生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5mRNA在消化系肿瘤中的表达.doc

生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA在消化系肿瘤中的表达【摘要】 目的 探讨消化系统恶性肿瘤组织中生长抑素受体亚型SSTR2、SSTR5 mRNA表达状况及其与肿瘤的相关性。方法 收集消化系肿瘤标本共66例，均经手术及病理证实。男性44例，女性22例，PCR扩增SSTR2、SSTR5 mRNA，并进行琼脂糖凝胶电泳，测其OD值并进行分析。结果 不同肿瘤SSTR2 mRNA 的表达频率不同，肝癌组织明显高于胃癌、结肠癌和胰腺癌(P0.05)， 胃癌、结肠癌和胰腺癌之间表达无明显差异。肝癌癌组织与癌旁组织之间表达水平无明显差异，但与正常组织表达水平有显著差异(P0.05)；胃癌、结肠癌和胰腺癌癌组织与癌旁组织、正常组织之间表达无显著性差异(P0.05)。SSTR5 mRNA的表达频率和表达水平在消化系肿瘤中差异不显著(P0.05)。结论 (1)胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌组织中有SSTR2、5亚型表达，以SSTR2亚型为主。(2)SSTR2亚型在胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌的表达频率及表达水平不同。在肝癌中呈高表达，在胃癌、结肠癌及胰腺癌中表达水平较低。(3)SSTR2、5亚型的表达频率、表达水平与癌组织分化程度、有无淋巴结转移密切相关，结肠癌与肿瘤分期有密切关系。(4)SSTR2亚型鉴定对胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌是否适合生长抑素治疗具有一定指导意义。 【关键词】 消化系统恶性肿瘤；生长抑素受体亚型第一作者：郭宏华(1964)，女，副教授，副主任医师，硕士生导师，主要从事消化系统肿瘤治疗的研究。生长抑素(SST)及其类似物(SSA)能够抑制多种实体肿瘤如胃癌、结肠癌、肝癌及胰腺癌的生长，其抑制肿瘤细胞分裂是由肿瘤组织中生长抑素受体(SSTR)主要是SSTR2介导的。SSTR是一种G蛋白偶联受体，包括5个亚型SSTR 15，各亚型通过不同的传导途径发挥抗肿瘤细胞增殖的作用。肿瘤组织有无SSTR基因表达是影响生长抑素疗效的重要因素。应用RTPCR方法探讨SSTR2、5亚型在消化系统肿瘤组织中的表达规律，为进一步应用SST及SSA治疗消化系统肿瘤奠定理论基础。本研究旨在检测消化系统肿瘤组织中有无SSTR2、5亚型基因表达，间接了解肿瘤组织分化程度，并在此基础上开展生长抑素治疗消化系统肿瘤的探讨。1 对象与方法1.1 对象及分组1.1.1 研究对象收集消化系统肿瘤标本66例，来自我院20002003年住院患者，均经手术及病理证实。1.1.2 分组 胃 癌 组 22例，男性15例，女性7例，平均年龄(57.5511.96)岁；结肠癌组 22例，男性14例，女性8例，平均年龄(61.2512.26)岁；肝 癌 组 11例，男性7例，女性4例，平均年龄(50.209.21)岁；胰腺癌组 11例，男性8例，女性3例，平均年龄(52.4011.23)岁。1.1.3 临床分期胃癌、肝癌 、胰腺癌分期采用国际抗癌联盟TNM分期法,结肠癌分期采用Dukes分期1。消化系统肿瘤特征包括肿瘤分期、分化程度和淋巴结转移情况，见表1。1.2 方法分别于胃癌、结肠癌、肝癌和胰腺癌患者的癌组织、癌旁组织及远处正常黏膜取大小为0.5 cm0.5 cm的组织各2块；采用Trizol抽提液从冰冻组织中提取总RNA进行 RTPCR；5 l PCR产物作2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，光密度成像分析结果。RNA抽提液 Trizol、DEPC水和琼脂糖购自上海生物工程公司；RTPCR 试剂盒购自Promega公司；SSTR2和SSTR5引物序列、actin引物序列 、Taq DNA多聚酶、Marker购自宝泰克生物工程公司 。1.3 统计学方法采用SPSS12.0统计软件，计量资料以xs表示，计数资料以%表示，组间比较采用t检验或2检验。表1 消化系肿瘤的一般资料比较n(略)2 结果2.1 SSTR2 mRNA在消化系肿瘤组织中的表达状况肝癌癌组织与癌旁组织之间SSTR2 mRNA表达频率及表达水平无明显差异，而肝癌癌组织的表达频率及表达水平与正常组织比较有显著差异(均P0.05)；胃癌、结肠癌和胰腺癌癌组织与癌旁组织、正常组织之间SSTR2 mRNA表达频率及表达水平无明显差异。不同肿瘤SSTR2 mRNA的表达频率不同，肝癌组织SSTR2 mRNA的表达频率(81.8%)明显高于胃癌(40.9%)、结肠癌(36.4%)和胰腺癌(18.2%)(均P0.05)， 胃癌、结肠癌和胰腺癌之间表达无明显差异。不同肿瘤SSTR2 mRNA的表达水平不同,肝癌组织的表达水平明显高于胃癌、结肠癌和胰腺癌组织(均P0.05)，与SSTR2 mRNA表达频率的结果相符。见表2。2.2 SSTR5 mRNA在消化系肿瘤组织中的表达状况在消化系肿瘤中，癌组织SSTR5 mRNA的表达频率与癌旁组织、正常组织表达频率差异不显著(P0.05)；不同癌组织SSTR5 mRNA 的表达频率：胃癌为36.4%、结肠癌为31.8% 、肝癌18.2%及胰腺癌为9.1%，组间比较无明显差异。胃癌、结肠癌、肝癌和胰腺癌四种消化系统肿瘤的SSTR5 mRNA表达水平无差异，癌组织、癌旁组织与正常组织的SSTR5 mRNA表达水平也无显著性差异(P0.05)，见表3。2.3 SSTR2、5 mRNA在消化系肿瘤组织中的表达状况与肿瘤特征的关系消化系肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移与SSTR2、5 mRNA 表达频率密切相关，癌组织分化程度越高，SSTR2、5 mRNA表达频率越高，反之则SSTR2、5 mRNA表达频率低。无淋巴结转移的癌组织SSTR2、5 mRNA表达频率高，而有淋巴结转移的癌组织SSTR2、5 mRNA表达频率弱。肝癌、胃癌和胰腺癌在不同TNM分期SSTR2、5 mRNA表达状况无显著性差异，而结肠癌的分期与SSTR2、5表达有一定联系,A期+B期表达频率高于C期+D期表达频率(P0.05)。见表4。表2 不同肿瘤组织中SSTR2 mRNA表达水平的比较(略)表3 不同肿瘤组织中SSTR5 mRNA表达水平的比较(略)表4 消化系肿瘤组织中SSTR2、5 mRNA 表达频率与肿瘤特征的关系n(略)3 讨 论 SST是一种对内分泌、外分泌、旁分泌及自分泌均起作用的调节肽，广泛存在于人体各器官。消化道作为人体内最大的内分泌器官是SST主要作用部位之一。SST及SSA抑制肿瘤细胞分裂是由肿瘤组织中SSTR介导的，其中主要是SSTR2介导的2，3。着眼于肿瘤组织中SSTR亚型的区分，有利于达到应用与各亚型高亲和力的SST类似物来诊断和治疗肿瘤的目的。应用RTPCR方法检测消化系肿瘤标本中有无SSTR2、5基因表达，不仅特异性好，敏感度极高，而且可间接反映SSTR基因的表达强弱。 本文结果发现SSTR 2、5亚型在消化系肿瘤的表达是有重叠性和组织选择性的，其表达频率、表达水平也不同。SSTR阳性在高分化消化系肿瘤表达明显高于SSTR阴性低分化消化系肿瘤；SSTR阳性伴有淋巴转移的消化系肿瘤表达明显低于SSTR阴性无淋巴转移的消化系肿瘤，可能与SSTR阴性消化系肿瘤低分化有关4。 结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，许多研究表明，生长抑素对结肠癌细胞有明显的抑制作用5,但未取得一致结果6。其原因是多方面的，其中癌组织是否表达SSTR以及受体的特性是重要原因。本研究仅发现有部分结肠癌组织有SSTR2、5表达： SSTR2 mRNA在22例结肠癌癌组织中有8例(36.4%)表达，SSTR5 mRNA有7例(31.8%)表达；有1个病例SSTR2、5同时表达；其 SSTR2、5 mRNA的表达频率及表达水平虽比胰腺癌高，但差异不显著；SSTR2 mRNA的表达频率及表达水平与肝癌相比明显减低，与国外报道相符， 这可能是SST及其类似物仅对部分结肠癌有抑制作用的原因之一。由此推测SSTR是机体迟滞肿瘤生长的一个环节，如肿瘤SSTR阴性可能是促进肿瘤生长的因素之一。本研究也表明：在结肠癌的A期+B期，SSTR2、5的表达频率和表达水平明显高于C期+D期；分化程度较差和有淋巴结转移的结肠癌组织SSTR2、5表达频率、表达水平明显低于分化程度好和无淋巴结转移的结肠癌组织。有研究认为在类癌和结肠癌中主要表达SSTR2，肿瘤周围血管床也表达SSTR2，同时与肿瘤的生长和转移有密切联系7。 对于难以切除的胃癌患者，寻找新的治疗方法是十分必要的。有学者研究了在胃癌中是否存在SSTR，以及细胞毒性SS类似物AN238和细胞毒性韩蛙皮素AN215的抗肿瘤效应，发现表达高浓度SSTR2 、SSTR5的肿瘤被AN238抑制，为晚期胃癌患者提供了新的治疗方法8。 在小鼠肝脏激活的星状细胞(HSC)中SSTR1、SSTR2及SSTR3有表达，SSTR1激动剂能够抑制内皮素1(ET1)诱导的HSC的收缩，有利于降低门脉压力。肿瘤组织中表达的SSTR以SSTR2为主，还可作为SST类似物治疗肿瘤是否有效的预测和预后性指标9。从本研究结果看，大多数肝癌组织中有SSTR2的表达，这对于肝癌接受SST治疗是很重要的，也是解释SST类似物治疗晚期肝癌效果良好的确切依据之一，肝癌组织有无SSTR2基因的表达是患者能否接受SST治疗的前提。 有学者研究在胰腺癌组织中可表达SSTR2、3、5 mRNA，SSTR存在于正常胰腺内分泌细胞上10。本研究发现在11例手术切除的胰腺癌组织标本中3例表达SSTR2 mRNA，1例表达SSTR5 mRNA， 即SSTR2、5 mRNA表达频率明显低，同时SSTR2、5 mRNA表达水平也明显减低，与国外研究结果基本相符10，11，为基因技术治疗胰腺癌提供了依据。【参考文献】 1 陈灏珠主编.中国实用内科学M.第11版.北京:人民卫生出版社，2001：1755871.2 Liu Q,Reubi JC,Wang Y.In vivo phosphorylation of the somatostatin 2A receptor in human tumorsJ.J Clin Endocrinol Metab，;88(12):60739.3 Fjallskog ML,Ludvigsen E,Stridsberg M,et al.Expression of somatostatin receptor subtypes 1 to 5 in tumor tissue and intratumoral vessels in malignant endocrine pancreatic tumorsJ.Med Oncol，2003;20(1):5967.4 Herder WW,Hofland LJ,van der Lely AJ,Somatostatin receptors in gastroenteropancreatic neuroendocrine tumoursJ.Endocrinol Relat Cancer，2003;10(4):4518.5 Qin Y,VanCauteren M ,Osteaux M,et 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