高考高考生物一轮复习 专题一 基因工程（第四十七课时）基因工程的基本工具、基因工程的基本操作程序课件 新人教版选修3.ppt

专题1基因工程 第四十七课时基因工程的基本工具 基因工程的基本操作程序 dna 四种脱氧核苷酸 双螺旋 基因 中心法则 遗传密码 限制性核酸内切酶 限制酶 原核生物 双链dna 特定的核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 平末端 复制 限制性核酸内切酶 标记基因 质粒 动植物病毒 dna 黏性末端 黏性末端和平末端 目的基因 复制 a 考点二基因工程基本操作程序 回扣教材 基因工程的基本操作程序第一步 1 目的基因主要是指 也可以是一些具有调控作用的因子 目的基因的获取途径常见的有 目的基因的获取 编码蛋白质的结构基因 从自然界中已有的物种中分离出来 人工合成目的基因 利用pcr技术扩增目的基因 2 基因文库 将含有某种生物不同基因的许多 导入 的群体中储存 各个 分别含有这种生物的 称为基因文库 常见的基因文库有 和 3 pcr技术扩增目的基因pcr是 的缩写 是一项在 复制特定dna片段的核酸合成技术 可以在短时间内 其原理是 其过程是 加热至90 95 冷却到55 60 加热至70 75 dna片段 受体菌 受体菌 不同的基因 基因组文库 cdna文库 聚合酶链式反应 生物体外 大量扩增目的基因 dna双链复制 dna解旋 引物结合到互补dna链 热稳定dna聚合酶 如taq酶 从引物起始进行互补链的合成 第二步 1 目的 使目的基因在受体细胞中 并且可以 同时使目的基因能够 2 基因表达载体的组成 1 启动子 是一段有特殊结构的 位于基因的首端 是 识别和结合的部位 能驱动基因 最终获得所需的蛋白质 2 终止子 是一段有特殊结构的 位于基因的 3 标记基因的作用 是为了鉴定受体细胞中 从而将 筛选出来 常用的标记基因是 基因表达载体的构建 稳定存在 遗传给下一代 表达和发挥作用 启动子 目的基因 终止子 标记基因 dna片段 rna聚合酶 转录出mrna dna短片段 尾端 是否含有目的基因 含有目的基因的细胞 抗生素抗性基因 第三步 1 转化的概念 是目的基因进入 并且在受体细胞内 的过程 2 常用的转化方法 1 将目的基因导入植物细胞 采用最多的方法是 农杆菌特点 易感染 植物和裸子植物 对大多数 植物没有感染力 农杆菌中的ti质粒上的t dna可转移至受体细胞 并整合到受体细胞的 上 其次还有 是单子叶植物中常用的一种基因转化方法 但是成本较高 将目的基因导入受体细胞 受体细胞内 维持稳定和表达 农杆菌转化法 双子叶 单子叶 染色体的dna 基因枪法 是我国科学家独创的一种方法 是一种十分简便经济的方法 我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的 2 将目的基因导入动物细胞 最常用的方法是 此方法的受体细胞多是 操作程序 目的基因表达载体 取卵 受精卵 显微注射 注射了目的基因的受精卵移植到 性动物的 内发育 新性状动物 花粉管通道法 显微注射技术 受精卵 提纯 雌 输卵管或子宫 3 将目的基因导入微生物细胞 感受态细胞法 原核生物特点 等 因此早期的基因工程都用原核生物作为受体细胞 大肠杆菌最常用的转化方法是 处理细胞 细胞 表达载体与感受态细胞混合 细胞吸收dna分子 3 重组目的基因导入受体细胞后 筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是 繁殖快 多为单细胞 遗传物质相对较少 ca2 感受态 感受态 标记基因是否表达 第四步 1 首先要检测转基因生物染色体的dna上是否插入了目的基因 方法是 2 其次还要检测 方法是 3 最后检测 方法是从转基因生物中提取 用相应的抗体进行 4 有时还需进行 的鉴定 如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状 目的基因的检测与鉴定 dna分子杂交技术 目的基因是否转录出了mrna 用标记的目的基因作探针与mrna杂交 目的基因是否翻译成蛋白质 蛋白质 抗原 抗体杂交 个体生物学水平 c d d b d b c b c a b d a 限制性核酸内切酶 dna连接酶 dna分子杂交 抗原 抗体特异性反应 农杆菌转化法 基因枪法 不赞成 转基因玉米能抵抗玉米螟 但并不能抵抗所有的害虫 愈伤组织 有丝分裂 酵母细胞 ads酶基因 dna分子杂交 都具有fpp合成酶基因 fpp合成酶基因所携带的遗传信息相同 不同细胞中转录相同的模板链 转录和翻译过程中都遵循碱基互补配对原则 两种生物共用一套遗传密码 都具有底物ipp 酵母细胞中部分fpp用于合成固醇 反转录 dna连接酶 3 四环素 未导入质粒 氨苄青霉素 无 抗原抗体杂交 限制性核酸内切 识别特定的核苷酸序列 并在特定的节点上切割dna分子 逆 或反 转录 4种脱氧核苷酸 dna分子杂交 pcr 筛选含有目的基因的受体细胞 启动子 终止子 体细胞克隆或者核移植 终止子 rna聚合 作为标记基因 将含有重组质粒的大肠杆菌筛