[生物医药论文精品]川陈皮素自组装前体脂质体的制备及其大鼠体内药动学研究

1川陈皮素自组装前体脂质体的制备及其大鼠体内药动学研究摘要本文研制川陈皮素自组装前体脂质体，并以混悬剂为对照考察其经大鼠灌胃给药后的药代动力学行为。采用一种新型前体脂质体法制备川陈皮素前体脂质体，考察其水合后粒径、包封率、稳定性等理化性质；大鼠分别灌胃给予川陈皮素混悬剂和水合后的脂质体后，以尼莫地平为内标，采用HPLC法测定血浆中药物浓度，用KINATICA44程序计算药动学参数。制得的脂质体包封率可达80以上,平均粒径为2121NM，稳定性好；药代动力学研究显示,与混悬剂相比川陈皮素脂质体在体内吸收较快,相对生物利用度2643，MRT增加。结果表明，液态前体脂质体制备工艺简单，可行性高；川陈皮素制成前体脂质体后，A1A0口服吸收显著增加，并具G7389一定的G13543G18334G1328用。关键词川陈皮素；自组装前体脂质体；药代动力学PREPARATIONOFSELFASSEMBLENOBILETINPROLIPOSOMESANDITSPHARMACOKINETICSINRATSABSTRACTTOPREPARESELFASSEMBLENOBILETINPROLIPOSOMESANDSTUDYTHEPHARMACOKINETICBEHAVIOROFNOBILETININRATSAFTERIGADMINISTRATIONOFNOBILETINPROLIPOSOMESANDNOBILETINSUSPENSIONNOBILETINPROLIPOSOMESWEREPREPAREDBYANEWKINDOFPROLIPOSOMEPREPARATIONMETHOD,THETESTSOFPHYSICOCHEMICALPROPERTIESINCLUDINGENCAPSULATIONEFFICIENCY,PARTICLESIZEANDSTABILITYOFFORMEDLIPOSOMEWEREDETERMINEDNOBILETINSUSPENSIONANDNOBILETINPROLIPOSMESWEREADMINISTRATEDTORATSBYIGADMINISTRATION,RESPECTIVELYPLASMACONCENTRATIONOFNOBILETINWASDETERMINEDBYHPLCTAKINGNIMODIPINEASINTERNALSTANDARDTHEPHARMACOKINETICPARAMETERSWERECALCULATEDBYKINETICA44SOFTWARETHEENCAPSULATIONEFFICIENCYOFNOBILETINLIPOSOMESWASMORETHAN80,WITHANAVERAGEPARTICLESIZEOF2121NMANDVERYGOODSTABILITYCOMPAREDTONOBILETINSUSPENSION,NOBILETINPROLIPOSOMESPOSSESSEDHIGHERABSORPTIVERATEANDLONGERMRT,ANDTHERELATIVEBIOAVAILABILITYWAS2643INRATITCOULDBECONCLUDEDTHATNOBILETINPROLIPOSOMESWASASIMPLEANDFEASIBLEPREPARATION,ANDSHOWEDGREATERABSORPTIONANDSUSTAINEDRELEASE2CHARACTERISTICSCOMPAREDWITHTHATOFNOBILETINKEYWORDSNOBILETINSELFASSEMBLEPROLIPOSOMEPHARMACOKINETICS川陈皮素G11NOBILETIN，NOBG12G7171G1186G8236G7589G12879G7905物中G6564G2474的G3822G11014G8699G3534G21656G18242G12879化合物，具G7389G6251G9826A2A3A4、G6251G11296A2A5A4等G3822种药理G1328用，G6251G11296G1328用表G10628为G6251G11296G16901G5203，G14033G20056G19462G11296G11163G2469生，G19462G8502G13971G11256G17728G12239、G3809G2469，增G5390G1825G11135力A2A5A6A7A4等。G11458前G3281内G3818对川陈皮素的研究G1039G16213G19610中在药理G7053G19766，制剂学研究G1177G16277G7389G5506G1095G6265G17959A8A9A10。川陈皮素脂G9354性G5058G1000G19602G9354G1122水，口服生物利用度G1314，脂质体G1328为新型的G17745体给药G13007G13491，具G7389生物G14192G10317性和药物G1268G17767G14033力,G4570G19602G9354性药物包G16077在脂质G2464分G4388G4630中,G1363其具G7389较G5390的G1016G1158性,可以显著G6564高药物的口服G17340G14192吸收G2462体内生物利用度A8A11A10。本研究G4570川陈皮素制成口服给药的液态川陈皮素前体脂质体G708NOBILETINPROLIPOSOMES，NOBPLPG709，G1823服G1114G7234G17902脂质体在G17154G4396G7411G19400G7143G2469生G13870G19610、G15713合G2462药物G9195G9443，G11979脂G7143G8699化、水G16311等稳定性G19394G20076。G16825液态前体脂质体制备工艺简单，G7143G1122G6205大化生G1147，G11477G2447G1114G12893体G10378前体脂质体G19512G2447G7389G7438G9354剂的G8505G20600，G16311G1927G1114其水合G17819程中G4470G16278G4396在的水合G17907度较G5942，G4628G18108G9354G16311G993G4448G1852、分G6967G993均G2260等G19394G20076。G2528G7114，本文对其在大鼠体内的药代动力学G17839行G1114研究，考察G1114脂质体对川陈皮素口服生物利用度的G5445G2721。材料与方法试剂川陈皮素G708G2347G1152神州佳美药物研究公司，9712G709；尼莫地平G708中G3281药品生物制品检定所，批号100270200002G709；大豆G11979脂G708上海太伟制药G709；G11014醇、乙腈为色G16901纯；其他试剂均为分析纯。仪器LC2010型高效液相色G16901仪G11日本SHIMADZU岛津制G1328所G12；日立H7650透射电镜G708日本日立公司G709；ZETASIZER3000激光粒G4388测定仪G708英G3281马尔文公司G709；分析天平G708赛G3822利斯科学仪器G7389限公司G709；XW80A涡旋混合器G708上海医科大学仪器厂G709；802B型G1314G17907离心G7438G708上海安亭科学仪器厂G709；TGL16B型高G17907台式离心G7438G708上海安亭科学仪器厂G709。动物健康SD大鼠，雄性，体重G70820020G709G，由中G3281药科大学实验动物G18108G6564供。川陈皮素前体脂质体的制备G4570川陈皮素直接G9354G16311在含G7389大豆G11979脂、修饰剂3AG708含G13870乙二醇G1158水G3534的G1016G1158性化合物G709的乙醇G9354液中，022MG5506孔滤G14192G17819滤G19512菌，灌封G1122充氮容器中，即制成液体型含药前体脂质体。G4570G16825液体型前体脂质体直接注入适宜的水合介质中，即可快G17907自组装成纳米级含药脂质体混悬液。含量测定方法的建立G7081G709检测波长的选择分别称G2474NOB和空白辅料适量，G9354G1122乙醇中，在200400NM波长范围内G17839行扫描，确定最大吸收波长。结果表明川陈皮素在332NM处G7389最大吸收，G1000辅料无干扰。G7082G709标准曲线精密称G2474干燥至恒重的NOB药物适量G1122容量瓶中，经乙醇定容后稀G18334到浓度为100GML1的储备液。精密吸G2474储备液适量至10ML容量瓶中，分别用无水乙醇稀G18334至刻度，摇G2260即得2、4、6、8、10、12GML1的NOBG9354液，以无水乙醇空白G1328对照，分别G1122332NM处测定吸收值，以吸收值G708AG709对浓度G708CG709做线性回归得标准G7053程。得川陈皮素含量的线性回归G7053程为A00643C00063，R09999,线性范围212GML1。高、中、G1314三个浓度的平均回收率为9992，9954G24629959，日内G2462日G19400精密度RSD均2，均符合G16213G8726。包封率的测定G1820G457005ML前体脂质体G9354液注入95ML水合介质中，精密G12239G2474水合后的脂质体200LG112210ML量瓶中,用乙醇定容,332NM处测定吸光度值，所得吸光度值代入标准曲线计算浓度A,G2528G7114G2490G2474重组后的脂质体G17819045M的G5506孔滤G14192，G2474滤液200LG1363410ML量瓶中,用乙醇定容,332NM处测定吸光度值，所得吸光度值代入标准曲线计算浓度B。G6365EEB/A计算包封率EEG12,A代表G5647的川陈皮素含量,B代表脂质体中川陈皮素含量。川陈皮素脂质体的理化性质G7081G709脂质体粒径G2462分G5079的测定G2474脂质体混悬液适量,稀G18334G14521干G1505后,采用马尔文激光粒度测定仪测定重组后得到的脂质体混悬液的粒径G2462其分G5079。G7082G709脂质体G5430态的G16278察G4570脂质体混悬液G9869G7691G1122G19120G13605上,用G20G8G11979G19068G18252G17139G7591后,滤G13452吸干G7591液,G9994后用日立H7650透射电G3671G16278察。脂质体稳定性考察G7081G709离心加G17907实验A8A12A10G4570水合后的脂质体G17839行离心加G17907试验G1110000RMIN1,30MING12,用分光光度法测定脂质体离心前后500NM处吸收度的G2476化。G7693G6466公式KEA0A/A0计算稳定性参数,G11式中A0为离心前脂质体的吸收度值,A为离心后脂质体的吸收度值G709。G7082G709加G17907稳定性G4570制得的前体脂质体密封后,G6930G13634G112240G263G2462相对G9299度75G7477G1226G991,G11220，1，2，3个G7388G2474G7691，测定水合后脂质体的含量、粒径和包封率，考察川陈皮素前体脂质体的稳定性。4血浆中川陈皮素的测定方法G7081G709色G16901G7477G1226色G16901G7621SHIMADZUODS46MM250MMG12；G8981动相G11014醇G16水G708体G12227比，70A1330G709G30G8981G1790708MLMIN1G30G13055G3818检测波长332NMG30G7621G921328G263；G17839G7691体G1222720L，尼莫地平为内标。G7082G709G7053法G999G4658性考察G2474空白大鼠血浆100L,G6365G256血浆G7691品处理G257G20045G991G1393法G6817G1328，分别G17839G7691空白血浆、空白血浆G3818加内标和药物G2462大鼠灌胃给药后的血浆G7691品。G7083G709标准曲线的制备G2474G5114G3634离心G12661，精密加入G993G2528浓度的NOB标准品G9354液25LG246210GML1的尼莫地平内标液20L，40G263水G9032G991N2G6393干，加入大鼠空白血浆100L，G1363血浆中G49G50G37的浓度分别为10，20，50，100，200，500，1000，2000NGML1，G19555后G6365G256血浆G7691品处理G257G20045G991G6817G1328，以血浆中G7691品的浓度G708CG709为G8190G3364标，G7691品G4804G19766G12227与内标G4804的比值G708AI/ASG709为G13449G3364标G1328线性回归，得G6323生物G7691品标准曲线G7053程。G7084G709回收率G2462精密度G18209制川陈皮素浓度为20，200，2000NGML13种G993G2528浓度的血浆G7691品,G6365G256血浆G7691品处理G257G20045G7053法G6817G1328后G17839行分析,考察回收率G2462精密度。G7085G709定量限以G1461G3134比为10G2971G7114G7691品G9354液浓度G1328为定量限。血浆样品处理G247410GML1的尼莫地平内标液20LG1122离心G12661中，40G263水G9032G991N2G6393干，加入大鼠血浆100L，涡旋G6403G146451MIN，加入05ML乙腈，涡旋G6403G1464530S，G1889加入15ML乙G18252乙G18243，涡旋G6403G146455MIN，3000RMIN1离心10MIN，G2474上G9177液15MLG12239至G6393干G12661中，在40G263水G9032G991N2G6393干。G9994后用100LG8981动相G3809G9354，涡旋G6403G146452MIN后G17728G12239至G4388G5389G3848中，10000RMIN1离心10MIN，G2474上G9177液20LG17839G7691，用内标法G17839行色G16901分析。给药方案及样品采集G2474大鼠10G2494G12117G2014712H后G19555G7438均分为G1016组，以108MGKG1分别大鼠灌胃给予水合后的脂质体G24625CMCNA混悬剂，G1122给药后0083，0167，025，0333，05,1，15，2，3，4，6，8，12HG8623G13466G12661G11536G5225G2474血，分离血浆后G6365G256血浆G7691品处理G257G20045G991G6817G1328，G4570所得到G7691品G4804G19766G12227与内标G4804的比值G708AI/ASG709代入标准曲线G7053程G8726算G7691品血浆浓度。数据处理血浓G16G7114G19400数G6466用KINETICA44药动学程序对血药浓度数G6466G17839行药动学G16311析，并对G1016种制剂的G1039G16213药动学参数G17839行T检验。结果1川陈皮素脂质体的理化性质5经测定川陈皮素脂质体包封率为84121。马尔文激光粒度测定仪测定结果显示,川陈皮素前体脂质体水合后,脂质体的平均粒径为2121NM,G3822分G6967G6363数为023。在透射电镜G991可以G16278察到,水合后的脂质体G3534本上G2588G12879G10711G5430G708G3282G20G709。FIGURE1TRANSMISSIONELECTRONMICROGRAPHOFNOBLETINLIPOSOMES2稳定性试验G17902G17819离心加G17907实验,测得G29A00261,A0247,计算得KE0054。可G16277,离心前后吸光度G2476化G5468G4579。G7691品G6930G136343个G7388后,G7422G2469G10628G8797G9108,G1185为G9141G21656色G9560明G9354液。0，1，2，3个G7388G2474G7691的前体脂质体水合后测得药物含量分别为946、953、931、927，平均粒径分别为1942、2099、2143、2160NM，包封率分别为860、843、824、832，结果表明川陈皮素前体脂质体具G7389G14403好的稳定性。3大鼠体内药物浓度测定方法的建立31方法专属性考察G32822为本实验色G16901G7477G1226G991所得色G16901G3282。结果表明血浆中的内G9316性G7446质G993干扰川陈皮素和尼莫地平的测定，G1000内标与药物分离G4448G1852，G4804G5430G14403好。川陈皮素和尼莫地平G1457G11053G7114G19400分别为122MIN和162MIN。32标准曲线的制备及最低定量限川陈皮素的标准曲线为AI/AS00022C00024R09999，线性范围为1G192000NGML1；G1461G3134比S/N10G7114定量限为10NGML1。33回收率与精密度6血浆中20,200和2000NGML13种G993G2528浓度的川陈皮素的回收率分别为10428596,9870171和9381313。日内RSD分别为428,183和252日G19400RSD分别为785,373和235，均符合生物G7691品测定G16213G8726。4血药浓度经时曲线及药动学参数大鼠灌胃给予川陈皮素混悬剂和脂质体后的平均血药浓度G16G7114G19400曲线G16277G32823，用KINETICA44G17731G1226对其G17839行G6163G4472G8181型G6323合,以AIC为G2040G6466，表明川陈皮素G2462其前体脂质体在大鼠体内的药动学G17819程均符合一G4472G8181型,G1039G16213药动学参数G16277表1。与混悬剂相比，脂质体在大鼠体内的G4804浓度CMAX、药G16G7114曲线G991G19766G12227AUC0TG2462AUC0A14A15均G7389显著G6564高，达G4804G7114G19400TMAX显著G13565G11713，吸收G17907度KA显著增加G708P005G709，相对生物利用度为2643。川陈皮素脂质体在体内的CLG991G19489,G16840明脂质体可以G5322G13543川陈皮素口服后的体内G9177G19512率,平均G9394G11053G7114G19400MRTG7171混悬剂的163G1505,可G14033具G7389G5322G13543吸收的G1328用。结果表明，G4570G19602G9354性药物川陈皮素制成前体脂质体，可显著加快药物的吸收，增加吸收量，G6564高生物利用度，并G7389G13543G18334效果。FIGURE2HPLCCHROMATOGRAMSOFBLANKPLASMAABLANKPLASMAWITH500NGML1NOBILETINANDINTERNALSTANDARDNIMODIPINEWEREADDEDBAPLASMASAMPLECPEAK1NOBILETINPEAK2NIMODIPINE7A16A17A16A16A18A16A16A19A16A16A20A16A16A21A16A16A16A21A17A16A16A21A18A16A16A16A21A17A22A18A23A19A24A20A25A21A16A21A21A21A17A26A27A28A29A30A31A32A33A34A35A36A37A36A38A38NOBILETINSUSPENSIONNOBILETINPROLIPOSMESFIGURE3MEANPLASMACONCENTRATIONTIMECURVEOFNOBILETININRATSAFTERORALADMINISTRATIONOFNOBILETINSUSPENSIONANDNOBILETINPROLIPOSMESATSINGLEDOSETABLE1PHARMACOKINETICPARAMETERSOFNOBILETINSUSPENSIONANDNOBILETINPROLIPOSMESN5PARAMETERNOBSUSPENSIONNOBPLPCMAX/NGML1297133806354A39TMAX/H105A39KA/H1112013186056A39CL/MLH1558535251800766AUC0TH/NGHML15623171454564A39AUC0/NGHML15693251504544A39MRT/H160023261081A39A39P005VSNOBILETINSUSPENSION讨论川陈皮素的G1158脂性和G1158水性均G993佳，采用G5132G16280的脂质体制备G7053法G3926G15192G14192分G6967法、乙醇注入法、G17882相G14988G2469法等均G4396在G2447G19512G7389G7438G9354剂后药物大量析G1998的G19394G20076，包封率G1314G708G13434G20G19G8G709。G6937本文采用液G7242前体脂质体法A40A41A42，即G4570脂质体G14192G7460和药物以一定比G1375G9354G1122分G6967介质中得G9560明G9354液，加水G6122G13543G1926液稀G18334至一定程度后自G2469G5430成脂8质体混悬液，G993G19512G2447G7389G7438G9354剂，G16311G1927G1114析G1998的G19394G20076，并简化G1114制备G17819程。所得前体脂质体水合后包封率高，粒径分G5079均G2260。G8504制备G7053法G993G19668G999G19388G16786备，G2494G19668稀G18334G17819程即可制成前体脂质体，十分简便，G1000G16825前体脂质体在G17154G4396G17819程中为无水G10378态的G9560明液体，G7171一种动力学稳定体G13007，G7389效G16311G1927G1114脂质体的稳定性G19394G20076。川陈皮素生物利用G1314的可G14033原因G7171水G9354性和脂G9354性均G993佳，与肠壁的G1158和性G993好，包G16077G1122脂质体后G993但改善G1114其G1016G1158性，G1000因纳米级脂质体的粘附性,增加G1114药物与肠壁的接触G19766G12227和接触G7114G19400,因而,吸收较快,达G4804G7114G19400G6564前,最高血浓大大G6564高。川陈皮素口服G17340G14192吸收的增加还得利G1122G11979脂本身具G7389促G17839G21656G18242G12879药物的肠G17959吸收的G14033力A43A44A45，修饰剂的加入又增加G1114脂质体的可G2476G5430性，G1363药物更G7143穿G17819G13466胞屏障A43A46A45。G8504G3818，G11979脂对G21656G18242G12879药物的G1039G16213代谢酶G13466胞色素P450G7389抑制G1328用A43A47A48A49A47A47A45，这可G14033G7171川陈皮素制成脂质体后，生物利用度显著增加，平均G9394G11053G7114G19400明显G5322长的G2490一原因。本文成功的制备G1114稳定的、包封率较高的川陈皮素前体脂质体,G1000制备工艺简单,G7143G1122工业生G1147；川陈皮素脂质体大鼠灌胃给药后,G993G1177加快G1114吸收，而G1000具G7389G13543G18334G1328用,大大G6564高G1114川陈皮素口服生物利用度。REFERENCES1YUQINGWU,CHENGHUAZHOU,JINTAO,ETALANTAGONISTICEFFECTSOFNOBILETIN,APOLYMETHOXYFLAVONOID,ONEOSINOPHILICAIRWAYINFLAMMATIONOFASTHMATICRATSANDRELEVANTMECHANISMSJLIFESCI,2006,78268926962YOSHIKIMIYATA,TAKASHISATO,KEISUKEIMADA,ETALACITRUSPOLYMETHOXYFLAVONOID,NOBILETIN,ISANOVELMEKINHIBITORTHATEXHIBITSANTITUMORMETASTASISINHUMANFIBROSARCOMAHT1080CELLSJBIOCHEMBIOPHYSRESCOMMUN,2