VE含量测定

维生素E的测定 刘深勇,一、概述 维生素是维持人体正常生命活动所必需的一类天然有机化合物。其种类很多，目前已确认的有30余种，其中被认为对维持人体健康和促进发育至关重要的有20余种。这些维生素结构复杂，理化性质及生理功能各异，有的属于醇类，有的属于胺类，有的属于酯类，还有的属于酚或醌类化台物。,维生素都具有以下共同特点： 这些化合物或其前体化合物都在天然食物中存在；它们不能供给机体热能。也不是构成组织的基本原料，主要功用是通过作为辅酶的成份调节代谢过程，需要量极小；它们一般在体内不能合成，或合成量不能满足生理需要，必须经常从食物中摄取；长期缺乏任何一种维生素都会导致相应的疾病。,我们在评价食品的营养价值，开发利用高含量维生素的食品资源，指导人们合理调整膳食结构，指导制定加工工艺或贮存条件，最大限量地保留各种维生素，还要控制强化食品中加入量，防中毒，都离不开分析检测工作。维生素分类：脂溶性（A、D、E、K） 水溶性（B族、C）,二、脂溶性V的测定,VA、VD、VE、VK与类脂物一起存于食物中，摄食时可吸收，可在体内积贮。 脂溶性维生素具有以下理化性质： 1.溶解性：脂溶性维生素不溶于水，易溶于脂肪、乙醇、丙酮、氯仿、乙醚、苯等有机溶剂。 2.耐酸碱性：维生素A、D对酸不稳定， 对碱稳定，维生素E对碱不稳定，但在抗氧化剂存在下或惰性气体保护下，也能经受碱的煮沸。,耐热性、耐氧化性 耐热性 氧化性VA 好，能经受煮沸 易被氧化（光、热促进其氧化）VD 好，能经受煮沸 不易被氧化VE 好，能经受煮沸 在空气中能慢慢被氧化 （光、热、碱促进其氧化）VK 好，能经受煮沸 易被光、氧化剂及醇破坏,维生素E含量测定应该采用何种方法？根据化学性质：1.可被硫酸铈定量氧化. 铈量法2.三氯化铁反应生成的亚铁离子作用形成有色结合物间接测定（三氯化铁2，2联吡啶比色法）,（一）铈量法 1、原理： VE用硫酸加热回流，水解成生育酚，用硫酸铈定量地 氧化为对一生育醌，过量的硫酸铈氧化二苯胺指示剂而指示滴定终点。 终点：亮黄灰紫;空白试验. 2、反应条件 （1）VE在H2SO4酸性条件下水解为宜。 碱性溶液中游离生育酚易被氧化。Ce(SO4)2液滴定在酸性溶液中进行,如在碱性中会生成碱式盐而影响测定。 （2）Ce(SO4)2溶于酸水溶液，不溶于醇,-生育酚溶于酸而不溶于水, 滴定过程中应有一定浓度的乙醇。 （3）本法适用于纯度高的VE供试品。,检查方法 取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈滴定液(0.01mol/L)滴定，根据消耗硫酸铈滴定液的量来进行计算,紫外分光光度法原理: 维生素E在碱性溶液中加热水解生成游离生育酚，并被三氯化铁氧化为对生育醌，同时生成亚铁离子。后者与联吡啶生成血红色的配离子，再进行比色测定。但由于操作麻烦，专属性不高，又容易有干扰，现已被GC取代。,含量测定,根据物理化学性质：1.紫外分光光度法: 不适用,2.色谱法 方法简便快速，专属性 强。 特别适用于多种维生素 制剂中维生素E的测定。 3、荧光分光光度法, 气相色谱法(ChP)六十年代起开始研究维生素E的气相色谱法。GC特点,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,气相色谱法(GLC)测定维生素E的优点 可分离维生素E、其异构体及杂质，可选择性地测定维生素E 。适宜测定纯度不高的维生素E及维生素E制剂。中国药典测定维生素E及维生素E制剂均采用气相色谱法。,（二）气相色谱法 1、色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱， 内装硅藻土（80-100目）或高分子多孔小球 固定相：硅酮（OV-17） 涂布浓度 2%的填充柱 固定液100%二甲基聚硅氧烷 毛细管柱 载气：N2， 流速:含2%固定相：以18-20分钟为宜；含5%固定相：以30- 32分钟为宜 柱温：265 内标：正三十二烷 检测器：FID（氢火焰离子化检测器）,4、溶液配制： 内标溶液：正三十二烷的环己烷溶液（1.0mg/ml） 对照溶液：对照品溶解于内标溶液中 (1mg/ml) 供试品溶液：供试品约50mg，用内标溶液，溶解并稀释至50ml,3、供试品测定 f Ax Ms As Ax：供试品峰面积 F：校正因子 As:内标物的峰面积,2、系统适用性试验： n 500（按维生素E计算） R2 （维生素E与内标物 正三十二烷的分离度 ）,mg=,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近,定量法: 内标法加校正因子,1,K,A,A,=,内,对,2,K,A,A,=,内,样,实际工作中的计算方法,本品含C31H52O3应为96.0 102.0%,(二)HPLC用外标法可以测定dl生育酚1、色谱条件：色谱柱：内径4mm,长1530Cm的不锈钢柱;填充以粒径5l0m的十八烷基硅烷键合硅胶固定相流动相：甲醇-水 (49:1)紫外检测器;波长为292nm维生素E比醋酸维生素E先出峰，且二峰的分离度应大于2.6。需做重现性试验，即重复试验3次，峰高的相对标准偏差小于0.8%。,2、测定方法：取供试品液和对照品液各20l注入高效液相色谱仪中，记录峰高HX和Hr3、计算：供试品中维生素E的量mx(mg)=式中：mr为生育酚对照品的量，Hx、Hr为生育酚供试品、对照品中检测得峰高。,维生素E的荧光分光光度法,同步扫描直接（内源）荧光法原理：维生素大多含有芳香环结构（大的共轭键结构），本身具有较强的天然荧光，因此可以利用内源 荧光检测维生素。如血液中维生素E295nm激发，325nm处测量。,扫描过程中使激发波长（ex）和发射波长（em） 彼此间保持固定的波长间隔em- ex= （本实验中为常数40nm ）在保持固定的情况下，同步荧光的信号强度便与待测物质的浓度成正比,实验确定的原则:1.能消除或减小溶剂Raman光干扰2.兼顾方法灵敏度3.一般推荐选择等于（或大略于）Stoke位移的.优点:有望获得同步荧光信号最强、半高宽度最小的单峰同步荧光光谱。,直接295nm激发，325nm处测量。则溶剂Raman光谱严重干扰测定! 同步荧光扫描技术（可变角同步扫描技术）,（三）荧光