新高考生物一轮复习 第十一单元 生物技术实践 第43讲 微生物的利用学案（含解析）北师大版.doc

第43讲 微生物的利用考点一培养基对微生物的选择作用及微生物的纯培养一、培养基的制备1培养基的配制和灭菌(1)实验原理培养基a含义：人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定和保存各种微生物。b成分：一般包括水分、碳源、氮源、微量元素和无机盐等。选择培养基a选择依据：不同种类微生物的生长繁殖对营养的要求不同。b选择途径：人为控制培养基的ph、碳源、氮源、渗透压等条件。c选择结果：使选择的培养基利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他微生物的生存，可以达到分离、培养不同微生物的目的。灭菌a灭菌原因：及时杀灭培养基中的微生物，同时防止微生物大量繁殖造成的培养基营养成分的改变。b常用的灭菌方法：高压蒸汽灭菌。(2)方法步骤培养基的制作流程为：称量溶化调ph分装加塞和包扎灭菌摆斜面及倒平板。2培养基的种类培养基按物理状态可分为液体培养基和固体培养基。二、培养基对微生物的选择作用1探究不同培养基中生长的优势菌群探究程序：问题作出假设设计实验实施实验得出结论表达交流。2菌落(1)含义：将微生物通过某种方法接种到适于生长的固体培养基表面上，在适宜的温度下培养一段时间后，单个的菌体或孢子生长繁殖成的一个个肉眼可见的细胞群体。(2)细菌与酵母菌的菌落特征细菌菌落的共同特征为：湿润、黏稠、易用接种环挑起，菌落各部位颜色一致。酵母菌菌落外形上与细菌极为相似，但比细菌菌落大而厚，颜色也较单调。霉菌菌落较疏松，常呈绒毛状、絮状或蜘蛛网状，一般比细菌菌落大几倍到几十倍。(3)优势菌群的培养基细菌生长需要的氮源高(c/n为41)，ph中性或微碱性(ph7.27.6)，因此培养细菌常采用牛肉膏蛋白胨培养基。酵母菌和霉菌生长所需的碳源含量高(c/n为161)，ph偏酸性(ph56)，因此分离真菌常采用马铃薯葡萄糖琼脂培养基(简称pda)。三、实验：微生物的分离与纯化(一)实验原理1分离的依据：微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。2纯化的依据：将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。(二)方法步骤1微生物的分离(1)稀释：用1ml无菌吸管吸取1ml大肠杆菌培养液，加入到盛有9ml无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1ml加入另一支盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成101、102、103、104、105、106系列稀释度的大肠杆菌稀释液。(2)划线或涂布平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液一环在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上104、105、106三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1_ml，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置510min，使菌液吸附进培养基。(3)培养：将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37培养1624h，即可长出单个菌落。2接斜面分别从培养后长出的单个菌落上挑取少许细胞，接种到斜面培养基上，置培养箱或温室37培养24h，斜面上菌种长好后，4_保存备用。诊断与思考1判断下列说法的正误(1)培养基分装到培养皿后进行灭菌()(2)从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养()(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害()(4)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质()(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌()(6)下图中甲为平板划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果：每一次划线后要将接种环灼烧()除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端()(7)用涂布分离法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落()2如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考：(1)获得图a效果和b效果的接种方法分别是什么？提示获得效果a的接种方法为涂布平板法，获得效果b的接种方法为平板划线分离法。(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？提示最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。题组一培养基及其制备方法分析1下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖k2hpo4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mla.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基b该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨c该培养基缺少提供生长因子的物质d该培养基调节合适的ph后就可以接种使用答案b解析分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，a项错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，b项正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，c项错误；培养基调节完ph还要进行灭菌等操作后，才能使用，d项错误。2下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是()a操作顺序为称量溶化调ph分装加塞和包扎倒平板灭菌b将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯c待培养基冷却至5060时倒平板d待平板冷却凝固后将平板倒过来放置答案a解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是称量溶化调ph分装加塞和包扎灭菌倒平板，其顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。待培养基冷却到5060时，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时开始倒平板，平板冷却凝固后才能倒置。题组二无菌技术的操作3微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是()煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌abcd答案d解析无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故操作错误。4细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()a接种环、手、培养基b高压锅、手、接种环c培养基、手、接种环d接种环、手、高压锅答案c解析一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，如操作者的手和衣着需要消毒处理。高压蒸汽通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。题组三大肠杆菌的纯化方法及过程分析5如图中甲是涂布分离法中的部分操作，乙是平板划线分离法的操作结果。下列叙述中错误的是()a甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液b对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不是由单一的细胞或孢子繁殖而成c乙中培养皿中所得的菌落都符合要求d乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端答案c解析灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，a正确。稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，b正确。平板划线分离法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，c错误。连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。6涂布分离法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是()a操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释b需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面c不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落d操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理答案c解析只有菌液稀释到一定程度后，在固体培养基表面才能形成单个的菌落，否则可能会出现两个以上的细菌共同形成一个菌落，或菌落出现重叠。1培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)ph要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需ph不同。2微生物对主要营养物质的需求特点不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的co2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。3消毒和灭菌的辨析项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药物消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子火焰灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具等高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌4.两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线分离法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌涂布分离法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌考点二微生物的利用一、从土壤中分离有益微生物实验：从土壤中分离纤维素分解菌1实验原理(1)反应依据：土壤中存在大量纤维素分解菌，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶，分解和利用纤维素和半纤维素。(2)检测依据：因此在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能很好地生长，并产生黄色或棕绿色色素，其他微生物则不能生长。2方法步骤方法一：(1)制备培养基：依据小辞典，配制依姆歇涅茨基液体培养基。(2)分装：按每试管5_ml分装，然后加入7cm1cm滤纸条，滤纸条紧贴内壁，且一半浸入培养基中，121灭菌20min。(3)制备土壤稀释液：制备101、102、103、104、105的土壤稀释液。(4)接种培养：分别吸取各稀释度的土壤稀释液1_ml接种到滤纸条上，每个稀释度重复4次，置培养箱中28培养14d。(5)观察：检查各试管中滤纸条上出现的菌落和滤纸颜色变化情况。方法二：(1)制备培养基：制备依姆歇涅茨基培养基平板，在平板上铺一张直径略小于平板的滤纸，用少量上述液体培养基润湿。(2)接种培养：在滤纸上等距放8个直径约10_mm的土粒，盖上培养皿盖以保持湿度，置恒温培养箱中2830培养。(3)观察：每隔2d观察土粒周围滤纸变色情况，直到滤纸颜色变化，长成菌落，于4冰箱中保存备用。二、微生物对有机物质的分解1探究纤维素分解菌是否只能分解纤维素(1)问题：分解纤维素的微生物能否分解其他物质呢？(2)作出假设：假设分解纤维素的微生物还能分解其他物质，包括淀粉、木质素、果胶等大分子含碳有机物。(3)设计实验：分组设计实验方案，用同一种分解纤维素的微生物分解不同的其他物质(淀粉、果胶和木质素等)，或者用不同分解纤维素的微生物分解同一种物质，在实验设计中注意设置对照实验和实验重复等。(4)实施实验：根据实验设计，认真进行实验，记录观察到的实验结果。(5)得出结论：根据实验过程分析实验结果，得出结论。(6)表达交流。2分解纤维素的微生物的意义与作用(1)在自然界碳素循环中具有重要意义。(2)微生物的种类繁多、分布广、数量大，而且所起的作用也多种多样。三、利用微生物制作食品实验：利用微生物制作豆豉1实验原理(1)豆豉是用煮熟的大豆经过纳豆菌发酵制成的。纳豆菌分泌的蛋白酶能够分解大豆中的蛋白质，产生小分子多肽及多种氨基酸，制成风味独特的发酵食品。(2)在制备过程中，根据纳豆菌的芽孢对热不敏感的特性，可采用高温控制杂菌污染。2方法步骤(1)制备豆豉菌悬液：在锥形瓶中倒入3040ml开水，加入新鲜的豆豉56粒，摇匀，备用。(2)浸泡：将黄豆装入杯中加水浸泡15_h左右。(3)煮豆：将浸泡过的黄豆煮2030min，直到黄豆用手轻轻一掐就破即可。(4)接种：在容器内铺上一块双层纱布，将煮好的黄豆趁热捞入容器内，将豆豉菌悬液洒在豆子表面，用消过毒的玻璃棒快速搅拌均匀。(5)发酵：用另一块双层纱布盖在豆子表面，40发酵15h左右。当黄豆表面长出一层菌膜时，根据口味加入盐或酱密封保存。诊断与思考1判断下列说法的正误(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类()(2)从物理性状的角度看，选择培养基多属于固体培养基()(3)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源()(4)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低()(5)纤维素是构成植物细胞壁的主要成分，在纤维素酶的作用下，纤维素可以水解成葡萄糖()(6)在筛选能分解纤维素的细菌的实验中，选择培养的目的是增大样品中目的菌株的浓度()(7)制作豆豉要避免杂菌污染，要对原料高压蒸气灭菌()2一种自养微生物与多种异养微生物混合在一起，如何将自养微生物选择出来？提示用不含有机碳的培养基进行培养，因为自养微生物可以利用空气中的co2而异养微生物不可以，所以能在培养基中生存的就是自养微生物。32013年11月22日凌晨3点，青岛黄岛区发生石油泄漏事件，一些微生物可以有效地分解石油，如何配制选择培养基将这类微生物选择出来？提示配制的选择培养基中，石油作为唯一的碳源，然后用这种培养基培养多种微生物，凡是能在该种培养基上生存的就是能分解石油的微生物。4在分离纤维素分解菌的操作中，选择培养和鉴别培养的目的分别是什么？从物理性质的角度看，两种培养基分别是哪种培养基？提示选择培养的目的是增大纤维素分解菌在样品中的浓度，鉴别培养的目的是筛选出纤维素分解菌。选择培养的培养基中没有加入琼脂，所以属于液体培养基，而鉴别培养基属于固体培养基。题组一选择培养基成分及配制方法的分析1选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()a伊红美蓝培养基、含青霉素培养基b含青霉素培养基、含氨的无机培养基c含氨的无机培养基、含青霉素培养基d含青霉素培养基、伊红美蓝培养基答案b解析酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。2苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题：(1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入_作为碳源，中不同浓度碳源的培养基_(a.影响；b.不影响)细菌的数量。(2)为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于_；使用_法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是_。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？_。答案(1)苯酚a(2)的培养基没有加入苯酚作为碳源，的培养基加入苯酚作为碳源涂布分离法或平板划线分离防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作解析根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用涂布分离法、平板划线分离法或其他方法筛选出单个目的菌落，再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。题组二分解纤维素的微生物的分离3通过分离分解纤维素的微生物实验，对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，这只是分离提纯的第一步，还需要进行()a发酵产纤维素酶的实验b提取纤维二糖的实验c浓缩纤维素分解菌的实验d提取葡萄糖的实验答案a解析为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后产生的葡萄糖进行定量测定。4在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，一般先进行选择培养，其主要目的是()a完全除去其他微生物b没有意义，去掉这一步更好c增加纤维素分解菌的浓度d使纤维素分解菌充分长大答案c解析如果在所采集的土样中纤维素分解菌含量较少，稀释涂布到鉴别培养基上后形成的菌落数就更少，不利于挑选所需菌落。通过选择培养可以增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。这种培养不能纯种分离，故a错。题组三利用微生物制作豆豉5在制作豆豉时，防止杂菌污染的方法是()a在酒精灯火焰旁接种b在高温下接种c利用50%的酒精消毒d利用紫外线灭菌答案b6常作为豆豉菌菌种鉴定依据的是()a鞭毛的有无b荚膜的有无c芽孢的形成能力d菌落的形态答案d解析菌落的形态是鉴定微生物种类的重要依据。1选择培养基的制作方法(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的co2制造有机物生存。(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。2两种微生物筛选方法的比较项目土壤中分解尿素的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离方法使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养利用富含纤维素的选择培养基进行培养原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖特有代表过程co(nh2)2h2oco22nh3纤维素纤维二糖葡萄糖知识网络答题语句网络构建要语强记1无菌操作技术包括消毒和灭菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药物消毒和紫外线消毒等；灭菌包括火焰灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。2培养基的制备包括称量、溶化、调ph、分装、加塞和包扎、灭菌、倒平板等步骤，倒置平板的目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。3尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。探究高考明确考向1(2015江苏，19)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是()a高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖b倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上c为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落d用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上答案d解析a项错，高压灭菌加热结束后，让其自然冷却，待压力表的压力降到零时，再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物；b项错，倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖；c项错，灼烧接种环之后，要在火焰旁冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种；d项对，在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。2(2012北京，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()a将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中b将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上c将转基因植物叶片接种到无菌培养基上d将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上答案c解析在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。3(2011新课标，39改编)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)原油选择(2)平板划线分离法涂布分离法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰解析(1)可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，能降解原油的细菌才能在只含原油这一碳源的培养基上生存。(2)分离纯化菌种时，接种的方法有平板划线分离法和涂布分离法，其目的都是