病原生物学实验二

病原生物学教研室,病原生物学实验（二）,细菌接种技术,实验目的 1 掌握常用的细菌接种方法 2 熟悉细菌生长现象的观察方法,（一）细菌的分离培养和接种技术,接种工具接种针和接种环L型涂布棒接种环境接种罩、超净工作台或无菌室内进行。,接种方法,1. 平板划线接种法：目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。方法：分区划线法：适用于含菌量较多的标本。连续划线法：适用于含菌量较少的标本。,分区划线,划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触,以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.第一次划线应占平皿面积的1/10,以后每次划线约占面积的1/41/5.划线为连续划线,不能间断.应占满平皿.划线不能交叉重复.每次划完后应灭菌.,2.斜面接种法：用于菌种移种，以进一步鉴定 和保存菌种。,3.半固体穿刺接种法：保存菌种或观察细菌的动力和生化反应。4.液体接种法：用于肉汤、蛋白胨水、糖发酵管等液体培养基的接种。,四种接种方法,将上述已接种细菌的培养基置37恒温培养箱中孵育1824h，观察细菌的生长现象。,（二）细菌在培养基上的生长现象,1. 细菌在固体培养基中的生长现象,菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性。菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。,菌落与菌苔,菌落,菌苔,2. 细菌在液体培养基中的生长现象,浑浊：大多数细菌，如E.c.沉淀：多见于链状排列的细菌。菌膜：专性需氧菌（如结核分枝杆菌、枯草杆菌） 。,细菌在液体培养基中的生长现象,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,3. 细菌在半固体培养基中的生长现象,有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。,细菌在半固体培养基中的生长现象,有动力 现象,无动力 现象,肠道致病菌的分离培养(1),主要内容,（一）肠道杆菌的生物学性状,埃希菌属：大肠埃希菌沙门菌属：伤寒沙门菌 甲型、乙型、丙型副伤寒志贺菌属：痢疾志贺菌,肠杆菌科的重要菌属及代表菌种,1.相似的形态染色从形态上无法区别,中等大小的G-杆菌,多有鞭毛、菌毛,乳糖发酵试验,2.活泼的生化反应,初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌,三种细菌的生化反应,（二）SS培养基 （Salmonella Shigella Agar ）,胆盐抑制G+,枸橼酸钠和煌绿能部分抑制大肠杆菌,致病的沙门菌和志贺菌能大量生长。中性红指示剂和乳糖,中性红遇酸变粉红。常用于肠道致病菌的分离培养。,（二）SS培养基,SS培养基中菌落特点,将粪便标本以平板分区划线法接种到SS培 养基。 (每个实验室8个SS平板，每组做好标记，班长用胶布按班级绑好) 放入37温箱中培养24h；取出放4冰箱中保存备用。,（三）粪便标本的分离培养,1.空气中细菌的检查（每个班2个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 培养24小时，观察结果。,细菌在自然界的分布,2.紫外线对细菌的影响（每个实验室2个培养皿）,取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，打开一半平皿盖，置于紫外灯下照射30分钟，然后盖好平皿，置37培养24h后取出观察结果。,密涂接种,分三次接种，每次取一环。第一次密涂接种后旋转60度二次密涂接种，然后同方向旋转60度后再次密涂接种。,3. 咽喉部细菌的检查（每班4个平皿） 取血琼脂平板1块，打开平皿盖，将培养基面置于口腔前10cm处，受试者用力咳嗽几次；盖上平皿盖，置37温箱中倒置培养24h后取出观察结果。,4.化学消毒剂对细菌的影响,方法：取一普通平皿培养基，一部分写上“前”，另一部分写上“后”，然后将手指在写有“前”的部分沾一下，再将手指用酒精进行消毒，在写有“后”的部分沾一下。放入37温箱培养24小时后观察。,（每个实验室4个平