南方医科大学第五章.ppt

四、碳核磁共振(13C-NMR)在黄酮类 化合物结构鉴定中的应用 (一）黄酮类化合物骨架类型的判断,（二）黄酮类化合物取代图示的确定方法 1、取代基位移的影响 黄酮母核上引入羟基或甲氧基取代时，将使碳信号大幅度向低场位移，邻、对位向高场位移，间位向低场位移，但幅度较小。,黄 酮,A,B,C,A环引入取代基，位移效应只影响A环； B环引入取代基，位移效应就影响B环。 2、5，7-二羟基黄酮类中C-6和C-8信号特征 信号在90.0100.0ppm内出现，而且 C-6 C-8。 C-6与C-8被甲基取代后碳原子信号将向 低场位移610ppm,未被取代的碳原子信号 则无大的变化。, 如C-6与C-8位被结合成糖苷，则C-6与C-8 信号将向低场移动10ppm。 (三)黄酮类化合物O-糖苷中糖的连接位置 1、糖的苷化位移及端基碳的信号： 酚性苷中，糖上端基碳的苷化位移约为 +4.0+6.0ppm. 可通过糖端基碳的化学位移确定糖的连接 位置.,2、苷元的苷化位移 p205表5-23说明： 苷元糖苷化后，Ispo-碳原子向高场位移， 其邻位及对位碳原子则向低场位移，且对位 碳原子的位移幅度大且恒定。 例如：7-O-鼠李糖 C-7： -2.4ppm C-6: +0.8ppm; C-8: +1.0ppm, C3-OH糖苷化后，对C-2引起的苷化位移 比一般邻位效应要大得多。 例如：3-O-鼠李糖 C-3：-1.1ppm C-2: +10.3ppm C-4: +2.0ppm, C-7-OH及C-3-OH与鼠李糖成苷时， C-7 或C-3信号的苷化位移比一般糖苷要大一些。 例如： 7-O-鼠李糖 C-7：-2.4ppm; 7-O-糖 C-7：-1.4ppm. 同一糖在B环上成苷比在A环上成苷时， 苷化位移更明显。,(四) 双糖苷及低聚糖苷中分子内的苷键 1、当糖上的羟基被苷化时，其直接连接的 碳原子将产生一个相当大的低场位移，而邻近碳原子则移向高场。 2、举例： 黄酮类化合物芦丁的苷元是glc(61)-rha,其葡萄糖的C-6信号向低场位移5.8ppm,而C-5则向高场位移1.4ppm。,五、质谱在黄酮类结构测定中的应用 （一）黄酮类化合物苷元的电子轰击质谱 1、黄酮类化合物苷元的EI-MS中，除分子 离子峰M+.外，常常生成M-1+即（M-H） 基峰。 如为甲基化衍生物，则可得到M-15+即（M-CH3）碎片离子。 2、黄酮类化合物的基本裂解途径, 途径-,A,B,RDA, 途径-,3、黄酮类基本裂解途径 多数黄酮苷元分子离子峰M+.很强，往往 成为基峰； M-28+.及由途径得到的A1+.与B1+.峰也 很突出。,途径+H转移,途径,途径, A-环的取代图式： 通过测定A1+.的m/z值进行确定 例如：黄酮与5，7-二羟基黄酮 B1+.m/z都等于102； A1+.m/z分别是120与152； 相差32个质量单位 结论：在A环上多了两个氧原子，亦即5，7-二羟基黄酮的A环上有两个羟基取代。, B-环的取代图式也可通过测定B环碎片离子的m/z值确定 例如：芹菜素与刺槐素 A1+. m/z都等于152， B1+. m/z分别是118与132 相差14个质量单位 结论：刺槐素的B环上多了一个甲氧基。,6-及8-含有甲氧基的黄酮 在裂解过程中可失去CH3，得到M-15+. 强峰（常作为基峰）,随后又失去CO，生成 M-43+.离子。,M+ m/z 300(100),M-15+ m/z 285(60),M-43+ m/z 257(43),4、黄酮醇类裂解途径 多数黄酮醇苷元，分子离子峰M是基峰。 在裂解时主要按途径进行，得到B2+离子 以及继续失去CO所形成的B2-28+离子.,途径,-CO,例如：在黄酮醇分子中，如果羟基数不超过三个，则在全甲基化衍生物的MS图上，B2+离子应当出现在: m/z=105 处 B环无甲氧基取代； m/z=135 处 B环有一个甲氧基取代； m/z=165 处 B环有两个甲氧基取代 m/z=195 处 B环有三个甲氧基取代, 具有2-OH或2-OCH3的黄酮醇类在裂解时的一个重要特点： 通过失去OH或OCH3后形成一个新的稳定的五元杂环。,（二）黄酮苷类化合物FD-MS,1、黄酮苷类化合物的EI-MS谱图 既无分子离子峰，也不显示糖基的碎片； 有时侯黄酮苷类化合物的EI-MS与其苷元 的EI-MS谱图一致。 2、黄酮苷类化合物全甲基化后的EI-MS谱图 可看到分子离子峰，但强度很弱； 光谱图中会出现一些无法解释的强峰。,3、黄酮苷类化合物的FD-MS谱图特征 m/z=462,463：特别醒目的M+与M+H+ 光谱图中出现葡萄糖基的某些碎片； m/z=483处出现M+Na+离子； m/z=404处出现M-58+离子； m/z=300是苷元碎片峰。,4、发射丝电流强度的改变将导致FD-MS图谱的简化或复杂化 例如：图5-18a（发射丝电流强度为20mA） 该谱图特征如下： （1）分子离子峰在m/z=594出现； （2）M+1+与M+Na+峰清晰可见; （3）有不少因苷元开裂生成的碎片峰存在。, 图5-18b（发射丝电流强度降为18mA）， 该谱图特征如下： (1) 分子离子峰在m/z=594出现； (2) M+1+清晰可见,但M+Na+ 峰在图5-18b中消失了！; (3) 看不到因苷元开裂生成的碎片峰。 （4）图5-18b比图5-18a大为简化。, 图5-19（发射丝电流强度提高为