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文档简介
附录一 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法(一) 1 M Tris-HCl (1 L)1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中2. 加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解;3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值;PH值浓HCl7.4约70 mL7.6约60 mL8.0约42 mL4. 将溶液定容至1 L;5. 高温高压灭菌后,室温保存;注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1 C,溶液的pH值大约降低0.03个单位。(二) 0.5 M EDTA (1 L)1. 称取186.1 g Na2EDTA2H2O,置于1 L烧杯中;2. 加入约800 mL的去离子水,充分搅拌;3. 用NaOH调节pH值至8.0 (约20 g NaOH);注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解;4. 加去离子水将溶液定容至1 L;5. 适量分成小份后,高温高压灭菌;6. 室温保存。(三) 50 TAE Buffer (pH8.5) (1 L)1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中;Tris242 gNa2EDTA.2H2O37.2 g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解;3. 加入57.1 mL的醋酸,充分搅拌;4. 加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存。(四) 10 TBE Buffer (pH8.3) (1 L)1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中;Tris108 gNa2EDTA.2H2O7.44 g硼酸55 g2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水,充分搅拌溶解;3. 去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存。(五) 40%丙烯酰胺(1 L)1. 称量下列试剂,置于2 L烧杯中;丙烯酰胺Alrylamatide380 g甲叉丙烯酰胺Bis-Alrylamatide20 g2. 向烧杯中加入约400 mL的去离子水,充分搅拌溶解;3. 去离子水将溶液定容至1 L;4. 37 C过夜,充分溶解。(六) 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶(70 mL)1. 40%丙烯酰胺、TEMED和10% APS均放置于4 C冰箱中,要用时才取出;2. 按照顺序称量下列试剂,置于200 mL烧杯中;去离子水41 mL5 TBE Buffer14 mL40%丙烯酰胺14 mL10% APS650 LTEMED65 L3. 磁力搅拌器将其充分混合均匀(注意控制时间,特别是室温高的时候,容易凝结);4. 将其缓慢倒入电泳玻璃板中。(七) 6 Loading Buffer (500 mL,DNA电泳用) 1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中;EDTA4.4 gBromophenol Blue250 mgXylene Cyanol FF250 mg2. 向烧杯中加入约200 mL的去离子水,加热充分搅拌溶解;3. 加入180 mL甘油后,使用2 N NaOH调节pH值至7.0;4. 去离子水将溶液定容至500 mL后,室温保存。(八) 10 Loading Buffer (10 mL,RNA电泳用)1. 称量下列试剂,置于10 mL离心管中;0.5 M EDTA (pH 8.0)200 LBromophenol Blue25 mgXylene Cyanol FF25 mg2. 向烧杯中加入约4 mL的DEPC处理水,充分搅拌溶解;3. 加入5 mL甘油后,充分溶解;4. DEPC处理水定容至10 mL后,室温保存。(九) 组织裂解液(100 mL,鱼类用)1. 按照顺序称量下列试剂,置于200 mL烧杯中;1M Tris-Cl (pH 8.0)1 mL0.5M EDTA1 mL0.5M NaCl20 mL10% SDS10 mL2. 加去离子水将溶液定容至100 mL。(十) Hanks液(1L,淡水鱼用)1. 按照顺序称量下列试剂,置于2 L烧杯中;NaCl8.0 gKCl0.2 gMgSO4.7H2O
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