果蔬维生素C含量测定及其分析

实验  果蔬维生素 C 含量测定及其分析【课前预习】1为了测得准确的维生素 C 含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？2试简述维生素 C 的生理意义。【目的要求】 要求学生在已掌握生物化学基础知识、基本理论和基本实验技能的基础上，在教师指导下，根据实验室条件，完成选题、设计实验、实验准备、实施实验和实验论文撰写等全过程。培养动手能力，分析解决问题的能力和创新思维。【基本原理】维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic  acid）。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。维生素 C 主要存在于新鲜水果及蔬菜中。水果中以猕猴桃含量最多，在柠檬、桔子和橙子中含量也非常丰富；蔬菜以辣椒中的含量最丰富，在番茄、甘蓝、萝卜、青菜中含量也十分丰富，野生植物以刺梨中的含量最丰富，每 100 克中含 2800 毫克，有“维生素 C 王”之称。维生素 C 为无色晶体，味酸，溶于水及乙醇，不耐热，在碱性溶液中极不稳定，日光照射后易被氧化破坏，有微量铜、铁等重金属离子存在时更易氧化分解，干燥条件下较为稳定。故维生素 C 制剂应放在干燥、低温和避光处保存；在烹调蔬菜时，不宜烧煮过度并应避免接触碱和铜器。维生素 C 具有很强的还原性。它可分为还原性和脱氢型。还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，维生素 C 尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素 C 已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素 C 刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。【实验用品】 1. 试剂2%草酸溶液: 草酸 2g 溶于 100mL 蒸馏水中。1%草酸溶液: 草酸 1g 溶于 100mL 蒸馏水中。标准抗坏血酸溶液（1mg/mL）:  准确称取 100mg 纯抗坏血酸（应为洁白色，如变为黄色则不能用）溶于 1%草酸溶液中，并稀释至 100mL，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液: 250mg 2,6-二氯酚靛酚溶于 150mL 含有 52mg NaHCO3 的热水中，冷却后加水稀释至 250mL，贮于棕色瓶中冷藏（4）约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏血酸溶液标定。标准液滴定: 准确吸取标准抗坏血酸溶液 1mL 置 100mL 锥形瓶中，加 9mL 1%草酸，用微量滴定管以 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持 15s 不褪色，即达终点。由所用染料的体积计算出 1mL 染料相当于多少毫克抗坏血酸（取 10mL 1%草酸作空白对照，按以上方法滴定）。2. 材料材料自选。3. 器材锥形瓶 100mL(2); 吸量管 10mL(1); 容量瓶 100mL(1)，250mL(1); 微量滴定管 5mL(1)；研钵；漏斗；纱布。【方法步骤】1. 提取水洗干净整株新鲜蔬菜或整个新鲜水果，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后称取20g，加入 20mL 2%草酸，用研钵研磨，四层纱布过滤，滤液备用。纱布可用少量 2%草酸洗几次，合并滤液，滤液总体积定容至 50mL。2. 样品滴定准确吸取滤液两份，每份 10mL, 分别放入 2 个锥形瓶内，滴定方法同前。另取 10mL 1%草酸作空白对照滴定。【实验结果】式中：VA 为滴定样品所耗用的染料的平均毫升数；VB 为滴定空白对照所耗用的染料的平均毫升数；C 为样品提取液的总毫升数；D 为滴定时所取的样品提取液毫升数；T 为 1mL 染料能氧化抗坏血酸毫克数（由操作二计算出）；W 为待测样品的重量（g）。【注意事项】(1) 某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。(2) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过 2min。滴定所用的染料不应小于 1mL 或多于 4