加入早产胎儿的造血祖 细胞中，会抑制粒-

37、巨噬细胞克隆形成。在小鼠的粒-单 3 讨论 Discussi on SDF-1/CXCR4 在调节细胞的迁移、趋化、 血管生成等方面发挥重要的作用 28 O SDF-1 基因敲除的小鼠会岀现骨髓内造血细胞生成减少、 黏附、 或 CXCR4 血管 发育异常以及脑神经异常等现象 29 O AMD3100 SDF-1竞争绑定到 髓基质细胞释放 CXCR4受体30，加强SDF-1从骨 到外周血中31，从而阻断SDF-1/ 核细胞集落培养体系中加入地塞米松后，粒-单核细胞 集落形成受到抑制40。Win kier等41的研究表明单用 AMD3100集落形成数量提高了 16倍，这与此实验的结 果一致。 Ca

38、ulfield等42证明地塞米松以剂量依赖的方式上 调外周血单核细胞 CXCR4的表达。在人静止T细胞中, CXCR4相互作用, 周血循环中32。 诱导造血干 /祖细胞从骨髓释放到外 地塞米松通过诱导酪氨酸激酶的磷酸化激活下游信号， 加强SDF-1/CXCR4 介导的信号通路，从而导致微丝聚 合和Rac的激活43。AMD3100 的药物靶点也是 AMD3100和地塞 CD34选择性的表达于早期造血干/祖细胞表面，是 造血干细胞分离纯化的主要标记33。因此，临床上常用 CD34 +细胞含量来表征造血干细胞的含量。Lataillade 等34研究表明SDF-1可诱导CD34 +造血干/祖细胞的增

39、殖。AMD3100 可使释放到外周血的 CD34 +细胞增多， SDF-1/CXCR4 信号通路，因此作者推测 AMD3100和 地塞米松联用，可能通过调控SDF-1/CXCR4 介导的信 号通路起作用。 实验结果表明，AMD3100或地塞米松能够动员造 血干细胞从骨髓向外周血迁移，并且 AMD3100 简化干细胞采集的过程，提高造血干细胞移植的成功 率35。与单用粒细胞集落刺激因子比起来， 和粒细胞集落刺激因子联合应用可以显著增加非霍奇 金氏淋巴瘤患者循环外周血中CD34 +细胞含量，提高患 者造血干细胞的动员能力36 O实验采用流式细胞仪检测 米松联合应用，对小鼠造血干细胞动员效果优于单一

40、药 物。两者联合的作用机制以及动员的干细胞移植后能否 成功重建造血和免疫功能还需要进一步研究。 作者贡献：实验设计为燕备战，实验实施为燕备战、 AMD3100和地塞米 发现，AMD3100或地塞米松动员后小鼠骨髓和外周血 CD34 +细胞明显高于对照组，表明 松都对小鼠造血干细胞有动员作用。 外周血中的白细胞数量可间接反映造血干细胞数量, 如果外周血中造血干细胞数量增加，白细胞数量也会增 加。因此，外周血白细胞数量可以作为反映外周血造血干 细胞含量的一个指标。实验发现注射AMD3100或地塞米 松均可显著增加外周血中白细胞含量，联合用药具有协同 作用。地塞米松能够刺激骨髓的造血功能， 使骨髓中

41、中性 粒细胞释放到外周血中，增加血液中白细胞含量，可用于 治疗白细胞减少症37O注射AMD3100后的小鼠外周血白 细胞含量迅速升高4，这与此实验研究结果一致。 CFU-Mix集落形成的数量可直接或间接反映细胞 悬液中早期造血干/祖细胞的数量及活性38。实验检测了 骨髓和外周血 CFU-Mix集落形成能力，结果表明使用 马会敏和孔存权，实验评估为梁玉和朱伟彦，资料收集为 燕备战、马会敏和蒋舒婷。 利益冲突：所有作者共同认可文章内容不涉及相关利 益冲突。 伦理问题：实验过程中对动物的处置符合2009年 Ethical issues in ani mal exp erime ntati on相关动

42、物伦 理学标准的条例。 文章查重：文章岀版前已经过 CNKI反剽窃文献检测 系统进行3次查重。 文章外审：文章经国内小同行外审专家双盲外审，符 合本刊发稿宗旨。 作者声明：第一作者对研究和撰写的论文中岀现的不 端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数据 （包括计算 机数据库）记录及样本已按照有关规定保存、分享和销毁， 可接受核查。 AMD3100进行动员后CFU-Mix集落形成数量显著高于 对照组，AMD3100和地塞米松联合动员的CFU-Mix集 文章版权:文章岀版前杂志已与全体作者授权人签署 了版权相关协议。 1 2 3 4 参考文献 Referen ces 王东红.造血干细胞及其潜能J.

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