实验一紫外-可见分光光度计的性能检验.ppt

实验一 紫外可见分光光度计 的性能检验,一、实验目的 1、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法 2、学会UV1100型紫外可见分光光度计的使用方法 二、实验原理 对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。,三、仪器与试剂 UV1100型紫外可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 擦镜纸 蒸馏水 6mg/100ml K2Cr2O7溶液 0.002mol/mol KMnO4溶液,四、实验内容及操作步骤 1、比色皿的配对性,注入,蒸馏水,两个比色皿,分别,440nm,以一个比色皿,为空白（T1100）,测定,另一个比色皿的T2,T=T1-T2,T0.5%,T0.5%,两个比色皿配对,两个比色不配对，应进行校正,2、波长精度的检查,以蒸馏水为空白,测定,KMnO4溶液的吸收曲线,若测得的最大吸收波长在5251nm以内,说明,仪器波长精度符合使用要求,500,800,0.4,0.2,(nm),A,0,3、重复性的检查,以0.02mol/L的H2SO4为空白,在257nm处,同一K2Cr2O7溶液的T，连续测定7次,测定,求出极差,若极差0.5%,仪器的重复性符合使用要求,4.吸收值准确度的检查,235nm、257nm,分别测定 K2Cr2O7溶液吸光度并计算吸收系数,以0.02mol/L的H2SO4为空白 (T100%）,313nm、350nm,与下表规定的,吸收系数比较,若相对偏差在1%以内,说明,仪器符合使用要求,五、思考题 1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？ 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？,实验二 吸收曲线的测绘及 吸收系数的测定,一、实验目的 1、掌握测绘吸收曲线的方法 2、学会测定吸收系数 二、实验原理 1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的max、min或(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提供了有力的证据。 2、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%，液层厚度为1cm时的吸光度。 即,三、仪器与试剂 UV1100型紫外可见分光光度计 石英比色皿（一对） 95%乙醇（A.R） 0.005%丹皮酚对照品溶液,四、实验内容及操作步骤,丹皮酚对照品 10mg,95乙醇溶解,定容至10ml,摇匀,精密吸取5ml,置,100ml量瓶,95乙醇定容,作为母液备用,母液中丹皮酚的含量为0.005%,1、吸收曲线的测绘,精密吸取母液1ml,置,10ml量瓶,95乙醇定容,以95乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。,2、吸收曲线的测绘,利用上述溶液，在274nm波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。,实验三 分光光度法测定槐花中总黄酮的含量,一、实验目的 1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2、巩固紫外可见分光光度计的操作方法 二、实验原理 黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分析。,三、仪器与试剂 UV1100型紫外可见分光光度仪 石英比色皿（一对） 5% NaNO2溶液 10% Al(NO3)3溶液 NaOH试液 芦丁对照品 槐花药材 其余试剂均为分析纯；,四、实验内容及操作步骤,1、对照品溶液的制备,加甲醇，水浴使溶解,芦丁对照品 50mg,置,25ml量瓶中,放冷，加甲醇至刻度，摇匀,精密吸取 10ml,置,100ml量瓶中,加水至刻度，摇匀,即得（每1ml中含无水芦丁0.2mg）,2、标准曲线的制备,精密量取对照品溶液0、1、2、3、4、5ml,分别置,25ml量瓶中,各加H2O,加,5% NaNO2 1ml,摇匀,放置6min,10% Al(NO3)3 1ml,摇匀,放置6min,加,加,NaOH试液 10ml,加水至刻度,摇匀，放置15min,至5ml,=500nm,以相应试剂为空白,测定吸光度（A）,以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线,吸光度,浓度（mg/ml）,3、供试品溶液的制备,槐花粗粉1g 精密称定,置,索氏提取器中,加,乙醚,加热回流至,提取液无色,放冷,弃乙醚液,加,甲醇90ml,加热回流至,提取液无色,移至,100ml量瓶中,甲醇少量多次洗涤容器,洗液并入量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取 10ml,置,100ml量瓶中,加水至刻度，摇匀,即得,4、样品的测定,精密吸取供试品溶液3ml,置,25ml量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5ml”起,从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得,依法测定吸光度,槐花中含总黄酮以无水芦丁（C27H30O16）计， 不得少于8.0%。,五、注意事项 1、对照品和样品应同时显色 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确 六、思考题 1.分光光度法有哪些影响因素？ 2.试述标准曲线法的优点。,实验四、薄层板的制备,一、实验目的,掌握薄层板的制板方法。,二、仪器与试剂,天平（0.1g） 研钵 玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液 （3） 蒸馏水 薄层层析用硅胶GF254（青岛海洋化工厂）,三、实验内容及操作步骤,1. 洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。,2匀浆 将吸附剂1份（3.0g）和水3份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。,3铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。,4活化 将阴干的薄层板至于110烘箱中活化30分钟，置于有干燥器中备用。,四、思考题,1薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？,实验五 薄层色谱定性分析 （五味子的定性鉴别）,一、实验目的,1. 掌握薄层色谱的定性分析方法。 2. 熟悉薄层板的点样方法。,二、实验原理,中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。,五味子植株,五味子药材,三、仪器与试剂,定量毛细管 已制备好的薄层板（硅胶GF254 ） 展开缸 所用试剂均为分析纯 五味子粉末,定量毛细管,双槽展开缸,对 照 品,四、实验内容及操作步骤,1.供试品液的制备：取五味子粉末1g，加三氯甲烷20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品液。 2.对照药材溶液的制备：取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液。 3.对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每ml含1mg的对照品溶液。,4. 吸取上述三种溶液各2l，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（3060）甲酸乙酯甲酸（1551）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。,五、思考题,1如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？,实验六、高效液相色谱仪的使用,一、实验目的 掌握高效液相色谱仪的使用方法 了解高效液相色谱仪的结构,高效液相流程图,1 溶剂贮器,2 泵,3 流量与速度检测装置, 4 进样阀,5 预柱(保护柱),6 分离柱(色谱柱), 7 检测器,8 数据记录及处理系统,9 废液瓶,二、仪器与试剂,L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm4.6 mm） 微量进样器（25l） 过滤器（0.45m）及脱气装置 苯、甲苯、萘 甲醇（色谱纯） 重蒸馏水,三、实验内容与步骤,（一）流动相的预处理 1过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 （二）安装色谱柱 按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。 （三）液相色谱仪的使用方法 1.启动液相色谱仪,2.排除管道内空气 3.泵流速的设定 4.检测器波长的设定 5.打开T2000P色谱工作站 6.色谱柱预平衡 7进样,8.数据采集完毕后，点击停止进样 9.点击“再处理”和“报告”图标对图谱进行再处理，出报告图 10.实验完毕后冲洗色谱柱 11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源,练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量 色谱条件 流动相为甲醇水（8020）； 固定相:C18反相键合色谱柱； 检测波长为254nm； 流速：1ml/min。 样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为1g/ml的甲醇溶液。 进样量 ：10l。,四、思考题,流动相在洗脱前为何要进行脱气？,一、实验目的 1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。 2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。,实验七、高效液相色谱定性及定量分析中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定,二、实验原理,1.采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。 2.采用外标一点法进行含量测定。,三、仪器与试剂 L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器） C18反相键合色谱柱（250 mm4.6 mm） 微量进样器（25l） 芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯,四、实验内容及操作步骤 色谱条件 C18反相键合色谱柱； 流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（4065）； 检测波长为230nm。 对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。,供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。 本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。,五、思考题,1外标一点法的主要误差来源是什么？ 2紫外检测器的优缺点是什么？,实验八、气相色谱仪的使用,一、实验目的 1. 掌握气相色谱仪的使用方法 2. 了解气相色谱仪的结构,二、实验原理,气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由