细菌与病毒的病原学检查法

1、第七章,细菌与病毒的病原学检查法,诊断方法,形态学检查,分离培养和鉴定,检测抗原,检查基因序列,检测抗体,标本的采集与运送,无菌操作,部位,时间,用抗生素前,双份血清：急性期、恢复期,尽快送检：冷藏运送、做好标记,a,1,第一节,细菌感染的微生物学检查法,一、细菌学诊断,形态学检查,1,普通光学显微镜检查法,2,暗视野显微镜检查法：检查活菌,螺旋体及其动力,3,荧光显微镜检查法,病原菌的分离培养,生化试验,血清学鉴定,玻片凝集试验,动物实验：毒力、致病性,毒力检测,LD,50,ID,50,毒素,药物敏感试验：纸片扩散法,a,2,二、检测病原菌成分,抗原检测,凝集试验、对流免疫电泳、酶免疫技术、

2、免疫荧光技,术,核酸检测,1,核酸杂交技术,Southern,印迹杂交,Northern,印迹,杂交、原位杂交,2.PCR,技术,3,基因芯片,4.16rRNA,基因序列分析：编码,rRNA,保守区、可变,区,a,3,三、抗体的检测（血清学诊断,凝集试验：直接、间接、协同、冷凝集,沉淀试验：环状、絮状、双向、对流电泳,补体结合试验,酶联免疫吸附试验,ELISA,取双份血清，抗体效价比早期高,4,倍以上有意,义,a,4,第二节,病毒感染的微生物学检查法,a,5,一、形态学检查,1,电子显微镜检查,7,直接镜检法,10,颗粒,ml,电镜观察病毒,颗粒的形态和结构,免疫电镜法,IEM,标本,特异性抗

3、体,病毒颗粒聚集,电镜,观察,轮状病毒的粪便,HAV,HBV,的血清、疱疹,病毒的疱疹液，可早期诊断,2,光学显微镜检查,痘病毒、观察包涵体,CPE,a,6,二、病毒分离培养的方法,1,动物接种,常用动物：小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猴,等,接种途径：皮下、皮内、脑内、腹腔、静,脉等接种,观察：动物出现感染症状，取病变组织进,一步检查,a,7,2,鸡胚培养：孵化,9,14,天的鸡胚,接种途径有：绒毛尿囊膜、羊膜腔、尿囊,腔、卵黄囊,鉴定：血凝和血凝抑制试验,尿囊腔接种,羊膜腔接种,a,8,卵黄囊接种,a,绒毛尿囊膜接种,9,3,组织培养,器官培养、组织培养、细胞培养,细胞培养,单层细胞培养、悬浮细

4、胞培养,原代细胞培养,由新鲜组织制备,二倍体细胞,二倍体性质，传,4050,代，人,胚肺成纤维细胞,传代细胞系,由突变的二倍体细胞或肿瘤细,胞建立的,HeLa,细胞,a,10,三、病毒在培养细胞中增殖的鉴定指标,细胞的变化,CPE,红细胞吸附,HAd,红细胞凝集,病毒干扰作用：风疹病毒，埃可病毒,Vero,细,胞,中和试验,NT,：是病毒在活体内或细胞培,养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验,空斑形成试验：蚀斑形成单位,PFU,，感染,性病毒的滴度用,PFU/ml,表示,四、病毒成分的检测,病毒抗原的检测,HIV,和,HBV,抗原,a,11,病毒核酸的检测,A B C,A,未感染的成纤维细胞,B,单纯疱疹病毒感染后使细胞变圆,C,呼吸道合胞病毒感染后出现细胞融合,a,12,五、病毒抗体的检测,中和试验,阳性：可能以前有过隐性感染，用于,流行病学调查,补体结合试验,用已知病毒的可溶性抗原检测病人血,清中有无相应抗体，作为,近期感染,的,指标,a,13,血凝抑制试验,病毒,红细胞,血凝现象,血凝现象消失,病毒,抗体,红细胞,用于流感病毒、副流感病毒的诊断、流行,病学调查及鉴定病毒的型和亚型,ELISA,法,HSV,CMV,EB,病毒等,蛋白印迹技术：用已知病毒蛋白检测未,知病毒,a,14,小结,细菌感染