生物：《实验》复习课件1(湖南师大附中).ppt

高三生物专题复习 实验专题第二讲 鉴定分离类实验 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质DNA的粗提取与鉴定叶绿体中色素的提取和分离 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质 一 实验原理 1 可溶性还原糖 斐林试剂 砖红色沉淀2 脂肪 苏丹 橘黄色脂肪 苏丹IV 红色3 蛋白质 双缩脲试剂 紫色反应 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质 二 实验材料选用 1 可溶性还原糖含糖量较高 颜色较浅或近于白色的植物组织2 脂肪的鉴定富含脂肪 植物油 的种子 如花生 核桃 蓖麻等的种子3 蛋白质的鉴定豆浆 鸡蛋清稀释液 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质 三 试剂 1 斐林试剂A液质量浓度为0 1g mL的NaOH溶液B液质量浓度为0 05g mL的CuSO4溶液2 双缩脲试剂A液质量浓度0 1g mL的NaOH溶液B液质量浓度0 01g mL的CuSO4溶液3 苏丹 或苏丹 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质 四 注意 1 斐林试剂与双缩脲试剂的异同 1 相同点 2 不同点 都由NaOH和CuSO4组成 用途不同CuSO4溶液的浓度不同使用原理不同使用方法不同颜色反应不同 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质 四 注意 2 反应过程中出现的颜色变化及其原因分别是什么 用斐林试剂鉴定还原性糖的实验浅蓝色 棕色 砖红色 沉淀 双缩脲试剂鉴定蛋白质的实验无色 浅蓝色 紫色 检测生物组织中可溶性还原糖 脂肪和蛋白质 四 注意 3 使用双缩脲试剂时为什么B液只能加3 4滴而不能过量 若加入过量的试剂B CuSO4在碱性环境中生成大量的蓝色Cu OH 2沉淀 会遮盖实验中所产生的紫色 影响观察的效果 DNA的粗提取与鉴定 阅读教材p54 561 提取DNA的方法2 以文字和箭头的形式表示DNA在不同NaCl中的溶解度 获得较纯的DNA的过程 DNA的粗提取与鉴定 一 提取DNA的方法 1 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 2mol L的NaCl溶液使DNA充分溶解 使杂质析出0 14mol L的NaCl溶液使DNA析出 使杂质溶解 DNA的粗提取与鉴定 一 提取DNA的方法 2 DNA不溶于酒精 但细胞中的某些蛋白质溶于酒精 利用这一原理 可将DNA与蛋白质进一步分离 3 DNA与杂质对酶 高温和洗涤剂的耐受性不同 蛋白酶能水解蛋白质 但对DNA没有影响 大多数蛋白质不能忍受60 80 的高温 而DNA在80 以上才会变性 洗涤剂能够瓦解细胞膜 但对DNA没影响 DNA的粗提取与鉴定 二 DNA的鉴定在热水浴的条件下 DNA遇二苯胺会被染成蓝色 三 实验材料的选取选用DNA含量相对较高的生物组织 DNA的粗提取与鉴定 四 实验的过程1 破碎细胞 获取含DNA的滤液 细胞在低浓度溶液中吸水胀破 鸡血细胞液中加入蒸馏水 玻棒搅拌 过滤后收集滤液 洗涤剂瓦解细胞膜 切碎的洋葱中 加入洗涤剂和食盐搅拌 研磨 过滤后收集研磨液 DNA的粗提取与鉴定 四 实验的过程1 破碎细胞 获取含DNA的滤液 2 去除滤液中的杂质 DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 DNA对酶的耐受性 DNA对高温的耐受性 DNA的粗提取与鉴定 过滤含有DNA的氯化钠溶液 DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 滤液中加入2mol L的NaCl溶液 溶解DNA 过滤除去不溶杂质 加蒸馏水 调节NaCl溶液浓度为0 14mol L 析出DNA 滤取含DNA的粘稠物 加2mol L的NaCl溶液溶解DNA粘稠物 DNA的粗提取与鉴定 滤液中加入嫩肉粉 反应10 15分钟 嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质 DNA对酶的耐受性 DNA对高温的耐受性 滤液放入60 75 的恒温水浴中保温 反应10 15分钟 使蛋白质沉淀而DNA分子未变性 再将DNA与蛋白质分离 DNA的粗提取与鉴定 四 实验的过程1 破碎细胞 获取含DNA的滤液 2 去除滤液中的杂质 3 DNA的析出与鉴定 在含有DNA的氯化钠溶液中 加入等量 冷却的95 酒精 溶解蛋白质等杂质 静置2 3分钟 溶液中出现白色丝状物 玻棒沿一个方向搅拌 卷起丝状物 小结 DNA的粗提取与鉴定 1 三次过滤 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 过滤含黏稠物的0 14mol LNaCl溶液 过滤溶解有DNA的2mol LNaCl溶液 获得含核物质的滤液 获得纱布上的粘稠物 获得含DNA的滤液 2 两次沉淀析出 DNA在氯化钠的物质的量浓度为0 14mol L时溶解度最低 DNA在冷却的95 的酒精中能沉淀析出 小结 DNA的粗提取与鉴定 3 两次加蒸馏水 使血细胞破裂 降低NaCl浓度使DNA析出 小结 DNA的粗提取与鉴定 归纳 某些物质的鉴定 斐林试剂 双缩脲试剂 苏丹 苏丹 二苯胺 先混匀再加入 水浴加热 先加入A液 再加入B液 染色 混匀水浴加热 砖红色沉淀 紫色物质 橘黄色 红色 蓝色 归纳 某些物质的鉴定 其他物质鉴定 淀粉尿糖二氧化碳氧气等 实验原理 1 提取色素 丙酮 叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中 2 分离色素 层析液 叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同 叶绿体中色素的提取和分离 注意 1 色素提取和分离实验中对材料的处理及其意义2 滤液细线的画法3 层析方法4 实验结果 叶绿体中色素的提取和分离 溶解度原理 丙酮