GB-T13883-92饲料中硒的测定方法2,3一二氨基蔡荧光法.pdf

中华 人 民 共 和 国 国 家 标 准饲料中硒的测定方法2 , 3 一 二氨基蔡荧光法G B / T 1 3 8 8 3 一 9 2M e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o fs e l e n i u m i n f e e d s t u f f s - ( DAN) f l u o r o me t r t主肠内容与适用范围 本标准规定了用 2 , 3 一 二氨基蔡( D A N ) 荧光法测定饲料中硒的方法。 本标准适用于配合饲料、 预混合料、 浓缩饲料和单一饲料中硒的测定。 在萃取液中检测范围为。 . 0 0 1 - 0 . 1 p g / m L ( 以S e 计) 。2 引用标准GB 1 . 4GB 6 6 8 2标准化工作导则化学分析方法标准编写规定实验室用水规格3 方法原理 先将试样中有机物破坏， 使硒游离出来， 在微酸性溶液中硒( I v ) 和2 , 3 一 二氨基蔡( D A N ) 生成4 , 5 -苯基苯并硒二哇， 用环己 烷直接在生成络合物的同一酸度溶液中萃取， 用荧光光度计测定其荧光强度。4 试剂 实验室用水应符合G B 6 6 8 2 中二级用水的规格， 使用试剂除特殊规定外， 应为分析纯。4 . 1 高氯酸 优级纯( p l . 6 7 g / m L ) e4 . 2 硝酸 优级纯( p l . 4 2 g / m L ) e4 . 3 环己 烷 p 0 . 7 7 8 -0 . 8 0 g / m L .4 . 4 盐酸优级纯( 1 +3 ) ,4 . 5 盐酸 c( H c=0 . 1 m o l / I 。4 . 6 氨水 p 0 . 9 0 g / m L .4 . 7 盐酸径胺一 乙二胺四乙酸二钠( E D T A) 溶液 称取1 0 g E D T A溶于5 0 0 m L 水中， 加入2 5 g 盐酸轻胺使其溶解， 用水稀至1 0 0 0 m L ,4 . 8 2 , 3 一 二氨基蔡( D A N ) 溶液 称取D A N O . 1 g 于1 5 0 m L 烧杯中， 加入1 0 0 m L O . 1 m o l / L 盐酸使其溶解， 转移到2 5 0 m L 分液漏斗， 加入2 0 m l , 环己烷( 4 . 3 ) 振荡1 m i n ， 待分层后弃去环己 烷， 水相重复用环己 烷处理2 -3 次。 水相放入棕色瓶中上面加盖 3 m m厚的环己烷， 于暗处保存， 此液可使用数周。4 . 9 硒标准贮备溶液 称取硒粉( 纯度9 9 %以上) 2 5 m 郊精确至0 . 0 1 m g ) ， 入1 0 0 m L烧杯中， 加入1 0 m L硝酸加热溶解，冷至室温， 用水转移至1 0 0 0 m L容量瓶中 并稀至刻度， 摇匀， 此液1 m L 含2 5 . 0 0 p g 的硒。国家技术监督局1 9 9 2 一 1 1 - 2 4 批准1 9 9 3 -0 6 一 0 1 实施免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G B / T 1 3 8 8 3 一 9 24 . 1 0 硒标准工作溶液 吸取( 4 . 9 ) 溶液 1 . 0 0 ml 、 入 5 0 mL高型烧杯中按分析步骤消化至高氯酸冒烟5 m i n ， 取下稍冷， 加1 m L水和1 m L盐酸( 4 . 4 ) 摇匀， 放置 1 0 m i n 用盐酸( 4 . 5 ) 转移至2 5 0 m L容量瓶中并稀至刻度摇匀，此液1 . 0 0 M I含硒0 . 1 p g .4 . 1 1 甲酚红 0 . 4 g / L 水溶液， 称取。 . 1 g甲酚红入4 0 0 m L烧杯中， 加少许水加氨水( 4 . 6 ) 使其溶解用水稀至2 5 0 m L , 摇匀。5 仪器、 设备5 . 1 荧光光度计 激发波长 3 6 5 3 8 5 n m, 荧光发射波长 5 2 0 - 5 2 5 n m, l c m石英比色杯。5 . 2 实验室用样品粉碎机 标准分析筛孔径( 0 . 4 2 , 0 . 2 5 m m ) .5 . 3 分析天平 分度值。 . 0 0 0 1 g ,5 . 4 可调温电炉( 6 0 0 W) 或电热板( 3 0 0 0 W) o5 . 5 高型烧杯5 0 m L和相应大小的表面皿。5 . 6 具塞比色管5 0 m L ,5 . 7 刻度吸量管 2 m l , , 1 0 m L ,6 试样的制备 取已粉碎至0 . 4 2 m m的试样4 0 5 0 g 人2 5 0 m L烧杯中加水至能搅动的糊状， 在搅拌器上搅1 0 -1 5 m i n ， 倒在小搪瓷盘中 铺平， 放入烘箱7 0 0C 烘干， 粉碎机上磨至。 . 2 5 m m, 混匀装入密封容器中备用，防止试样成分变化。了 分析步骇7 . 1 试样测定( 配合饲料、 浓缩料、 单一饲料) 称取已 制备好的试样约1 g ， 精确至。0 0 0 1 g ( (0 . 4 p g S e ) ， 放入5 0 m L高型烧杯中， 用少量水润湿试样加硝酸( 4 . 2 ) 1 0 m L , 轻摇烧杯使试样散开， 加盖表面皿放到电热板( 5 . 4 ) 上低温加热见反应开始( 泡沫开始上冒) ， 切断电源或取下待剧烈反应缓解( 气泡不上涌) 后再放到电热板上煮沸至硝酸体积减少到5 m L 左右， 取下稍冷加入5 m L 高氯酸( 4 . 1 ) 继续加热至剧烈小气泡冒完， 高氯酸冒 烟; 取下稍冷，用水吹洗表面皿和杯壁， 去掉表面皿， 将烧杯置电热板上先低温蒸发水分， 再升温至高氯酸冒 烟并保持5 1 0 m i n ， 取下稍冷， 加入 1 m L水和 1 m L盐酸( 4 . 4 ) ， 摇匀， 放置 1 0 m i n ， 水稀至3 0 m L左右， 加二滴甲酚红( 4 . 1 1 ) ， 用氨水( 4 . 6 ) 中和至黄色， 再用盐酸( 4 . 4 ) 中和至橙色( p H 1 . 5 - 2 ) ， 加入3 m L盐酸羚胺溶液( 4 . 7 ) 摇匀， 用盐酸( 4 . 5 ) 转移到5 0 m L比色管中( 5 . 6 ) ， 加2 m L D A N溶液( 4 . 8 ) , 盖好塞子， 摇匀，松动塞子， 置于1 0 0 水中 保持5 m i n 。 取出放人冷水中 迅速冷却至室温， 用盐酸( 4 . 5 ) 稀至5 0 m L ， 加5 m L 环己 烷( 4 . 3 ) 振荡1 m i n ， 静置分层后， 用吸管小心吸取上部环己 烷入1 c m石英杯中， 置入荧光光度计内于激发波长3 7 5 - 3 8 0 n m， 发射波长5 2 0 - 5 2 5 n m测其荧光强度， 在标准曲线上查得试料中 硒的含量。 同时做空白 试验( 消化时应戴防护眼镜) 。7 ， 2 高含量硒样品( 预混合料) 的测定 对于每千克含硒在1 m g 以上含有机物的样品 .， 按( 7 . 1 ) 进行至加入1 m L水和1 m L 盐酸( 4 . 4 ) 摇匀， 放置1 0 m i n 后将消化液稀释至足够体积， 然后取部分溶液( S e 提0 . 4 p g ) 进行测定。 对于以石粉为载体的预混料， 称取 1 -5 g 样品( 精确到 。 . 0 0 0 1 g ) ， 于2 5 0 m 1烧杯中， 加入 2 0 m L水和 2 5 m 1 一 硝酸免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t )免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载G s / T 1 3 8 8 3 一 9 2( 4 . 2 ) ( 逐滴加入硝酸至气泡不发生后再全部加入) ， 盖表面皿， 置电热板上煮沸， 低温沸腾3 0 m i n , 取下冷却， 用水转移到1 0 0 -5 0 0 m L 容量瓶中 稀释至刻度， 摇匀， 取部分澄清液( S e (0 . 4 p g ) 入5 0 m l 一 高型烧杯中， 加入5 m L高氯酸( 4 . 1 ) ， 以下按 7 . 1 加高氯酸后程序进行。7 . 3 工作曲线的绘制 取0 . 0 0 , 0 . 5 0 , 1 . 0 0 , 1 . 5 0 , 2 . 0 0 , 3 . 0 0 m L硒标准溶液( 4 . 1 0 ) ， 分别入5 0 m L具塞比 色管中， 加入3 m l - 盐酸经胺溶液( 4 . 7 ) , 2 滴甲 酚红指示剂( 4 . 1 1 ) , 以下按7 . 1 用氨水中和起操作进行， 以硒量为横坐标， 荧光强度为纵坐标， 绘制工作曲线。8 分析结果计算和表述 硒的含量( m g / k g ) 按下式计算: S e ( m g / k g ) =式中: ， t 自 工作曲线上查得的硒量， I t g ; V o - 一 试液的总体积， m L ; V , 分取试液的体积， m L ; 。 。 试料的质量， 9 。 所得结果应表示至三位小数: 0 . 0 0 1 m g / k g ,m , V amo V,9 允许差 室内每个试样应称两份试料进行测定， 以其算术平均值为分析结果， 其间分析结果的相对偏差应不大于下表所列允许差。硒含量， m g / k g 蕊0 . 1 0 00 . 1 0 0 -0 . 2 0 0 0 . 2 0 0 - 0 . 4 0 0 0