课件：检测及其临床应用.ppt

HLA-B27检测及其临床应用,徐美胜 2016年11月24日,1,HLA-B27及其临床应用,HLA-B27疾病相关 血清阴性脊柱关节病类型及特点 强直性脊柱炎特点及其与B27关联机制 HLA-B27 检测方法 MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP,2,HLA-B27相关疾病,3,血清阴性脊柱关节病（脊柱关节炎）,这是一组慢性炎症性风湿性疾病，具有特定的病理生理、临床、放射学和遗传特征，炎性腰背痛伴或不伴外周关节炎，加之一定特征的关节外表现是这类疾病特有的症状和体征。这一类疾病包括：强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)，反应性关节炎(reactive arthritis，ReA)，银屑病关节炎(psoriatic arthritis，PsA)，炎症性肠病性关节炎(arthropathy of inflammatory bowel disease，IBD)，未分化脊柱关节炎和幼年慢性关节炎。几种脊柱关节炎病情逐渐进展，都可能发展成典型的强直性脊柱炎,4,血清阴性脊柱关节病共同特点,RF（一） 家族聚集现象 与HLA-B27不同程度相关 皆可影响脊柱，都有不同程度的骶髂关节炎，也可影响外周关节，下肢关节多于上肢关节，且呈不对称性。 与革兰氏阴性杆菌有一定相关性： 强直性脊柱炎与肠道肺炎克雷白杆菌相关 Reiter综合征与沙眼衣原体、福氏痢疾杆菌相关 反应性关节炎与沙门杆菌、痢疾杆菌、耶尔森菌和HP相关,5,血清阴性脊柱关节病共同特点,临床上有很多共同或重叠之处： 眼炎，尿道炎，前列腺炎， 口腔、肠道和生殖器溃疡 结节性红斑，银屑病样皮疹 坏死性脓皮病，血栓性静脉炎 基本病理变化以肌腱端周围和韧带附着于骨的部位为主(附着端炎)而非滑膜，也可发生在眼、主动脉瓣、肺实质和皮肤，而不同于以滑膜病变为主的类风湿性关节炎，而且无类风湿皮下结节。,6,HLA-B27相关疾病：强直性脊柱炎,Ankylosing Spondylitis，AS 患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织） 可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直 B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！,7,HLA-B27与AS,8,2019/4/19,9,可编辑,HLA-B27与AS,10,健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLAB27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性 两种错误认识：HLA-B27阳性AS！ HLA-B27阳性不会转阴！,HLA-B27检测方法及评价,抗原水平 微量细胞毒法 ELISA IMS-ELISA 流式细胞术法 基因水平 PCR-SSP,11,微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT）,原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。 优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。 缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。,12,ELISA,原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HLA-B27抗原（待检标本）、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反应，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。 其结果与MLCT法符合率为99，且不受感染因素的影响，重复性好。,13,磁珠酶联免疫分析（IMS-ELISA）,磁珠分离与ELISA结合 B27单抗标记磁珠 HRP标记CD45单抗 通过磁场分离游离相 优点： 反应时间短（1小时完成） 对标本新鲜度要求不高 28静置4 d之内可用,14,杨雅琼等现代检验医学杂志，2002,17(2):60-62,流式细胞术法,利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞表面的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的高低判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。 优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，结果判断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。 缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。,15,PCR-SSP,通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，若出现目的条带则表示HLA-B27为阳性。 优点：基因水平的