【doc】2和ifn-γ在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义

2和IFN在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义18中国实用医药2012年1月第7卷第1期CHINAPRACMED,JAN2012,V017,NO1HBD一2和IFN一Y在寻常型银屑病皮损中的表达及其意义李玉力甄莉【摘要】目的研究HBD2,IFN一在寻常型银屑病皮损中的表达并探讨其意义方法采用实时荧光定量RTPCR法检测45例寻常型银屑病患者皮损组织,非皮损组织和15例非银屑病患者正常皮肤组织中的HBD2和IFN的MRNA表达水平,按PASI评分标准将皮损组分为轻,中,重组,检测HBD2和IFN/MRNA在银屑病皮损不同组中的表达水平结果银屑病患者皮损区HBD2,IFN的表达明显上调,非皮损区HBD2,IFN的表达也高于正常皮肤组织,差异均有统计学意义P005HBD2,IFN在轻中重不同皮损中的表达表达依次增高,差异有统计学意义IFN与HBD2存在正相关结论IFN和HBD2可能共同参与了寻常型银屑病的皮损形成【关键词】银屑病HBD2IFN一皮损表达EXPRESSIONANDTHESIGNIFICANCEOFIIBD2ANDIFN一NTHELESIONSOFPSORIASISVULGARIS一LI,ZHEN12DEPARTMENTOFDERMATOLOGY,THEHOSPITALOFSHANXIMEDICALUNIVEISITY,TAIYUAN030001,CHINA【ABSTRACT】OBJECTIVETOEXPLORETHEEXPRESSIONSHBD2ANDIFN一INTHELESIONALSKINOFPSORIASISVULGARISANDDISCUSSTHESIGNIFICANCEMETHODSSKINLESIONSOFPSORIASISVULGARISORGANIZATIONWASDIVIDEDINTOMILD,MODERATEANDSEVEREGROUPSBASEDONPASISCORERULE,THENREALTIMEFLUORESCENTQUANTITATIVEREVERSETRANSCRIPTABEPOLYMERASECHAINREACTIONTECHNIQUEWASUSEDTODETECTTHEMRNAEXPRESSIONSLEVELOFIFN,HBD2AMONG45PSORIASISLESIONS,NONLESIONALPSORIASISSKINTISSUEAND15NORMALSKINTISSUE,ALSOINSKINLESIONSOFPSORIASISVULGARISORGANIZATIONDIFFENTGROUPSRESULTSTHEMRNAEXPRESSIONOFHBD2ANDIFNTWASOBVIOUSLYUPREGULATEDINTHELESIONALSKIN,NONLESIONALPSORIASISSKINWASHIGHERTHANNORMALSKINTISSUESCONTROISANDWASDIFFERENTINDIFFENTLESIONSOFPSORIASISGROUPSTHEEXPRESSIONOFIFN/HADPOSITIVECORRELATIONTLLTHATOFHBD2CONCLUSIONIFNYANDHBD2TOGETHERMAYCONTRIBUTETOTHEPATHOGENCSISOFPSORIASISVULGARIS【KEYWORDS】PSORIASISHBD2IFNLESIONALSKINEXPRESSION银屑病病理学主要特征是角质形成细胞过度增殖,炎症细胞浸润,其确切机制尚不明确目前认为T细胞介导的免疫紊乱是银屑病发生发展的基础,T细胞活化产生IFN等细胞因子是关键环节HBD2是一种可诱导表达的抗菌肽,不但具有抗微生物活性,而且还能调节机体免疫应答和炎症反应有学者研究发现B防御素过量表达与TNF,IL1B共同作用可使溃疡性结肠炎的炎症加重本研究通过RTPCR法检测寻常型银屑病患者皮损和非银屑患者正常皮肤组织中HBD2,IFN的表达并探讨二者在局部皮损形成中的意义1资料与方法11一般资料我院皮肤科2009年5月至2010年5月门诊及住院银屑病患者45例,其中男25例,女20例,年龄1865岁平均318岁,所有患者均具有典型的临床和病理特征,排除标准为不伴有系统性疾病,近3月内未系统使用过免疫抑制剂,糖皮质激素,免疫增强剂,维A酸类或进行光疗,2周内未使用任何外用药物标本均取自典型皮损银屑病患者的皮损按PASI评分分为轻度组25例,中度12例,重度组8例正常对照L5例为整形手术切除的外观正常皮肤,其中男基金项目山西医科大学科技创新基金资助项目项目编号01200815作者单位030001太原,山西医科大学第一医院皮肤科通讯作者甄莉EMAILZHENLI0351163CORN9例,女6例,年龄范围1656岁平均345岁,均无免疫性疾病及系统性疾病,无银屑病家族史12取材及标本处理每例皮损区切取典型皮损,非皮损区取材为银屑病皮损周围1CM处外观正常皮肤,70保存备用正常对照标本处理同前13主要仪器及试剂TL988型实时荧光定量PCR仪西安天隆科技,Y2OOC型电泳仪及JYSCZ型电泳槽北京君意东方电泳设备有限公司,TRANSZOL溶液,DNAMARKER由北京全式金生物技术有限公司生产,PRIMESERIPTRT试剂盒及SYBRPREMIXEXTAQ试剂盒购于宝生物工程大连有限公司14方法141RNA的提取用TRANSZOL试剂提取总RNA,操作按照溶液试剂盒说明书进行,保存样品于_70C以备用142逆转录合成CDNA按逆转录试剂盒说明书逆转录为CDNA,反应体系1015PRIMESCRIPTBUFFER2L,PRIMESCRIPTSRTENZYMEMIX105L,OLIGODTPRIMER05,RANDOM6MERS05L,TOTALRNA205G/1,RNASEFREEDH2O45反应条件3715MIN,855S143荧光定量RTPCR由实时荧光定量仪扩增完成,反应体系SYBRPREMIXEXTAQTMII125,PCRFORWARDPRIMER1L,PCRREVERSEPRIMER1L,DNA模板2,DH2085L预变性95C30S1个循环设BACTIN为内参照基因,其上游引物5AGAGCTACGAGCTGCCTGAC_3,下游引物2012年1月第7卷第1期CHINAPRACMEDJAN2012VO17,NO15AGCACTGTG丌LGGCGTACAG3,预期扩增片段184BPHBD2上游引物5ATYCCTGATGCCTCTYCC3,下游引物5GTGCCAAT1TGTTRATACCTTC3,预期扩增片段117BPIFN上游引物5TCCCATGGGTYGTGTGTI“YA3,下游引物5AAGCACCAGGCATGAAATCT3,预期扩增片段198BPPCR反应条件为95C58,5530S,7230S,40个循环引物设计参照GENBANK序列,应用PRIMERPREMIER50软件设计,确定序列后由上海生工生物工程技术服务有限公司合成反应结束后,得出CT值144PCR产物电泳和相对定量分析取PCR扩增产物5于琼脂糖凝胶中电泳,结果显示各组均有预期的阳性片19的方法是比较CT值法15统计学方法采用SPSS170进行统计分析,数据以均数4标准差X4S表示,多组比较采用秩和检验,P005为差异有统计学意义组间两两比较采用BONFERRONI法,校正检验水准为D0017,0【00083,P检验水准为差异有统计学意义指标间相关性分析采用PEARSON相关分析,P005表示差异有统计学意义2结果21HBD2,IFN在寻常型银屑病患者皮损区表达高于非皮损区和正常皮肤,非皮损区高于正常对照见表122HBD2,IFN在寻常型银屑病患者轻,中,重皮损区的断,经测定目标基因和内标基因的扩增效率相同相对定量表达依次增高,差异有统计学意义见表2表1HBD2,IFN_Y在皮损组,非皮损组和对照组中的表达4S注各指标三组比较P值均O05,组间两两比较P值均OO1表2HBD2,IFN在银屑病轻中重皮损区的表达S注轻,中,重和正常组各组间比较,P0008323在寻常型银屑病皮损区,非皮损区和正常皮肤之间HBD2,IFN的表达水平呈正相关R0785,P001在银屑病皮损区HBD2,IFN的表达水平呈正相关R0640,P值0013讨论目前认为银屑病是一种THL/TH2细胞平衡紊乱的炎症性疾病TH1分化优势及THL型细胞因子介导了银屑病的发生和发展,其中TH1型细胞因子IFN发挥着重要的作用,CHEN等研究发现IFN一可促进角质形成细胞增值,当IFN的作用被阻断时,角质形成细胞的增殖减慢,由角质形成细胞分泌的细胞因子也相应减少HARDERJ等从银屑病患者皮损中分离纯化得到HBD2,银屑病患者中几乎所有已知的抗菌肽如HBD2等均高度表达J还有研究表明IFN_Y可增加角质形成细胞分泌HBD2,并且HBD2在T细胞可能结合了FIX敏感性G蛋白偶联受体,作为刺激因子,通过JNK等途径促进IFN的表达本研究中HBD2,IFN在银屑病患者皮损区的表达明显高于非皮损区和正常皮肤,在非皮损区的表达也高于正常皮肤,表明两者均与银屑病关系密切HBD2在炎症愈重的皮损中表达愈明显,这与IFN的表达特点一致,且在寻常型银屑病皮损区,非皮损区和正常皮肤之间HBD2,IFN的表达水平呈正相关,在不同皮损区HBD2与IFNY的表达水平也呈正相关,提示在银屑病中HBD2和IFN之间关系密切常玉英研究发现B防御素过量表达与TNF,IL1B共同作用可使溃疡性结肠炎的炎症加重我们推测HBD2,IFN可能共同作用与T细胞,KC之间构成了一条恶性循环通路,成为导致银屑病免疫功能紊乱的主要因素之一,最终形成寻常型银屑病皮损参考文献1WITTMANNM,PURWARR,HARTMANNC,ET81HUMANKERATINOCYTESRESPONDTOINTERLEUKIN18IMPLICATIONFORTLLECO1LR8EOFCHRONICINFLAMMATORYSKINDISEASESJINVESTDERMATOL,2005,1246122512332孙会,徐丽敏干扰素与银屑病中国麻风皮肤病杂志,2008,2432132153CHENSH,ARANYI,APISAMTHANARAXN,ETA1RESPONSEOFKERATINOCYTESFROMNORMALANDPSORIATICEPIDERMISTOINTERFERONGAMMADIFFERSINTHEEXPRESSIONOFZINCMPHA2GLYCOPROTEINANDEATHEPSINDFASEBJ,2000,14565714HARDERJ,BARRELSJ,CHRISTOPHERSE,ETALAPEPTIDEANTIBIOTICFROMHUMANS