男性个体Amelogenin基因座Y片段缺失1例

男性个体 Amelogenin 基因座 Y 片段缺失 1 例 男性个体 Amelogenin 基因座 Y 片段缺失 1 例 【关键词】 amelogenin基因；性别鉴定；法医学【中文图书号】 19919 2；df795 2【文献标识码】 b【文章编号】 1007 9297(2007)03-0235-03在法医学实践中扩增 amelogenin 基因是进行生物样本的性别鉴定的主要方法，并为大多数的商品化法医鉴定试剂盒如 ampf1str identifiertm(abi)、 powerplex(promega)等所采用。但个体的amelogenin基因如果发生突变，致 x或 y 特异片段扩增失败，则可能导致错误的性别判定。现将作者工作中所见 1 例男性个体amelogenin基因座 y 片段缺失及其分析报道如下。材料与方法一、简要案情唐某，男性， 24 岁，被人用刀砍伤头部及双上肢等部位。chelex 一 100 法提取唐某血样、凶器菜刀上血痕采用 ampflstr identifiertm荧光标记复合扩增试剂盒，进行 l6个基因座复合扩增，用 abi3100 自动遗传分析仪对扩增产物进行检测。唐某血样的基因分型与菜刀刀柄及刀刃上上检出人血的基因分型一致，但 amelogenin基因座均只检出 x片断，各基因座结果见表 1和图 1。用 ampf1str y filer tm(abi)荧光标记复合扩增试剂盒，进行 dys456 等 16个 y 染色体基因座复合扩增除 dys458 未检出，其余基因座唐某的基因分型与菜刀上检出人血的基因分型一致，结果见表 2 和图 2。唐某体检结果：身高 168 citi，身体结实粗壮，嗓音粗，喉结突出胡须明显，乳房正常，睾丸及外生殖器外形正常。 =、样本当事人血样；已知正常男性、女性血样各 30 例。表 1 ampflstr identifiertm 荧光标记复合扩增试剂盒分型结果墅 墨 骛 觏舅 簸 蟹堡 l 一喜 毒 ； }； 一一 r _l器 嚣 0 崔 l 00。 。 ⋯； 一一 ⋯； 一 。 }；鼍 l r 诗咕 r 喑 矗 畚啮 j 图 1 ampflstr identifiertm 荧光标记复合扩增试剂盒分型三、引物设计根据 ncbi 数据库提供的 y 染色体上amelo genin序列 (accession： ac_000067 1gi： 89161219)，自 作者简介 曾于宝 (1972 )，男，汉族，云南玉溪人，医学学士，主检法医师，主要从事法医物证检验及研究工作 通讯作者 聂胜洁 (1975一 )，女，汉族，云南昆明人，在读博士，讲师，主要从事人类遗传学、法医物证教学、检验鉴定及研究工作； rel： +86 087l一533883l； e mail： nsjgtcahoo 13ore q： n基金项目 云南省科技厅自然科学青年基金 (编号： 2004c0020q) 236 表 2 ampfistr y filer tm 荧光标记复合扩增试剂盒分型结果。 0|冀 一篱 0 妻奠 0 0 00_ 槲 ； ll 一一 一 ⋯；一 ⋯；⋯； ⋯； ⋯；⋯； ⋯；⋯； 一 ⋯；⋯； ⋯； 一一 r一 ⋯； 一一一 ⋯； 。 ⋯； ⋯；⋯； 一⋯；一 ⋯； ⋯；⋯； ⋯； 一强豫韬 _蛳 镪鲫 强 魏臻冁酝褥豫鼯镑臻 壤糍强秘 狮 撬 强 挑豫 瓣强赫 稳 辣 瓣瓣摊 秘镪 * i 目 i8 * * 瓣 ! 勰 噍 糍 镕 i l 强 n一 。 一 l 一。 |一 |一 j ⋯；。 l一 一 ， u 一 一 u一 {； jij}；|0 0 0 0_ 0 l 之 0 |e二 二 二 二二 l l 一 譬_- 鬻 ! 鼍 琶 薯 1 1 。鬻 ； ，嘎 ⋯；一 ⋯； ⋯； 唪一 ⋯；⋯； ⋯；⋯； 一，一一⋯；⋯；t 一一 ⋯； ⋯；⋯； ⋯；⋯；⋯；⋯； ⋯；⋯；⋯； ⋯；⋯；图 2 ampf1str y filer tm 荧光标记复合扩增试剂盒分型图谱行设计引物，特异扩增 y 染色体上 amelogenin 片段。扩增 3453 3695 片段 (产物长度263bp)的引物序列为： p1(forward)： 5 tgagaaatccc1tragatacttacag3 ， p2 reverse)： 5 taaagttggagacctggaagc3 。扩增 6068 6300 片段 (产物长度 25lbp)的引物序列为： p1(forward)： 5 ggtccaacaactcagggtct3 ，p2(reverse)： 51 -icc1trattgc 唧 gcc3 。四、检测法律与医学杂志 2007 年第 14卷 (第 3 期 )对当事人，已知正常男性，女性样本进行 pcr 扩增。反应体系 20ixl： 121x1 ddh20、 31x1 dna 模板、 1ixl正反向引物混合物 (20pmol ix1)、 21xl dntpf200m)、 21x1 lox 反应缓冲液。 pcr扩增： 97oc5min预变性， 94 1min， 58 1min， 72lmin， 28 个循环， 727min ， 4 保存。扩增产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳。银染显色。结 果 y染色体上的两个 amelogenin 片段在正常男性及涉案人均检测到特异性条带，正常女性均未检测到特异性条带(图 3，图 4)。图 3 正常男性、女性，涉案人 amelogenin3453 3695片段扩增产物电泳图谱注： 1、 3⋯；5 9 11、 13 为正常男性； 2、4、 6、 10、 12、 14为正常女性； 7、 15为当事人； 8、 16为 marker图 4 正常男性、女性，涉案人 ameiogenin6068 6300片段扩增产物电泳图谱注： 1、 3⋯；5 9 11、 13为正常男性： 2、 4、 6、 10、12、 14 为正常女性； 7、 15为当事人： 8、 16为 marker 讨论牙釉质蛋白基因 (amelogenin)为 x、 y染色体同源基因，扩增 amelogenin基因，可同时检验 x和 y 染色体，根据 sullivan方法设计的引物， x特异片段 106bp， y特异片段 112bp，检测灵敏，结果解释简单，且可以和 str 基因座复合扩增，因此是法医 dna 分析进行生物样本的性别鉴定的最常选用的基因座【 23。在实际工作中，如果送检样本amelogenin基因性别检测只检出 x片段，为女性分型，与案情所反映的男性表现不符的原因有两点： 1该个体是 46， xx 性反转男性 (46，xxreversalmale，又称 46， xx男性综合征 )，这种个体由于缺乏 y法律与医学杂志 2007年第 l4 卷 (第 3期 )染色体，故 amelogenin 基因只能检出 x 片段。 46， xx性反转男性特征为患者的遗传性别 (染色体性别 )与性腺性别不相符。表型为男性，而染色体核型为正常女性，故称性反转。其体征通常为乳腺发达，须毛稀疏，阴茎小，睾丸小，不能或只 能产生少量精子，因而无生育能力，一般无智力障碍及显著躯干畸形。是一种少见的染色体畸形。发病率约为 1 20 000。该病的发生机制较复杂。通常不是由单一的原因所引起。定位 y 染色体短臂上的性别决定区基因 (sry)的存在是 xx男性综合征的主要遗传基础。 46， xx男性大多带有一段易位的 y 染色体 dna 位点，其内含一个开发阅读框架。即 sry 基因，它是决定睾丸发育的重要基因 4， 一。2该个体是 46， xy 男性，但 y 染色体上的 amelogenin 基因同源区发生了基因突变，特别是引物结合区的突变。致使 amelogenin 基 因的 y 片断扩增失败。在本案唐某外生殖器外观正常，乳腺、阴毛等男性第二性征表现明显。且检测的 y 染色体特异基因座仅有 1 个基因座不能够检出产物，据此分析唐某具有 y 染色体，为 46， xy男性，amelogenin基因扩增未检出 y 特异片段是因 y染色体上的amelo genin 基因发生突变所致，根据 y 染色体上 amelo genin基因序列设计的两对引物均扩增出特异性片段进一步证实该分析。amelogenin基因性别检测灵敏、简便，在法医学实践中具有较高的应用价值， amelogenin 基因性别判定失败在一些人群中已见报 道i7,8,91，在工作中若发现 amelogenin对性别的判定结果与其它线索或证 237 据不符时，应考虑是否 y 等位基因丢失的可能，需结合其它方法进行分析，加以核实。参考文献【 1】 sullivan km， mannucci a， kimpn cp， et a1 a rapid andquan titative dna sex test： fluorescence-based pcr analy sis of x-y homologous gene amelogeninj bioteehniques， 1993， 15： 636-6412haas-roehholz h， weiler g additional primer sets for anamelogenin gene pcr based dna sex testj int j legalmed， 1997， 1 10： 312-315【 3】 kimpmn cp， oldroyd nj， watson sk ， et a1 validation of high ly discriminating multiplex short tandem repeat amplifica tion systems for individual identificationj eleetrophorsis， 1996， 17，1283-12934andersson m， page dc， chapelle a chromosomey specificdna is transferred to the short a 珊of x chromosome inhuman xx mesj sci， 1986， 233： 786-788【 5】周家荣，张思仲人类性别决定基因研究进展 j】中 华医学遗传学杂志， 1993， 10(4)： 222【 6黄英，陈美钰，孙琼，等 8例46， xx 男性和 16例 xy女性的 sry 序列研究 j】中华医学遗传学杂志， 1996， 13： 228230【 7santos fr， pandya a， tyler-smith c reliability of dna based sex testsj nat genet， 1998，18： 103【 8】 rofey pe， eekhof ci， kuhl jl a rare mutation in theamelogenin gene and its potential investigative ramificationsj j forensic sei， 2000a5： 1016-1019【 9thangaraj k， reddy ag， singh l is the amelogenin genereliable for gender identification in forensic casework an dprenatal diagnosisj int j legal med， 2002， 116： 121-123(收稿：2006-11-29；修回： 2007 04 20)(上接 228页 )识、技能特长，是严格意义上的独立法人，具有中立性，强调公益性、服务性，是符合面向社会服务的法医司法鉴定机构的比较理想的形式。附属于医学院校的兼职鉴定机构在仪器、设备、专家实力等方面具有明显技术、学术优势，鉴定人具有固定的职业收入，鉴定设备、场所等费用鉴定机构无需承担，其鉴定成本相对较低，并在解决疑难案件方面发挥着重要作用。但司法鉴定是专家教授们的第二职业，他们对于一些缠诉、社会关系复杂案件，往往出