（食品科学专业论文）天麻壮骨丸质量标准提高研究.pdf

西华大学学位论文独创性声明 作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究 工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外， 本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请 学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献 均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 学位黻储始未乏a 指导教师张矧句 日期：哆，舀乒z 一日期： 矽，占加 西华大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，在校 攻读学位期间论文工作的知识产权属于西华大学，同意学校保留并向国家 有关部f - j 或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，西 华大学可以将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采 用影印、缩印或扫描等复印手段保存和汇编本学位论文。( 保密的论文在解 密后遵守此规定) 学位论文作槲未乏叁指捌咝：柙砂 日期：矿，六加 日期：矽。f 占加 、 西华大学硕士学位论文 摘要 天麻壮骨丸采用传统中药天麻、独活等二十味药精制而成，主要功效：祛风除湿， 活血通络，补肝肾，强腰膝，用于风湿阻络，偏正头痛，头晕，风湿痹痛，腰膝酸软， 四肢麻木。本课题在天麻壮骨丸原质量标准基础上进行了提高的研究，完善了天麻壮骨 丸的质量控制方法。 天麻壮骨丸中有十七味中药为直接粉末入药，采用显微鉴别法对各味粉末入药的药 材进行了显微鉴别研究，通过试验，增加了鹿茸、羌活的显微鉴别方法。、 采用薄层色谱法对原标准中的蛇床子素和藁本进行了验证，改进了蛇床子素的展开 系统，另外还对样品中秦艽、防己、当归、川芎、桑枝、杜仲、白芷、稀莶草、常春藤、 天麻、老鹳草十一味药材进行了薄层色谱鉴别研究，制定了天麻壮骨丸中专属性强，阴 性无干扰的秦艽、防己、当归、川芎、桑枝、杜仲六味药材的薄层色谱鉴别方法。 运用高效液相色谱法对天麻素含量检测方法进行了研究，确定以十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂( 柱长为2 5 c m ，内径为4 6 咖，粒径为5i lm ) ；以0 1 磷酸乙腈溶液为 流动相a ，以o 1 磷酸溶液为流动相b ，按规定比例进行梯度洗脱；检测波长为2 2 0 眦 对天麻壮骨丸中的天麻素进行含量测定，确定本品每1 9 含天麻以天麻素( c 。h 。o ，) 计， 不得少于4 5i lg 。课题还对三批样品的马兜铃酸i 限量进行了检测，结果均未检出马兜 铃酸，故马兜铃酸i 限度检查项未收入质量标准正文。 关键词：天麻壮骨丸：质量标准；薄层色谱；高效液相色谱法：含量测定 天麻壮骨丸质量标准提高研究 - a b s t r a c t t i a n m a 盈l u a n g g uw 趾w a sp r e p a m t e db yr h i z o m ag a s t r o d i a e ，r a d i xa n g e l i c a e p u b e s c e n t i sa n do t h e rt w e n t yk i n d so ft r a d i t i o n a lc h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e s ，i t sm a i n l y c l i n i c a la p p l i c a t i o na sf o l l o w s ：d i s p e lr h e u m a t i s m ，p r o m o t i n gb l o o dc i r c u l a t i o nf o rr e m o v i n g o b s t r u c t i o ni nc o l l a t e r a l s ，n o u r i s h i n gl i v e ra n dk i d n e y , e n h a n c ew a i s ta n dk n e e s ，m i g r a i n e ， d i z z i n e s s ，s o r e n e s sa n dw e a k n e s so fw a i s ta n dk n e e s ，l i m b sn u m b n e s s m si sap r o j e c to f q u a l i t ys t a n d a r di m p r o v i n gr e s e a r c h0 1 1t i a n m az l l u a n g g i lw a n ，w em a t u r i t e dt h eq u a l i t y c o n t r o lm e a s u r e so ft i a n m az h u a n g g uw a l l a c c o r d i n gt ot h ef o r m u l a t i o n , s e v e n t yk i n d so ft r a d i t i o n a lc h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e sw e r e p r e p a r a t e da sc r u d ed r u g s ，u s i n gm i c r o s c o p i c a li d e n t i f i c 撕o nt oi d e n t i 矽t h o s ed r u g s , b a s e do n l o to fe x p e r i m e - a ta n do b s e r v a t i o n ，w ea d dc o m uc e r v ie l a p h ip a r v u ma n d l n c i s e d n o t o p t e r y g i u mm i c r o s c o p i c a li d e n t i f i c a t i o nt ot h eq u a l i t ys t a n d a r d a tt h es a m et i m ew ed i ds o m ev a l i d a t i o ne x p e r i m e n to nt h e 耐s i n a lq u a l i t ys t a n d a r d , i m p r o v i n gt h ed e v e l o p i n gs o l v e n ts y s t e mo fo s t h o l e , w es t i l ld or e s e a r c ho n t h eo t h e re l e v e n t r a d i t i o n a lc h i n e s eh e r b a lm e d i c i n e si nt h ed r u gv i at h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h y ，a sar e s u l t w ee s t a b l i s h e ds i xk i n d ss t r o n gs p e c i f i c i t ya n dn e g a t i v en oi n t e r f e r e n c eh e r b a l st h i nl a y e r c h r o m a t o g r a p h yi d e n t i f i c a t i o nm e t h o d s t h ec o n t e n to fg a s t r o d i ni nt i a n m az h u a n g g uw a nw e r ed e t e r m i n a t e db yh p l c ，也e a n a l y s i s w a sc a r r i e do u to nd i a m o n s i l ( d i a m o n d ) c l sc o l u m n ( 4 6 m m x 2 5 0 m m ，5 1 a m ) ； m o b i l ep h a s eaw a sa c e t o n i t r i l e 0 1 p h o s p h o n i ca c i d ，m o b i l ep h a s ebw a s0 1 p h o s p h o n i ca c i dw i t hf l o wr a t eo f 1 0m l m i ng r a d i e n te l u t i o n ，d e t e c t i o nw a v el e n g t hw a s 2 2 0 m w ef i n a l l yd e t e r m i n e dt h a tg a s t r o d i n ( c 1 3h i s0 7 ) s h o u l dn o tb el e s st h a n4 5 p gp e r g r a m so f t i a n m az h u a n g g uw a n w ea l s od e t e r m i n a t e da r i s t o l o c h i ca c i dii nt h r e e b a t c hs a m p l e sb yh p l c ，t h ea r i s t o l o c h i ca c i d1w a sn o td e t e c t e d ，t h e r e f o r et h e d e t e r m i n a t i o no fa r i s t o l o c h i ca c i d1w e r en o ti n c l u d e di nq u a l i t ys t a n d a r t k e yw o r d s ：t i a n m az h u a n g g i iw a n ；q u a l i t ys t a n d a r d ；t h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h y , h i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ；c o n t e n t i i 西华大学硕士学位论文 目录 摘要。i a b s t r a c t i i 弓l言1 1文献综述2 1 1 中成药质量标准研究概况2 1 1 1 中成药质量控制现状2 1 1 2 中成药质量标准研究常用方法2 1 1 3 中成药质量标准研究发展趋势及展望4 1 2 立题背景4 1 2 1 天麻壮骨丸原质量标准4 1 2 2 天麻壮骨丸原标准存在的问题6 1 3 本研究的目的、内容及意义6 2实验部分8 2 1实验试剂与仪器8 2 1 1 主要试药与试剂8 2 1 2 主要仪器与设备8 2 2 实验方法9 2 3 显微鉴别试验9 2 4 薄层色谱鉴别试验9 2 4 1 蛇床子素的薄层色谱鉴别9 2 4 2 藁本的薄层色谱鉴别1 0 2 4 3 秦艽的薄层色谱鉴别10 2 4 4 防己的薄层色谱鉴别10 2 4 5 当归、川芎的薄层色谱鉴别1 1 2 4 6 桑枝的薄层色谱鉴别1 1 2 4 7 杜仲的薄层色谱鉴别1 2 2 4 8 白芷的薄层色谱鉴别1 2 2 4 9 稀莶草的薄层色谱鉴别1 3 2 4 1 0 常春藤的薄层色谱鉴别1 3 2 4 1 1 天麻的薄层色谱鉴别1 4 2 4 1 2 老鹳草的薄层色谱鉴别1 4 i l l 天麻壮骨丸质量标准提高研究 2 5 含量测定试验15 2 5 1 天麻壮骨丸中马兜铃酸i 含量测定1 5 2 5 2 天麻壮骨丸中天麻素的含量测定1 6 3实验结果与分析1 9 3 1 显微鉴别试验结果与分析1 9 3 1 1 鹿茸的显微鉴别结果1 9 3 1 2 羌活的显微鉴别结果2 0 3 1 3 防风的显微鉴别结果2 1 3 1 4 老鹳草的显微鉴别结果2 2 3 1 5 孺莶草的显微鉴别结果2 2 3 2 薄层色谱鉴别试验结果与分析2 3 3 2 1 蛇床子素的薄层色谱鉴别结果与分析2 3 3 2 2 藁本的薄层色谱鉴别结果与分析2 4 3 2 3 秦艽的薄层色谱鉴别结果与分析2 5 3 2 4 防己的薄层色谱鉴别结果与分析2 6 3 2 5 当归、川芎的薄层色谱鉴别结果与分析2 8 3 2 6 桑枝的薄层色谱鉴别结果与分析3 0 3 2 7 杜仲的薄层色谱鉴别结果与分析3 1 3 2 8 白芷的薄层色谱鉴别结果与分析3 3 3 2 9 孺莶草的薄层色谱鉴别结果与分析3 3 3 2 1 0 常春藤的薄层色谱鉴别结果与分析3 5 3 2 1 1 天麻的薄层色谱鉴别结果与分析3 5 3 2 1 2 老鹳草的薄层色谱鉴别结果与分析3 5 3 3 含量测定实验结果与分析3 5 3 3 1 天麻壮骨丸马兜铃酸含量测定结果与分析3 5 3 3 2 天麻壮骨丸中天麻素的含量测定结果与分析3 8 3 4 天麻壮骨丸质量标准( 草案) 4 5 结论4 9 参考文献5 0 附录a 含量测定附图5 1 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果5 6 i v 西华大学硕士学位论文 致谢5 7 v 西华大学硕士学位论文 己i 吉 if j 中成药是指在中医药理论指导下，将中药材按一定的处方和工艺加工而成的一定剂 型可供临床使用的药物，作为药物它必须符合安全、有效、质量可控的基本要求。由于 中成药成分非常复杂，为了确保中成药的安全性和有效性，就必须建立科学可行的质量 控制方法。中成药质量标准是药品质量控制的重要手段，只有建立了可靠的中成药质量 标准，才能实现中成药的质量可控。 天麻壮骨丸是由成都市长青制药有限公司独家生产的一种在治疗腰膝酸软、风湿、 头痛等慢性病方面疗效好，选材天然、毒副作用小、可长期服用，且服用方便的中药丸 剂。公司已经申请了天麻壮骨丸发明专利【l 】，具有自主知识产权。 中药在现代医学中取得举世瞩目的今天，中药以它明显的疗效和较小的毒副作用被 广大人们所接受。化药大多为化学合成药物，它药性迅猛、同时也带来毒副作用大，对 肝肾功能影响较大的问题。临床实验显示在腰膝酸软、风湿、头痛等慢性病方面，天麻 壮骨丸的综合表现要优于化药。 本课题为国家药品标准提高研究课题，是在天麻壮骨丸原标准国家中成药标准汇 编中成药地方标准上升国家标准部分，经络肢体脑系分册，标准编号：w s 一1 0 7 7 6 ( z d 一0 7 7 6 ) 一2 0 0 2 ) ) 基础上乜1 ，根据2 0 1 0 版中国药典一部附录x a 中药质量标 准分析方法验证指导原则和中药注册管理办法相关要求，对天麻壮骨丸质量标准 进行提高和增加的研究，本次药品标准提高研究对原标准中已有项目进行了验证，对原 标准中没有鉴别的药味分别进行了显微鉴别研究、薄层鉴别研究，对君药天麻进行了含 量测定，同时还对药材细辛的马兜铃酸进行了含量 测定。 1 1 2 中成药质量标准研究常用方法 ( 1 ) 显微鉴定法 显微鉴别是指用显微镜对药材的( 饮片) 切片、粉末、解离组织或表面制片及含药 材粉末的制剂中药材的组织、细胞或内含物等特征进行鉴别的一种方法。我国在二十世 纪5 0 年代开始采用显微技术进行中成药的鉴别，在1 9 7 7 版中国药典中，有2 1 8 种 中药材和1 8 8 种中成药采用的显微鉴别的方法【5 1 。鉴别时选择有代表性的供试品，根据 各品种鉴别项的规定制片。制剂根据不同剂型适当处理后制片，置显微镜下观察。如海 西华大学硕士学位论文 马补肾丸和再造丸分别由2 0 味和5 8 味中药材粉末组成，全部可采用显微鉴别法一一检 出【6 1 。 ( 2 ) 理化检查法 理化检查法是指根据药物的理化特性采用适应的理化检查方法对其进行鉴别的方 法，例如对水杨酸盐的鉴别可采用滴加三氯化铁试液进行检查，又如对菟丝子的检查【7 】 可通过开水浸泡观察表面有粘性，加热煮沸至重皮破裂时露出白色卷旋状的胚，其状若吐 丝的方法进行检查。 ( 3 ) 薄层色谱法 薄层色谱法( t h i nl a y e rc h r o m a t o g r a p h y 简称t l c 【8 】) ，是将供试品溶液点于薄层板上， 在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同 法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定的。特 别适用于挥发性较小或较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质。薄层色 谱法具有快速、灵敏和分离效率高等优点，同时影响测定结果的因素也较多，温度、湿 度、点样和薄层板的质量等的会给鉴别结果造成影响【9 】，尽管如此，在中药质量标准研 究中薄层色谱法依然是最常用的方法之一。 ( 4 ) 气相色谱法 气相色谱法( g a sc h r o m a t o g r a p h y 简称g c ) 是采用气体为流动相流经装有填充剂的 色谱柱进行分离测定的色谱方法【l0 1 。物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分 离，各组分先后进入检测器，用数据处理系统记录色谱信号。多用于中药材中挥发性成 分的测定，如对樟脑、薄荷脑的含量测赳1 1 】。气相色谱同质谱连用可同时实现复杂混合 物个组分的分离和鉴定。气相质谱连用进一步的扩大了该方法的应用范围。气相色谱 法精密度高，速度快，分离效果好，对挥发性成分的测定有特别的优势，同时由于其在 高温下进行，一些对温度比较敏感或者不能气化的物质则不能采用该方法。 ( 5 ) 高效液相色谱法 高效液相色谱法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y 简称h p l c ) 系采用高压 输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱中，对供试品进行分离测定的色谱方 法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由 积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。由于该方法的能快速高效对中药材进行定 性和定量的分析，高效液相色谱法在中成药的质量研究中已经得到越来越广泛的应用， 如采用高效液相色谱法测定人参皂苷的含量【1 2 】 高效液相色谱法具有高分辨率，高林敏度等特点，随着色谱柱的发展，该方法的适 用范围变得更广，效果更好，高效液相色谱法成为中药分析中最常用的方法之一。 1 2 1 天麻壮骨丸原质量标准 【处方】 天麻4 4 9 人参2 i g 天麻壮骨丸 tia n m az h u a n g g uw a n 独活1 7 7 9 细辛2 i g 豹骨2 i g 鹿茸2 i g 西华大学硕士学位论文 杜仲( 盐炙) 1 7 7 9 稀莶草1 7 7 9 川芎4 4 9 白芷4 4 9 老鹳草1 7 7 9 滑石粉7 9 白虫蜡0 0 2 5 9 五加皮1 7 7 9 防风4 4 9 防己4 4 9 藁本8 9 9 常春藤1 7 7 9 阿拉伯酸3 3 9 活性碳6 9 淀粉1 8 9 制成1 0 0 0 丸 【制法】以上二十味药材，桑枝、常春藤、杜仲加水煎煮三次，每次1 小时，合 并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1 1 6 - - , 1 1 9 ( 5 0 c ) 的稠膏，其余天麻等十七味 粉碎成细粉，过筛，与上述稠膏拌匀，干燥，粉碎，过筛，用水泛丸，干燥，加入滑 石粉、阿拉伯酸和淀粉，用活性炭包衣，白虫蜡打光，即得。 【性状】本品为黑色的浓缩丸；味苦涩。 【鉴别】( 1 ) 取本品3 9 ，研细，加无水乙醇3 0 m l ，加热回流3 0 分钟，滤过，滤 液蒸干，残渣加无水乙醇l m l 使溶解，作为供试品溶液。另取蛇床子素对照品，加无水 乙醇制成每l m l 含l m g 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版 一部附录b ) 试验，吸取上述两种溶液各2 p 1 ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以苯一 醋酸乙酯( 3 0 ：1 ) 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯( 3 6 5 n m ) 下检视。供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 ( 2 ) 取本品1 0 9 ，研细，加乙醚5 0 m l ，冷浸1 小时后，超声处理2 0 分钟，滤过， 滤液浓缩至l m l ，作为供试品溶液。另取藁本对照药材1 9 ，同法制成对照药材溶液。照 薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述两种溶液各l g l ，分别 点于同一硅胶g 薄层板上，以石油醚( 6 0 9 0 ) 一丙酮( 1 9 ：1 ) 为展开剂，展开， 展距1 0 c m ，取出，晾干，喷以5 香草醛硫酸溶液，在1 0 5 加热至斑点显色清晰。供 试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 【检查】应符合丸剂项下有关的各项规定( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录ia ) 。 【浸出物】取本品适量，研细，取2 5 9 ，精密称定，照浸出物测定项下的热浸法 ( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录xa ) 测定，用乙醇作溶剂，浸出物不得少于8 0 。 【功能丰治】祛风除湿，活血通络，补肝肾，强腰膝。用于风湿阻络，偏正头 痛，头晕，风湿痹痛，腰膝酸软，四肢麻木。 【用法用量】口服，一次4 丸，日3 次。 【禁忌】孕妇忌用。 g g g 7 g 9 4 9 7 8 4 1 8 艽归枝活 秦当桑羌 天麻壮骨丸质量标准提高研究 【注意事项】本品含有马兜铃科植物细辛，在医生指导下服用；定期复查肾功 能。 【规格】每1 0 丸重1 7 9 【贮藏】密封。 【有效期】1 5 年。 1 2 2 天麻壮骨丸原标准存在的问题 天麻壮骨丸由天麻、豹骨、鹿茸、独活、桑枝、老鹳草、杜仲( 盐炙) 、常春藤、 秦艽、当归、川芎、细辛等2 0 味制成，目前试行质量标准只对蛇床子素和藁本进行薄 层鉴别试验，处方中其余十几味药没有建立有效的质量控制方法，其中君药天麻中天麻 素和细辛中毒性成分马兜铃酸in 7 3 没有建立合理的含量测定方法，药物的质量得不到全 面有效的控制，药物的安全性得不到充分的保证。 1 3 本研究的目的、内容及意义 根据天麻壮骨丸现行质量标准存在的问题，有必要进行进一步的研究建立更加全面 有效的质量控制方法，以达到提高药物质量可控性和安全性的目的。 主要研究内容： ( 1 ) 天麻壮骨丸的显微鉴别 采用显微鉴别法，对天麻壮骨丸中多味直接粉末入药的药材进行研究，建立显微特 征明显，镜检率高、阴性无干扰的药材的显微鉴别方法。 ( 2 ) 天麻壮骨丸的薄层色谱鉴别 采用薄层色谱法，对天麻壮骨丸中十二味药材进行研究，建立天麻壮骨丸中专属性 强、重复性好的药材的薄层色谱鉴别方法。 ( 3 ) 天麻壮骨丸的含量测定 采用高效液相色谱法，以天麻素对照品和马兜铃酸为指标，建立天麻壮骨丸君药天 麻含量和毒性药材细辛限度的高效液相色谱测定方法。 天麻壮骨丸由2 0 味中药材制成，每味药材含有多种化学成分，因此天麻壮骨丸的 化学组成非常复杂。从这样的一个复杂处方中无干扰的鉴别出某一味药材或某一特定化 学成分是相当不容易的，特别是处方中出现多味同科属药材时必须采用合适的提取和鉴 别方法才能排除干扰。在长时间的实验研究基础上建立了独活、藁本、秦艽、防己、当 归、川芎、桑枝、杜仲8 味药材专属性强的薄层色谱鉴别法。， 6 西华大学硕士学位论文 本文还首次对天麻壮骨丸进行了显微鉴别研究，通过观察研究建立了天麻壮骨丸中 鹿茸和羌活的显微鉴别方法。 研究还首次对天麻壮骨丸中天麻素的高效液相色谱测定法进行了方法学研究，建立 了天麻壮骨丸中天麻的含量测定方法，为评价药物的质量提供了科学的依据。 天麻壮骨丸质量标准提高研究 2 实验部分 2 1实验试剂与仪器 2 1 1主要试药与试剂 主要试药与试剂见表2 1 表2 1 主要试药和试剂 t a b 2 1m a i nr e a g e n t 序号名称规格纯度生产厂家 1 甲醇 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 2 乙醇 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 3 乙腈 2 0 0 0 m l 色谱纯天津科密欧 4 正丁醇 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 5 丙酮 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 6 冰醋酸 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 7 甲酸 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 8 三氯甲烷 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 9 醋酸 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 1 0 乙醚 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 1 1 石油醚( 6 0 9 0 ) 5 0 0 m 1 分析纯广东光华化学厂 1 2 天麻素2 0 m g含测中国药品生物制品检定所 1 3 马兜铃酸i1 9鉴别中国药品生物制品检定所 1 4 蛇床子素2 0 m g鉴别中国药品生物制品检定所 1 5 龙胆苦昔1 9 鉴别中国药品生物制品检定所 1 6 当归对照药材2 9鉴别中国药品生物制品检定所 1 7 桑枝对照药材2 9鉴别中国药品生物制品检定所 1 8 白芷对照药材2 9鉴别中国药品生物制品检定所 1 9 防己对照药材2 9 鉴别中国药品生物制品检定所 2 1 2 主要仪器与设备 主要仪器与设备见表2 2 西华大学硕士学位论文 表2 2 主要仪器与设备 t a b 2 2m a i ni n s t r u m e n t 2 2实验方法 本课题采用显微鉴别法，薄层色谱法，高效液相色谱法对天麻壮骨丸进行质量标 准的研究。 2 3 显微鉴别试验 显微鉴别法主要解决宏观无法观察到的动、植物组织构造、细胞、内含物及矿物 的形态特征。利用显微镜把微观的东西放大，进行观察。适应对象是药材及其碎片、粉 末、在中成药中加有原生药材细粉各种剂型，如散剂、胶囊剂、丸剂、片剂、锭剂等。 实验方法：取天麻壮骨丸适量，碾磨成细粉做为样品，同时分别依次取缺一味药材粉末 的天麻壮骨丸阴性作为对照，以水合氯醛透化装片，置显微镜下观察。 2 4 薄层色谱鉴别试验 2 4 1 蛇床子素的薄层色谱鉴别 供试品溶液制备：取本品3 9 ，研细，加无水乙醇3 0 m l ，加热回流3 0 分钟，滤过， 滤液蒸干，残渣加无水乙醇l m l 使溶解，作为供试品溶液。 9 天麻壮骨丸质量标准提高研究 对照品溶液制备：取蛇床子素对照品，加无水乙醇制成每l m l 含l m g 的溶液，作为 对照品溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述两种溶 液各2 9 1 ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以甲苯一醋酸乙酯( 3 0 ：1 ) 为展开剂，展开， 取出，晾干，置紫外光灯( 3 6 5 n m ) 下检视。 2 4 2 藁本的薄层色谱鉴别 供试品溶液制备：取本品1 0 9 ，研细，加乙醚5 0 m l ，冷浸l 小时后，超声处理2 0 分钟，滤过，滤液浓缩至l m l ，作为供试品溶液。 对照品溶液制备：取藁本对照药材1 9 ，同法制成对照药材溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述两种溶 液各1 n ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以石油醚( 6 0 a 一9 0 ) 一丙酮( 1 9 ：1 ) 为展 开剂，展开，展距1 0 c m ，取出，晾干，喷以5 香草醛硫酸溶液，在1 0 5 加热至斑点 显色清晰。 2 4 3 秦艽的薄层色谱鉴别 本品制法中，秦艽为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合秦艽所含成 分的理化性质，建立龙胆苦苷薄层鉴别方法。 供试品溶液的制备：取样品1 0 9 ，研细，加甲醇5 0 m l ，超声处理3 0 分钟，滤过， 滤液浓缩至2 m l ，即得。 对照品溶液的制备：取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每l m l 含0 2 m g 的溶液，即 得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取缺秦艽外的其余药味，按制法制成阴性样 品，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 p l ，分别点于同一硅胶gf 2 5 4 薄层板上，以乙酸乙酯一甲醇一水( 2 0 ：2 ：1 ) 为展 开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯( 2 5 4 n m ) 下检视。 2 4 4 防己的薄层色谱鉴别 本品制法中，防己为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合防己所含成 分的理化性质，建立防己薄层鉴别方法。 1 0 西华大学硕士学位论文 供试品溶液的制备：取样品l o g ，研细，加甲醇5 0 m l ，超声处理3 0 分钟，滤过， 滤液浓缩至2 m l ，即得。( 与秦艽供试品溶液相同) 对照药材溶液的制备：防己对照药材0 3 9 ，加甲醇2 m l ，超声处理1 0 分钟，放 置，取上清液，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除防己外的其余药味，按制法制成阴性样 品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 p l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以三氯甲烷一乙酸乙酯一甲醇一丙酮一浓氨溶液 ( 4 ：4 ：1 ：1 ：o 1 ) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，日光下检 视。 2 4 5 当归、川芎的薄层色谱鉴别 本品制法中，当归、川芎为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合所含 成分的理化性质，建立了正文所述当归、川芎薄层鉴别方法。 供试品溶液的制备：取本品l o g ，研细，加乙醚5 0 m l ，冷浸1 小时后，超声处理2 0 分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯l m l 使溶解，即得。( 与藁本供试品溶液相同) 对照药材溶液的制备：取当归、川芎对照药材各o 5 9 ，加乙醚2 m l 超声处理2 分 钟，放置，取上清液，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除当归、川芎外的其余药味，按制法制成 阴性样品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 p 1 ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以正己烷一乙酸乙酯( 4 ：1 ) 为展开剂，展 开，取出，晾干，置紫外光灯( 3 6 5 n m ) 下检视。 2 4 6 桑枝的薄层色谱鉴别 本品制法中，桑枝为水煎煮后入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合桑枝所 含成分的理化性质，建立了正文所述桑枝薄层鉴别方法。 天麻壮骨丸质量标准提高研究 供试品溶液的制备：取样品1 0 9 ，研细，加饱和碳酸钠溶液4 0 r a l ，超声处理2 0 分 钟，滤过，滤液用稀盐酸p h 值至1 - - 2 ，静置3 0 分钟，滤过，滤液用乙酸乙酯2 0 m l 振 摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0 5 m l 使溶解，即得。 对照药材溶液的制备：桑枝对照药材1 9 ，同供试品溶液制备方法，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除桑枝外的其余药味，按制法制成阴性样 品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 n ，分别点于同聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光 灯( 3 6 5 n m ) 下检视。 2 4 7 杜仲的薄层色谱鉴别 本品制法中，杜仲为水煎煮后入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合桑枝所 含成分的理化性质，建立了正文所述杜仲薄层鉴别方法。 供试品溶液的制备：取本品l o g ，研细，加乙醚5 0 m l ，冷浸1 小时后，超声处理2 0 分钟，滤过，滤渣挥干，加甲醇5 0 m ，加热回流l 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加入 甲醇5 m l 使溶解，离心，即得。 ， 对照药材溶液的制备：取杜仲对照药材o 5 9 ，同供试品溶液的制备，即得。 对照品溶液的制备：另取松脂醇二葡萄糖苷对照品，加甲醇制成每l m l 含0 1 m g 的 溶液，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除杜仲外的其余药味，按制法制成阴性样 品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述四种溶 液各5 p l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以二氯甲烷一甲醇一甲酸( 8 ：2 ：0 1 ) 为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以5 香草醛硫酸的1 0 硫酸乙醇溶液，在1 0 5 加热至斑点 显色清晰，日光下检视。 2 4 8 白芷的薄层色谱鉴别 本品制法中，白芷为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合天麻所含成 分的理化性质，对白芷的薄层鉴别方法进行了研究。 西华大学硕士学位论文 供试品溶液的制备：本品1 0 9 ，研细，加乙醚5 0 m l ，冷浸1 小时后，超声处理2 0 分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯l m l 使溶解，即得。 对照药材溶液的制备：取白芷对照药材0 5 9 ，加乙醚2 m l ，超声处理5 分钟，放 置，取上清液，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除白芷外的其余药味，按制法制成阴性样 品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 p , 1 ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以石油醚( 6 0 - - 9 0 ) 一乙醚( 3 ：2 ) 为展 开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯( 3 6 5 n m ) 下检视。 2 4 9 稀莶草的薄层色谱鉴别 本品制法中，稀莶草为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合稀莶草所 含成分的理化性质，对稀莶草的薄层鉴别方法进行了研究。 供试品溶液的制备：取本品1 0 9 ，研细，加甲醇5 0 m l ，超声处理3 0 分钟，滤过， 滤液浓缩至2 m l ，即得。( 与秦艽供试品相同) 对照药材溶液的制备：取稀莶草对照药材0 5 9 ，加甲醇2 m l ，超声处理1 0 分钟放 置，取上清液，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除稀莶草外的其余药味，按制法制成阴性 样品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 n ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以三氯甲烷一甲醇( 4 ：1 ) 为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以5 香草醛硫酸溶液，在1 0 5 加热至斑点显色清晰，日光下检视。 2 4 1 0 常春藤的薄层色谱鉴别 本品制法中，常春藤为水煎煮后入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合常春 藤所含成分的理化性质，对常春藤皂苷元的薄层鉴别方法进行了研究。 供试品溶液的制备：取木品1 0 9 ，研细，加甲醇5 0 m l ，加热回流1 小时，滤过，滤 液蒸干，残渣加水2 0 m l 使溶解，通过d 1 0 1 型大孔吸附树脂( 内径1 5 a m ，柱高1 5 a m ) ， 以2 0 乙醇、3 0 乙醇各7 0 m l 洗脱，再以7 0 乙醇7 0 m l 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣 天麻壮骨丸质量标准提高研究 加2 m o l l 盐酸溶液3 0 m l ，加热回流2 小时，立即冷却，移入分液漏斗中，加乙酸乙酯 3 0 m l 振摇提取，分取乙酸乙酯液，7 0 以下浓缩至近干，加甲醇l m l 溶解，即得。 对照品溶液的制备：另取常春藤皂苷元对照品，加甲醇制成每l m l 含l m g 的溶液， 即得。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 9 l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以环己烷一乙酸乙酯一冰醋酸( 6 ：4 ：0 2 5 ) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1 0 硫酸乙醇溶液，在1 0 5 加热至斑点显色清 晰，日光下检视。 2 4 1 1 天麻的薄层色谱鉴别 本品制法中，天麻为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合天麻所含成 分的理化性质，对天麻的薄层鉴别方法进行了研究。 供试品溶液的制备：取本品1 0 9 ，研细，加7 0 甲醇5 0 m l ，超声处理3 0 分钟，滤 过，滤液蒸干，残渣加甲醇l m l 使溶解，即得。 对照药材溶液的制备：取天麻对照药材o 2 9 ，加甲醇2 m l ，超声处理1 0 分钟，放 置，取上清液，即得。 阴性对照溶液的制备：按处方比例称取除天麻外的其余药味，按制法制成阴性样 品，再按正文供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 9 l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以乙酸乙酯一甲醇一水( 9 ：1 ：o 2 ) 为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以1 0 的磷钼酸乙醇溶液，在1 0 5 加热至斑点显色清晰， 日光下检视。 2 4 1 2 老鹳草的薄层色谱鉴别 本品制法中，老鹳草为原粉入药，参照中国药典2 0 1 0 年版一部，并结合老鹳草所 含成分的理化性质，对槲皮素、没食子酸的薄层鉴别方法进行了研究。 供试品溶液的制备：取本品l o g ，研细，加甲醇5 0 m l ，超声处理3 0 分钟，滤过， 滤液浓缩至2 m l ，即得。( 与秦艽供试品相同) 对照品溶液的制备：分别取槲皮素、没食子酸对照品0 5 9 ，加甲醇制成每l m l 含 l m g 的溶液，即得。 西华大学硕士学位论文 鉴别：照薄层色谱法( 中国药典2 0 1 0 年版一部附录b ) 试验，吸取上述三种溶 液各5 p l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以甲苯一甲酸乙酯一甲酸( 6 ：3 ：1 ) 为展开 剂，展开，取出，晾干，喷以2 - - - 氯化铁乙醇溶液，日光下检视。 2 5 含量测定试验 2 5 1 天麻壮骨丸中马兜铃酸i 含量测定 参照川芎茶调颗粒( 国家食品药品监督管理局标准( 试行) y b z l 9 6 7 2 0 0 5 ) 检查项 下测定马兜铃酸i 限量的高效液相色谱方法，对本品中马兜铃酸i 限量进行检测。 ( 1 ) 仪器与试药 仪器：w a t e r s 2 6 9 5 - 2 4 8 7 高效液相色谱仪，a e - 2 4 0 电子天平，a e g 2 2 0 电子天平。 对照品：马兜铃酸i 对照品( 1 1 0 7 4 6 2 0 0 5 0 7 ，供鉴别用) 由中国药品生物制品检 定所提供。 流动相中的甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂试药均为分析纯。 ( 2 ) 色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂( s e p a xa m e t h y s tc 1 8 h 柱2 5 0 m i n x4 6 m m ) ； 流动相：甲醇一水一醋酸( 5 3 ：4 5 ：2 ) ；流速1 o m l m i n ；检测波长3 1 7 n m ；柱温3 5 。 ( 3 ) 对照品溶液的制备 精密称取马兜铃酸i ( 1