高效液相色谱仪操作规程.doc

文件标题：高效液相色谱仪标准操作规程共4页第1页文件编码：SOP-QC-001-00起草人：审核人：批准人：起草日期：审核日期：批准日期：颁发部门：质量部颁发数量：执行日期：分发部门： 质量部、化验室GMP管理文件目的：建立高效液相色谱仪的操作规程。范围：适用于高效液相色谱仪的操作。责任人：质量部QC。内容：1 打开SPD-10AVP检测器电源开关和高压恒流泵，仪器将进行自检，大约20-30min后，仪器可开始工作。2 打开计算机及色谱工作站（N2000）。3 冲柱：流动相为色谱甲醇，在停泵状态下排气（逆时针旋转180排液阀，按一下 “purge” 键）排完气后关闭排液阀（顺时针旋转180排液阀）；按“pump”键，泵启动，pump指示灯亮。4 按一下检测器上的“func”键，设定测定波长，按“Enter”键完成设定。按“CE”键使屏幕回到初始状态。5 进入在线色谱工作站，打开通道，编辑实验信息、输入相应的实验标题、实验人、实验单位；在对话框中输入样品名称和保存路径。6 编辑实验方法：单击方法，依次设置采样控制、积分、组分表、谱图显示等后，单击“采用”图标。编号：SOP-QC-001-00题目： 高效液相色谱仪操作规程共4页第2页7 换上分析所用流动相，在停泵状态下排气（逆时针旋转180排液阀，按一下 “purge” 键）排完气后关闭排液阀（顺时针旋转180排液阀）。8 单击“数据采集”，再单击查看基线图标，等基线走直后停止查看基线。9 进样。用进样器将样品缓慢而平稳地从进样口推入定量环。10 等样品出峰后，再次单击数据采集图标“停止采集”。11 实验完毕后，调用冲柱方法，冲柱约30-40min，方可关泵，此时可将检测器关掉，退出工作站。12 关闭所有仪器电源。 基本操作注意事项 1.泵运行前先打开排空阀，用注射器抽出流动相，观察10秒，流动相应连续流 出。 2.不用排空阀时应将其关闭，否则大气压力会使流动相从排空阀出口流出。 3.在使用仪器过程中，注意贮液瓶里的流动相是否够用，如快用尽，应及时更换。 4.更换流动相时务必停泵，防止吸入大量空气，影响仪器正常运作。 5.在启动分析进样时，请快速板动7725i进样阀，否则会引起系统压力突跳，影响仪器的使用寿命。 6.如对样品分析的定性定量要求较高，应配置柱温箱，保持温度恒定。 7.若流动相不是纯甲醇，样品分析结束后，必须用HPLC级甲醇对泵及进样阀进行清洗，大约半小时后，待压力重新回落并稳定，方可关泵。 8.若流动相中含有缓冲盐，则须根据其特殊的清洗方法进行清洗。仪器安装条件与注意事项1. 实验台应水平、稳固、并具有足够的放置空间。2. 安装设备的房间应通风良好，应具有向外排风的装置3. 实验室电压应稳定。 编号：SOP-QC-001-00题目： 高效液相色谱仪操作规程共4页第3页4. 实验室的室温应控制在15-30范围内，并且波动要小；湿度在4585%范围内。5. 仪器应由专人负责，如果使用人员不固定，请准备仪器使用登记本，以明确使用情况，及时处理和保养。高压恒流泵的维护注意事项 泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。应采取下列措施以延长使用寿命： 1. 绝对不允许在没有流动相或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。 2.每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。 3. 要用HPLC级试剂。 4.输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。 5.压力下限应设置在0.51MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞杆的干磨。紫外检测器的维护注意事项 1.要保持检测器中的流通池清洁，每天用后注意冲洗整个管路。 2.流动相要脱气，防止气泡滞留在流通池内，影响分析效果。 3.注意氘灯的保养，及时更换。流动相使用的注意事项1.必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45m薄膜过滤。2.过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如O2）。含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：编号：SOP-QC-001-00题目： 高效液相色谱仪操作规程共4页第4页1先用10：90的甲醇/水冲洗，以洗去缓冲盐，清洗时间至少为一小时。2再用90：10的甲醇/水，冲洗系统，并将系统保存在该流动相中。清洗时间至少为40分钟。手动进样阀的维护注意事项 1. 在每次使用后，尤其是进浓度差异比较大的样品时要用专用工具（不是带针头的注射器）冲洗进样阀，冲洗时必须冲洗进样阀两头数次，每次数毫升。以防止无机盐沉积和样品微粒造成阀内部磨损或阻塞以及样品的交叉污染。2. 安装时进样阀的5，6出口要与注射器在同一水平线上，以防止虹吸现象的发生，导致进样量的重复性变异。 3. 进样量的多少要根据定量环的体积决定：3.1. 当样品量较少时：进样体积由注射器的进样体