肝血管瘤中血管内皮生长因子的表达意义.doc

肝血管瘤中血管内皮生长因子的表达意义 作者：李海民赵爱志窦科峰李开宗孙凯 【关键词】 血管瘤 关键词: 肝;血管瘤;血管内皮生长因子 摘 要:目的 研究肝血管瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其临床意义. 方法 用链霉亲和素-生物素-过氧化物酶免疫组织化学染色（SABC法）和核仁组成区相关嗜银蛋白（AgNOR）计数方法，研究64例肝血管瘤标本. 结果 肝血管瘤标本中，VEGF阳性表达率为78.1%，其中（+）者11例，（）者17例，（）者22例，且VEGF表达强度在不同的组别间AgNOR计数差异显著（P<0.01）. 结论 VEGF的表达在肝血管瘤的成因中具有重要意义. Keywords:hepatic;hemangioma;vascular endothelial growth factor Abstract:AIM To investigate the expression of vascular en-dothelial growth factor（VEGF）in hepatic hemangioma and its clinical implication.METHODS VEGF expression was detected in64paraffin embedded hepatic hemangioma slides with immunohistochemical staining（SABC）and AgNOR counting.RESULTS VEGF was expressed in78.1%of hepatic hemangioma，with11cases（+），17cases（），22cases（），and the difference between groups with different degrees of VEGF expression was significant（P<0.01）.CONCLUSION The expression of VEGF may play certain role in the cause of hepatic hemangioma. 0 引言 肝血管瘤的病因及发病机制尚不十分清楚，临床上缺乏确切有效的治疗方法.近年来随着肿瘤血管形成研究的深入，血管内皮生长因子在血管形成中的作用受到重视.我们采用免疫组织化学方法，测定血管内皮生长因子（vascular endothelial growth fac-tor，VEGF）在肝血管瘤中的表达情况，探讨VEGF与肝血管瘤发生及发展的关系. 1 材料和方法 1.1 材料 肝血管瘤标本64例取自西京医院1990/2000的手术切除标本，正常肝标本8例取自第四军医大学病理科尸检标本.所有标本均经100mL L-1 福尔马林固定，石蜡包埋，4m连续切片.VEGF兔多克隆抗体购自Santa Cruz公司，SABC试剂盒购自博士德公司.AgNOR染色液按常规方法配制. 1.2 方法 切片经脱蜡至水后按常规免疫组织化学法染色.以AgNOR计数作为衡量血管瘤血管内皮细胞增殖程度的指标.AgNOR染色在微波炉里进行，温度50，时间23min.兔抗VEGF抗体工作浓度1 50，以正常兔Ig作替代对照，不加一抗作空白对照，以8例正常肝及瘤周围正常肝作正常对照.肿瘤组织内出现棕黄色颗粒为阳性，根据染色强度不同分为（-），（+），（），（）四级，超过（+）者为阳性，超过（）者为强阳性.每张切片随机计算100个细胞核中的AgNOR的数量并观察其大小、形态及分布.统计学处理:VEGF表达强度不同的组别间，AgNOR计数差异的显著性判断，用团体t检验. 2 结果 2.1 VEGF在肝血管瘤中的表达 VEGF主要表达于肝血管瘤内皮细胞，纤维化区域不表达，瘤周围肝细胞、正常肝细胞及其间血管内皮细胞也不表达，替代对照、空白对照阴性.依判断标准，64例肝血管瘤标本中，50例表达阳性（78.1%），其中（+）者11例，占阳性表达者的22.0%，（）者17例，占阳性表达者的34.0%，（）者22例，占阳性表达者的44.0%. 2.2 AgNOR计数、形态及分布 肝血管瘤内皮细胞核中，AgNOR颗粒呈圆形、卵圆形，大小不等，多位于核中央或偏中央分布，AgNOR计数（x s），在（+）组为2.320.49，（）组为3.640.51，（）组为4.310.34，经统计学检验，（+）组与（）组间;（）组与（）组间比较差异均非常显著（P<0.01）. 3 讨论 在血管母细胞瘤中，VEGF的高表达是VHL抑癌基因失活的直接或间接结果1 .血管母细胞瘤是以血管网的恶性生长为特征的，而血管瘤是以良性的方式生长的.虽然二者的生长方式不同，但均以血管网的增殖为特点，二者之间很可能有共同的分子机制.既然VEGF作为促血管生成的主要因子，与血管母细胞瘤的关系密切，那么它与血管瘤之间的关系就值得我们去探讨.文献报道，血管瘤的发病机制很可能就是由于某些因素导致了血管的生成增加2 ，Schwarz等3 在用含VEGF基因的质粒注射大鼠缺血心肌来治疗心梗时发现注射部位出现了血管瘤样结构的形成，这表明，VEGF的表达量增高可直接导致血管瘤的形成.为此，本实验主要研究VEGF在肝血管瘤中的表达情况及其与血管内皮细胞增殖程度的关系. 本组肝血管瘤VEGF表达阳性者达78.1%，且VEGF表达强度不同的各组间AgNOR计数差异非常显著（P<0.01），说明VEGF表达越高，血管内皮细胞增殖越旺盛.这个结果显然不是偶然的，很可能是先有VEGF的高表达才有血管瘤的形成，所以肝血管瘤应被视为新生物.临床上少数血管瘤手术切除多年后又复发，且呈现典型血管瘤结构的病例支持这一观点.VEGF表达阴性的肝血管瘤可能是由其他促血管生成因子如FGF，PDGF，IL-8等诱发.从本实验的结果看，应对肝血管瘤的成因是源于肝内血管结构发育异常和血流压力以及肝血管瘤不是新生物的传统观点提出质疑.血管母细胞瘤和血管瘤的发生、发展都与VEGF有着密切的关系，而二者的生物学行为截然不同，其原因在于VEGF是血管生成的直接促进因素，它的持续高表达是血管生成的动力，而调控VEGF持续高表达与否的操纵因素才是决定血管生成良恶性的关键4-8 .因而，血管瘤的血管生成是徐缓的、可调控的，而血管母细胞瘤的血管生成是迅速的、失控的，这是二者的根本区别.血管母细 胞瘤高表达VEGF的原因是VHL抑癌基因的失活导致VEGF的持续高表达，肝血管瘤虽然是良性肿瘤，亦有可能是某种因素使肝血管内皮细胞基因发生改变，导致VEGF的表达乃至诱发肝血管瘤.VEGF的受体KDR就表达于血管内皮细胞9 ，血管瘤的内皮细胞同时表达VEGF及其受体，它可以通过自分泌或旁分泌的途径发挥作用，所以肝血管瘤的发生、发展很可能是通过自分泌或旁分泌机制实现的. 参考文献: 1Vaquero J，Zurita M，Oya S，Coca S，Salas C.Vascular perme-ability factor expression in cerebellar hemangioblastomas:Cor-relation with tumor-associated cysts J.J Neurooncol，1999;41（1）:3-7. 2Chang J，Most D，Bresnick S，Mehrara B，Steinbrech DS，Reinisch J，Longaker MT，Turk AE.Proliferative heman-giomas:Analysis of cytokine gene expression and angiogenesis J.Plast Reconstr Surg，1999;103（1）:1-9;discussion10. 3Schwarz ER，Speakman MT，Patterson M，Hale SS，Isner JM，Kedes LH，Kloner RA.Evaluation of the effects of intramy-ocardial injection of DNA expressing vascular endothelial growth factor（VEGF）in a myocardial infarction model in the ratangiogenesis and angioma formation J.J Am Coll Cardiol，2000;35（5）:1323-1330. 4Zachary I，Gliki G.Signaling transduction mechanisms mediat-ing biological actions of the vascular endothelial growth factor family J.Cardiovasc Res，2001;49（3）:568-581. 5Liu DH，Zhang XY，Huang YX，Fan DM.Construction of eu-karyotic expression vector of VEGF165gene and its effect on oncogenesis of human gastric carcinoma J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（9）:813-816. 6Du P，Wei JG，Li HP，Wang YC，Wu QZ，Huang J.Expres-sion of vascular endothelial growth factor in nude rat liver after planting human hepatocellular carcinoma cells J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2001;22（12）:1085-1088. 7Liu CL，Dou KF，Li B.Expression and significance of vascular endothelial growth factor and its receptors in hepatocellular car-cinoma cell lines J.Di-si Junyi Daxue Xuebao（J Fourth Mil Med Univ），2000;21（6）:770-772. 8Fukumura D，Xu L，Chen Y，Gohongi T，Seed B，Jain RK.Hypoxia and acidosis independently up-regulate vascular en-dothelial growth factor transcription in brain tumors