免疫组化的应用x

平谷区医院 刘海明2015.11.18,免疫组化在肿瘤诊断及鉴别诊断中的应用,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,免疫组化技术是以免疫学的抗原抗体反应为其理论基础发展起来的一门方法学，在生物学领域尤其是在医学的基础和临床研究中发挥重要的作用，对疾病尤其是肿瘤的诊断、鉴别诊断及发病机制的研究提供了强有力的手段。 我国在临床病理诊断上可用抗体293种。,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,目前常用的抗体分四大类,淋巴细胞标志物,神经及神经内分泌标记物,间叶组织标记物,上皮性标记物,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,点击添加文本,您的标题,您的标题,CK high（AE3）， CK low ，CK-pan，CK19，CK7， CK20，EMA，CEA，-CA15-3，SCLC , ECaldeherin, CA125, Tg(甲状腺球蛋白) ,TTF-1, AFP。这些抗体阳性，表明肿瘤组织起源于上皮组织，如果是恶性肿瘤，就是癌.,1上皮性标记物：,2.间叶组织标记物：,SMA ，Desmin，Vimentin， Lysozyme， AACT , CD68 MyoD1，CD117， 这些抗体阳性，表明肿瘤组织起源于间叶组织，如果是恶性肿瘤，就是肉瘤。,3神经及神经内分泌标记物,CgA ，Synaptophysin，NSE，S-100：NF （神经纤维丝蛋白），GFAP，CD99，CD56。,4淋巴细胞标志物：,T cell标记物： CD3, CD45RO , CD43, CD5, CD8,CD4,ALK,GranmB , CD56 。B cell标记物：CD-20 ，CD79a ，CD23， CD10 ， Kappa ，Lambda CD21 CD38 ，CyclinD1 ，Bcl-2。其它：LCA，CD15，CD30，MPO ，CD34，TdT，这些抗体用于淋巴瘤33个亚型的诊断和鉴别诊断。,免疫组化,34BE12：角收白抗体，阳性提示良性病变。前列腺抗基底细胞特异抗体（34BE12）是一种高分子量细胞角蛋白抗体，它标记前列腺基底细胞阳性率高，而恶性分泌上皮细胞阴性，前列腺基底细胞存在与否是判断癌与非癌的一个重要标志，34BE12明确阳性者都应诊断良性，侵润性前列腺癌34BE12阴性。P63：抑癌基因，阳性提示良性病变。是一种新近认识的基底细胞标记物，与P53具有同源性，染基底细胞比34BE12更敏感，因P53在良性增生、萎缩、腺病和不典型增生中可有假阴性，而P63几乎均呈阳性，在疑难的前列腺病变中应用P63或P63加34BE12的混合试剂检测对诊断更有帮助。P504S：一前列腺癌的新标记，即使在小的针刺活检中癌的P504S阳性率仍为95，而良性腺体（萎缩、腺病、硬化性腺病和基底细胞增生）均阴性，与34BE12及P63染色结果正相反，三者联合应用对比明显，对前列腺良恶性病变的诊断很有帮助。P504：甲酰基辅酶A消旋酶检测诊断前列腺癌的敏感性为97，特异性为100。,Ki67：为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA：增埴细胞核抗原。CEA：多数腺癌表达。Rb：（retinoblastoma视网膜母细胞瘤）基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。P53：在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短。,Nm23：是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。ECa，E钙粘附蛋白，介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白，其功能丧失引起细胞之间连接的破坏，主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。PS2：（雌激素调节蛋白），其表达和ER表达有关，可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。CK18：低分子量角蛋白，主要标记各种单层上皮包括腺上皮，而复层鳞状上皮常阴性，主要用于腺癌诊断。CK19：分布于单层上皮和间皮，常用于腺癌诊断，肝细胞不表达，而胆管为阳性反应。Heppar1：肝细胞抗原，正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性，低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。,CK20：用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。CK7：卵巢、肺和乳腺上皮常阳性，结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。Villin：绒毛蛋白，正常组织中，villin通常只表达于有刷状缘的细胞上，如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中（特别是近曲小管）。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率，具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达，则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。,乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色，则这个肿瘤就极不可能为乳腺来源。其他villin免疫组化染色通常为阴性表达的肿瘤还有：如卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌。间皮瘤也经常为villin阴性表达，因此在一些情况下Villin还可以作为鉴别间皮瘤和腺癌使用抗体的一种。但是也有一些非胃肠道来源的肿瘤可表达villin，如子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌。也有一些专家报道Villin在部分宫颈内膜腺癌病例中表达。肝癌的诊断：Villin免疫组化染色可以显示出毛细胆管结构，因此它也可能在表达部分肝癌的管状结构上很有用。多克隆CEA是用于此目的的第一种试剂，而且CD10（CALLA）在表达肝癌的该结构上也非常有用。多克隆CEA、villin和CD10（CALLA）在肝癌病例上的表达，相互之间并没有任何的冲突，因此如果怀疑肝癌的可能性，建议将这三种抗体共同使用以协助疑难病例的诊断。,Villin在神经内分泌肿瘤上的应用：Villin在神经内分泌肿瘤的研究上也很有帮助。众所周知，类癌和胰腺的胰岛细胞肿瘤具有相相似的形态学特征，仅在形态学上区分这两种肿瘤几乎是不可能的。Villin在这种情况下特别有用，因为据文献报道在85的胃肠道类癌病例中有villin的表达，但在胰岛细胞肿瘤上未见阳性表达报道。Villin在类癌上的表达通常为胞膜阳性。另外，有一些证据表明villin在胃和下消化道的小细胞癌上的表达率比在其他部位的小细胞癌上要高。如：肺、食道、膀胱或前列腺等。据文献报道，大约有40的肺类癌病例villin阳性，在其他一些神经内分泌肿瘤上，如甲状腺髓样癌和少数的美克尔细胞瘤上也有villin的表达。,Syn：突触素神经组织标志：S100神经组织标志，存在于神经组织，垂体、颈动脉体，肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织，常用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。NSE：主要用于神经内分泌肿瘤诊断。Chr：嗜铬素，肾上腺髓质含量很高，鉴别肾上腺髓质和皮质，用于神经内分泌肿瘤诊断。CKH：高分子角蛋白，主要标记鳞状细胞肿瘤。CKL：低分之角蛋白，主要标记单层上皮、腺上皮。EMA：上皮膜抗原，糖蛋白，广泛分布各种上皮及其肿瘤。,AMACR：优点在于它是癌症特异性，只存在于癌症组织。Rubin称，AMACR亦可用作其他癌症的诊断标志物。对各种癌症细胞进行检查后发现，结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤都过度表达AMACR，以结肠直肠癌和前列腺癌表达最高。CD117：胃肠间质瘤。CD10：作为共同急性淋巴母细胞型白血病抗原，主要表达于未成熟淋巴细胞，在Burkitt淋巴癌，慢性髓性白血病等造血系统疾病的诊断中具有应用价值。近几年来发现该抗原在造血系统外的某些肿瘤中有表达，如子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤等。抗体在对肾细胞癌进行诊断和鉴别时有一定的参考价值。,SMA：平滑肌肌动蛋白，标记平滑肌。CD56：为神经细胞黏附分子，主要分布于大多数神经外胚层来源细胞，常用于星型细胞瘤、神经母细胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断，也是NK细胞瘤的重要标志，也标记小细胞肺癌。Des（Desmin）：结蛋白，广泛分布于平滑肌、心肌、骨骼肌细胞和肌上皮细胞，高分化高表达、低分化低表达。MSA：肌特异性肌动蛋白，广泛分布于几乎所有肌型细胞中。,CD68：存在于骨髓和各神经组织的巨噬细胞用于粒细胞白血病、各种单核细胞来源肿瘤、包括恶性纤维组织细胞瘤诊断（首选）。CD34：表达于早期淋巴造血干细胞、祖细胞、内皮细胞、胚胎纤维母细胞和某些神经组织细胞，多用于标记血管内皮细胞，血管源性肿瘤的诊断，GIST8090。CD31也标记血管内皮。NESTIN：神经干细胞中极为丰富。Ost：成骨素，为骨化细胞分泌。AAT：抗胰蛋白酶纤维组织细胞来源肿瘤ACT抗糜蛋白酶 p16：阳性提示恶性。基因定位于人类染色体9p21，通过与细胞周期蛋白D竞争性结合CDK46，阻止细胞从G1期至S期，从而对有丝分裂进行负反馈调节。p16蛋白在正常、炎症性宫颈组织上皮中均为阴性表达，而在CIN和宫颈SCC病变中具有极高的阳性表达；在CIN病变中伴随病变级别升高，其表达强度亦相应升高。借助p16的阳性表达结果，有助于诊断CIN病变以及对CIN病变进行客观分级。,GFAP：胶质纤维酸性蛋白神经组织标志，多用于星形胶质瘤诊断。Tg：甲状腺球蛋白，甲状腺癌TG阳性。CT：降钙素甲状腺髓样癌阳性。PH：甲状旁腺素甲状旁腺肿瘤阳性。,TTFI：甲状腺转录因子1：TTF1表达于甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞中。在肺肿瘤研究中发现，大多数肺的小细胞癌、原发性和转移性肺腺癌、少部分大细胞未分化肺癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤免疫组化结果显示TTF1阳性，而肺鳞癌及绝大多数典型类癌TTF1阴性。在甲状腺乳头状腺癌中TTF1亦阳性，而TTF在其它组织表达阴性。据此认为TTF1可用来鉴别肺腺癌与鳞癌，并有助于与肺转移性腺癌的鉴别。,TTF1：在甲状腺及其肿瘤中的表达：TTF1主要表达在甲状腺滤泡细胞中和甲状旁腺的主细胞中，TTF1为甲状腺分化和甲状腺球蛋白分泌调节的基础物质，可促进甲状腺过氧化物酶、碘钠的转运，TTF1与血清TSH的活性有关，活性的TSHR可增强TTF1的表达。TTF1在良恶性甲状腺组织中表达不同，正常甲状腺和良性腺瘤表达多，甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少，未分化癌中不表达，TTF1在恶性甲状腺病变中的表达强度随年龄增加而增强，而且病变存瘤期长，复发机率高。TTF1：在肺癌中的表达：75的肺非小细胞癌（NSCLCs）阳性表达，腺癌（ACs）明显高于鳞癌（SCC），90以上的原发性小细胞肺癌（SCLC）表达阳性，TTF1在非小细胞肺癌（NSCLCs）阳性表达强度与病人的预后成呈负相关，可作为一项独立的预后指标，肺的典型性类癌（TCS）均为阴性，表明小细胞肺癌和非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS的共同起源的理论。,免疫组化在治疗中的应用,PGp：多药耐药基因蛋白（PGp）药泵作用胞膜胞浆阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。谷光甘肽S转移酶（GST）：解毒作用胞浆阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。拓扑异构酶（TOPO）：靶点作用胞核阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。雌激素受体（ER）：性激素作用胞核阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。孕激素受体（PR）：性激素作用胞核阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。,雌激素受体（ER）-性激素作用-胞核-阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。孕激素受体(PR) -性激素作用-胞核-阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。