已阅读5页,还剩23页未读, 继续免费阅读
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
,课题二、基因工程的基本操作程序,课题二、基因工程的基本操作程序,1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定,(一)、目的基因的获取,获取目的基因是实施基因工程的第一步。,可以从自然界中已有的物种中分离出来,也可以用人工的方法合成。,目的基因:主要是指编码蛋白质的结构基因,获取目的基因的方法:从基因文库中获取(基因组文库,部分基因文库)利用PCR技术扩增目的基因(变性,复性,延伸)通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成,目的基因来源,(三)基因操作的基本步骤,步骤一:目的基因的提取,2)反转录法: 以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需的基因。,目的基因的mRNA,单链DNA(cDNA),双链DNA(即目的基因),反转录,合成,3)根据已知的氨基酸序列合成DNA法 :,根据已知蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使RNA序列,然后按照碱基互补配对原则,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学方法,以单核苷酸为原料合成目的基因。,蛋白质的氨基酸序列,mRNA的核苷酸序列,结构基因的核苷酸序列,推测,推测,目的基因,化学合成,人工合成基因,合成,蛋白质的氨基酸序列,推测,mRNA,推测,目的基因,结构基因的核苷酸序列,目的基因的,mRNA,反转录,单链DNA,双链DNA,合成,反转录法,人工合成基因,编码区,非编码区,非编码区,原核生物的基因结构,与RNA聚合酶结合位点,启动子与起始密码终止子与终止密码,起始密码,终止密码,启动子,终止子,真核生物的基因结构,信使RNA,成熟的信使RNA,(二)、基因表达载体的构建,基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。,目的:使目的基因在受体细胞内稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。,基因表达载体的组成: 目的基因、启动子、终止子、标记基因,启动子:一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位。,终止子:位于基因的尾端,也是一段有特殊结构的DNA片段,使转录在所需要的地方停止下来。,标记基因:为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因,从而将含有目的基因的细胞筛选出来。,(三)、将目的基因导入受体细胞,转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。,(1)目的基因导入植物细胞,常用:-农杆菌转化法(感染双子叶植 物和裸子植物)基因枪法花粉管通道法,(2)将目的基因导入动物细胞,显微注射技术,(3)将目的基因导入微生物细胞,常用大肠杆菌: 繁殖快,多为单细胞,遗传物质相对较少,大肠杆菌的转化方法: 首先用Ca2+处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程。,四、目的基因的检测和表达,目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传性状,只有通过检测与鉴定才能知道。这是检查基因工程是否成功的一步。,首先,要检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因,这是目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键。检测方法是采用DNA分子杂交技术,其次,还需要检测目的基因是否转录出了mRNA,这是检测目的基因是否发挥功能作用的第一步。检测方法是采用DNA分子杂交技术,最后,检测目的基因是否翻译成蛋白质。检测方法是进行抗原-抗体杂交,Sourthern杂交-DNA与DNA分子间的杂交(见同步导学12页) 将受体生物的DNA提取出来,经过适当的酶切后,走电泳,将大小不同的DNA片段分开,将凝胶上的DNA片段转移到硝酸纤维素膜上,用标记了放射性同位素的目的DNA片段作为探针与硝酸纤维素膜上的DNA进行杂交,将X光底片压在硝酸纤维素膜上,在暗处使底片感光,将X光底片冲洗,如果在底片上出现黑色条带,则表明受体生物染色体DNA上有目的基因。,Northern杂交-DNA与RNA分子间的杂交,Western杂交-蛋白质分子间的杂交(抗原-抗体),个体生物学水平的鉴定: 一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后,是否赋予了植物抗虫或抗病特性,需要做抗虫或抗病的接种实验,以确定是否具有抗性以及抗性的程度。,有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较,以确定转基因产品的功能活性是否与天然产品相同。,1)以下说法正确的是 ( ) A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、运载体必须具备的条件之一是:具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接 D、基因控制的性状都能在后代表现出来,C,练习,2)不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 ( ) B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA,D,练习,3)有关基因工程的叙述中,错误的是( ) A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、 限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、 人工合成目的基因不用限制性内切酶,A,练习,4)有关基因工程的叙述正确的是 ( ) A、限制酶只在获得目的基因时才用 B、重组质粒的形成在细胞内完成 C、质粒都可作为运载体 D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料,D,练习,5)基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的步骤是 ( ) A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- (正式版)JTT 1218.6-2024 城市轨道交通运营设备维修与更新技术规范 第6部分:站台门
- 永辉物流预算表
- 飞机镍丝行业总体规模
- 建材监理分公司合作协议书
- 2024年地理信息大数据项目资金需求报告代可行性研究报告
- 福建省福州市杨桥中学高一数学文下学期期末试卷含解析
- 江西省九江市海形中学高一数学文上学期摸底试题含解析
- 幼儿园大班科学教案11篇
- 云南省昆明市西山区第二中学高一英语知识点试题含解析
- 湖南省邵阳市体育中学高一数学文模拟试题含解析
- 中国建筑垃圾再生利用行业市场现状分析及竞争格局与投资发展研究报告2024-2029版
- 阿里巴巴国际站店铺运营策略研究
- 少先队工作指导手册
- 浙江省萧山区萧山中学2021-2022学年高一上学期自主招生入学模拟英语考试
- 年产10万吨乙腈法生产丁二烯的工艺设计
- 胖东来营销模式优化
- 《城市轨道交通安全门系统运行与维护》课程标准
- 人教版中考模拟考试化学试卷和答案解析(共四套)
- 医院财务科培训计划
- 学前教育专业调查研究报告
- 学校安全管理工作培训总结
评论
0/150
提交评论