PCNA及PTEN在子宫内膜异位症中的表达及意义.doc

PCNA及PTEN在子宫内膜异位症中的表达及意义作者：余繁荣,胡玉红,陈凤云,卢北燕,杨微单位：佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154003【关键词】 PCNA;PTEN;免疫组织化学;异位内膜;在位内膜子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是妇科常见病和多发病，其发病率有逐渐上升的趋势，其虽是良性病变，但具有恶性病变的生物学行为。近年来，细胞的增殖与凋亡失衡学说已成为人们研究的热点。PCNA是一种细胞周期增生核抗原,能客观的反映细胞的增殖能力,是目前应用比较广泛的细胞增殖标记之一。PTEN是一种抑癌基因,在细胞增殖周期中，主要参与细胞周期的调控，发挥抑制细胞过度增殖和促进凋亡的作用。本实验通过检测PCNA及PTEN在EMS 组织中的表达，探讨EMS的发病机制及二者在EMS发展中的相关性。1 资料与方法1.1 一般资料2007—122009—11在佳木斯大学附属第一医院行手术治疗的EMS患者的异位内膜48例，EMS患者的在位内膜36例, 通过开腹手术取得异位病灶组织及其在位内膜。取正常的子宫内膜组织30例作为对照内膜。患者年龄2855岁,平均(32.8±5.6)岁, 月经周期规律,无其他内科疾病，术前半年均未使用激素类药物治疗。所有诊断均经术后病理证实,内膜分期依据月经周期的时间结合病理切片确定。1.2 试剂鼠抗人PCNA单克隆抗体、兔抗人PTEN多克隆抗体、S-P试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。1.3 方法采用免疫组化染色(SP法)：标本经10 %甲醛固定，石蜡包埋,5μm 厚连续切片,实验步骤严格按试剂盒说明书进行。1.4 结果判定标准光学显微镜下PCNA 和PTEN的染色阳性信号均为细胞内出现棕黄色或棕褐色颗粒,在10×40高倍视野下,随机选10个视野,依阳性细胞数占观察同类细胞数的百分比分为4级。无阳性细胞为阴性(-),阳性细胞数≤50%为弱阳性(+),阳性细胞数>50%为阳性(+),阳性细胞数≥75%为强阳性(+)。1.5 统计学方法SPSS13统计软件分析，采用χ2 检验、Fisher’s精确检验及Spearman等级相关分析,P<0.05为有统计学意义。2 结果2.1 PCNA与PTEN在异位子宫内膜与正常内膜中的表达见表1。PCNA、 PTEN主要表达分别定位于子宫内膜细胞的胞核与胞浆中。在子宫内膜异位症的异位内膜，在位内膜及正常内膜的阳性表达依次减弱，分别为93.8%,63.9%，26.7%，两两之间的差异有统计学意义(P<0.05)。PTEN在异位内膜中的阳性表达率明显降低为10.4%，在正常内膜中的阳性表达率为76.7%，在位内膜中的阳性表达介于两者之间为47.2%，有统计学意义(P<0.05)。表1 PCNA与PTEN在异位子宫内膜与对照子宫内膜中的表达*与异位内膜的比较P<0.05 *与在位内膜的比较P<0.05.2.2 PCNA与PTEN子宫内膜中增生期及分泌期的表达见表2。PCNA在子宫内膜的增生期的表达显著高于分泌期的表达，而PTEN在子宫内膜中的表达分泌期高于增生期，两者在EMS患者的异位内膜的增生期及分泌期中的表达均无统计学意义(P>0.05)而在EMS患者的在位内膜及正常内膜的增生期与分泌期中的表达有统计学意义(P<0.05)。表2 PCNA与PTEN 子宫内膜中增生期及分泌期的表达3 讨论细胞内的增殖和凋亡过程几乎涉及所有的病理生理过程,二者的失衡可导致细胞异常增殖。EMS的异位内膜的持续存在不仅与其内膜细胞的凋亡能力降低有关，也与异位细胞增殖能力改变有关1。PCNA是DNA复制时所必需的调节蛋白，其表达在G1期开始增高,S期达到高峰,G2期和M期明显下降2。PCNA的阳性程度可直接反应出DNA复制的活跃程度，反映了细胞的增殖情况。本研究发现，EMS在位内膜PCNA表达百分数明显高于正常内膜，而异位内膜PCNA表达百分数又高于在位内膜。说明EMS的发生与细胞增殖活性增强有关。本实验的结果与Nakayama等3研究一致，显示:EMS异位内膜中PCNA阳性细胞数量明显高于在位内膜。PCNA在EMS中的异位内膜的增生期和分泌期的阳性表达率分别为96.4%,90.0%,其差异无统计学意义(P>0.05)，在在位内膜的增生期与分泌期的表达差异有统计学意义(χ2=5.063, P>0.05)，PCNA在正常子宫内膜组织中的增生期和分泌期的阳性表达率分别为44.4%，0%,其差别有统计学意义(P<0.01)，此结果与Fujishita A等4的研究相一致。表明EMS患者内膜细胞增殖数量增加，这些增殖能力升高的内膜有利于在异位灶种植、生长。研究表明PTEN通过作用于PKB信号传导通路的中心环节，使细胞周期阻断在G1期或促使细胞凋亡5，从而影响细胞的增殖、分化、转移。本试验中PTEN在EMS异位内膜的阳性表达率低为10.4%，而在正常内膜中的表达较高为76.7%，差异有统计学意义(P<0.05)，本试验结果与Mutter等6试验结果大致相同。PTEN在EMS的异位内膜的增生期与分泌期的表达无统计学意义(P>0.05)，但在在位内膜及正常内膜中的增生期与分泌期的表达均有统计学意义(P<0.05，P<0.05)。本研究结果同时显示,PCNA与PTEN之间存在负相关，提示二者之间可能以负反馈调节方式参与EMS的发生发展。综上所述, EMS中的PCNA的上调，使异位内膜细胞的增殖能力增强，而PTEN在EMS中的缺失，促凋亡能力减弱从而使细胞增生和凋亡之间的平衡破坏，导致这些细胞的种植、生长，促发EMS。通过检测EMS患者中的PCNA及PTEN的表达水平，为其诊断、治疗及其预后提供一种新的思维方法。【参考文献】 1Beliard A，Noel A，Foidart JM.Reduction of apoptosis and proliferation in EndometriosisJ.Fertil Setril，2004，82(l):80852Taftachi R, Ayhan A, Ekici S, et al. Proliferating-cell nuclear anti-gen ( PCNA) as an independent prognostic marker in patients after prostatectomy: a comparison of PCNA and Ki67 J.BJU Int,2005,95(4):6506543LiSF，Nakayama K，Masuazawa H，et al.The number of proliferating cell nuclear Natigen Positive cells in endometriotic lesions differs from that in the Nedometium.Analysis of PCNA positive cells during the menstrual cycle and in post一menopauseJ.Virchows Arch A Pathol Anat Histopathol，1993，423(4):2572634Fujishita A，Hasuo A，Khan KN，etal.Immunohistochemical study of angiogenic factors in endometrium and endometriosisJ.Gynecol Obstet Invest，1999，48:36445YamadaKM, Araki M.Tumor suppressor PTEN: modulator of cell signaling，growth，Migration and apoptosis J. J Cell Sci，2001，114(13):237523826Mutter GL，Ming CL，Fitzgerald