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薄层色谱方法总结1.方法原理(1)流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。(2) 样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极 - （诱导） - 偶极相互作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离子交换和络合等分离机理。2.溶剂使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇 - 冰乙酸 - 水= 4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml 甲苯 + 2 ml 甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC 板的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。一、溶剂选择规则：1、 考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。2、 先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂3、 一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。4、 混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。5、 展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。6、 一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。二、展开剂的选择条件： 对的所需成分有良好的溶解性； 可使成分间分开； 待测组分的Rf在0.20.8之间，定量测定在0.30.5之间； 不与待测组分或吸附剂发生化学反应； 沸点适中，黏度较小；展开后组分斑点圆且集中； 混合溶剂最好用新鲜配制。三、溶剂极性参数表环已烷 :-0.2、石油醚（类，3060）、石油醚（类，6090）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙醇:3.9、正丁醇:3.9、四氢呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。四、展开剂的选择物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。1、类极性较小的挥发性物质冰片：石油醚(3060)醋酸乙酯(17:3)、 厚朴酚：苯醋酸乙酯(9:1.5)、-香附酮：苯醋酯乙酯冰醋酸(92:5:5)、 丹皮酚：环己烷醋酸乙酯(3:1)，结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf（比移值）的溶剂。为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂，如有机酸或者有机碱。2、类极性较小的不挥发性物质 -谷甾醇：环己烷醋酸乙酯甲醇(6:2.5:1)或者环己烷丙酮(5:2)、熊果酸：甲苯醋酸乙酯冰醋酸(12:4:0.5)、 齐墩果酸：氯仿甲醇(40:1)、猪去氧胆酸：氯仿乙醚冰醋酸(2:2:1)、 大黄素：苯醋酸乙酯甲醇(15:2:0.2)或者苯乙醇(8:1)、丹参酮A：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、 穿心莲内酯：氯仿-无水乙醇(9:1)靛玉红、靛蓝氯仿乙醇(9:1)或者苯氯仿丙酮(5:4:1)结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一些，因为这类物质极性小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分子量减小、母核结构中不饱和健的增加（尤其是出现苯环），极性基团的增加，都使极性增加，展开剂极性也增大。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶剂可以从环己烷甲苯二甲苯苯氯仿的顺序，按照极性要求选择。这里注意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢，造成斑点扩散；另外，羟基的氢键作用力也有不利。调节Rf值的溶剂，从醋酸乙酯甲醇丙酮乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不需要通过提高展开剂的极性。由于存在糖的多羟基结构，苷元的结构影响变小。展开剂中使用极性大的有机溶剂（氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇）和水。乙酸和甲酸的使用，一方面增大展开剂极性，另外也可以抑制硅胶羟基的作用，减少拖尾。由于混溶性和硅胶耐酸能力的限制，水和酸的使用是有限度的。3、类极性大的小分子有机酸：没食子酸：氯仿醋酸乙酯甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸、异绿原酸。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。依次为肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应展开剂分别为：正己烷乙醚冰醋酸(5:5:0.1)、苯冰醋酸甲醇(30:1:3)、氯仿甲醇甲酸（9:1: 0.5）、石油醚乙酸乙酯甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯甲酸水(7:2.5:2.5)。结论：这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本身比较大，另外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基。皂苷的展开剂差不多，极性大。注意甲酸通常指的是浓度85%左右的，含有水。 4、类含氮有机物：盐酸小檗碱：苯醋酸乙酯甲醇异丙醇浓氨试液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸气饱和)或正丁醇冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱：氯仿甲醇浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇冰醋酸水(8:2:1)甘草酸铵：醋酸乙酯甲酸冰醋酸水(15:1:1:2)。结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机酸、有机碱扫尾。对于极性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小，因为化合物和硅胶的作用强。当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂；被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂（如以硅藻土或滑石粉代替硅胶），则洗脱剂的极性亦须相应降低。3.TLC的通用显色方法小木虫学术博客G2?o5xX理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通用显色方法主要有： E/m T2KgVp Fg4244131、紫外照射法：方便、不破坏样品； Pl o;Ermzs? d T$V4244132、碘蒸气法：通用性强，与紫外法结合灵敏度高于该两法单独使用； $b8M?(P +e4244133、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显；小木虫学术博客JM0D6Rf;r 4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。4.薄层层析和纸色谱操作注意事项1、点样 点样器点样于薄层板上,一般为圆点，点样基线距底边1.01.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现象，而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面2、展开 将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为815cm），取出薄层板，晾干，待检测。注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持1530分钟。3、显色与检视 供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。把我的祖传秘方告诉你吧PE(60-90)EtAc/PE=1:2 EtAc/PE/AcOH=15:5:1 EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:18年来我用这四种体系,没有出现过什么问题.我一直在用的是乙酸乙酯：环已烷，不断调节比例，直到有满意的Rf值，有拖尾时可能要加酸或碱，我一般乙酸和三乙胺。我用了好几年了，都还好。不妨一试！铺板铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：23，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间，根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载；涂层厚，显色不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大的是展开剂的配制和展开系统的饱和。点样尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。展开系统的饱和一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。显色喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。solventpolarityViscosity(cp20)Boiling point()UV cutoff(nm)i-pentane(戊烷)0.00-30-n-pentane0.000.2336210Petroleum ether(石油醚)0.010.3030-60210Hexane(己烷)0.060.3369210Cyclohexane(环己烷)0.101.0081210Isooctane(异辛烷)0.100.5399210Trifluoroacetic acid(三氟乙酸)0.10-72-Trimethylpentane(三甲基戊烷)0.100.4799215Cyclopentane(环戊烷)0.200.4749210n-heptane(庚烷)0.200.4198200Butyl chloride(丁基氯; 丁酰氯)1.000.4678220Trichloroethylene(三氯乙烯; 乙炔化三氯)1.000.5787273Carbon tetrachloride(四氯化碳)1.600.9777265Trichlorotrifluoroethane(三氯三氟代乙烷)1.900.7148231i-propyl ether(丙基醚; 丙醚)2.400.3768220Toluene(甲苯)2.400.59111285p-xylene(对二甲苯)2.500.65138290Chlorobenzene(氯苯)2.700.80132-o-dichlorobenzene(领二氯苯)2.701.33180295Ethyl ether(二乙醚; 醚)2.900.2335220Benzene(苯)3.000.6580280Isobutyl alcohol(异丁醇)3.004.70108220Methylene chloride(二氯甲烷)3.400.4440245Ethylene dichloride(二氯化乙烯)3.500.7984228n-butanol(丁醇)3.902.95117210n-butyl acetate(醋酸丁酯; 乙酸丁酯) 4.00-126254n-propanol(丙醇)4.002.2798210Methyl isobutyl ketone()4.20-119330Tetrahydrofuran( 四氢呋喃)4.200.5566220ethanol4.301.2079210Ethyl acetate4.300.4577260i-propanol(丙醇)4.302.3782210Chloroform(氯仿)4.400.5761245Methyl ethyl ketone(甲基乙基酮)4.500.4380330Dioxane(二恶烷; 二氧六环; 二氧杂环己烷)4.801.54102220Pyridine(吡啶)5.300.97115305Acetone(丙酮)5.400.3257330Nitromethane(硝基甲烷)6.000.67101380Acetic acid(乙酸)6.201.28118230Acetonitrile(乙腈)6.200.3782210Aniline(苯胺)6.304.40184-Dimethyl formamide(二甲基甲酰胺)6.400.92153270Methanol()6.600.6065210Ethylene glycol(乙二醇)6.9019.90197210Dimethyl sulfoxide()7.202.24189268water10.201.00100268常用溶剂参数表化合物名称 中文名称极性粘度沸点吸收波长i-pentane (异戊烷)0-30-n-pentane (正戊烷)00.2336210Petroleum ether (石油醚)0.010.33060210Hexane (己烷)0.060.3369210Cyclohexane (环己烷)0.11.081210Isooctane (异辛烷)0.10.5399210Trifluoroacetic acid (三氟乙酸)0.1-72-Trimethylpentane (三甲基戊烷)0.10.4799215Cyclopentane (环戊烷)0.20.4749210n-heptane (庚烷)0.20.4198200Butyl chloride (丁基氯; 丁酰氯)1.00.4678220Trichloroethylene (三氯乙烯; 乙炔化三氯)1.00.5787273Carbon tetrachloride (四氯化碳)1.60.9777265Trichlorotrifluoroethane(三氯三氟代乙烷)1.90.7148231i-propyl ether (丙基醚; 丙醚)2.40.3768220Toluene (甲苯)2.40.59111285p-xylene (对二甲苯)2.50.65138290Chlorobenzene (氯苯)2.70.8132-o-dichlorobenzene (邻二氯苯)2.71.33180295Ethyl ether (二乙醚; 醚)2.90.2335220Benzene (苯)3.00.6580280Isobutyl alcohol (异丁醇)3.04.7108220Methylene chloride (二氯甲烷)3.40.44240245Ethylene dichloride (二氯化乙烯)3.50.7884228n-butanol (正丁醇)3.72.95117210n-butyl acetate (醋酸丁酯；乙酸丁酯)4.0-126254n-propanol (丙醇)4.02.2798210化合物名称 中文名称极性粘度沸点吸收波长Methyl isobutyl ketone (甲基异丁酮)4.2-119330Tetrahydrofuran (四氢呋喃)4.20.5566220Ethanol (乙醇)4.31.2