药理学实验.doc

针对药理学有关知识内容与实验课的要求，拟开设以下几个方面的实验：实验一:药理学实验的基本知识及基本技能训练（4学时）实验目的与要求：通过实验使学生掌握药理实验有关的动物选择、应用、捉拿、给药、采血等基本知识及基本技能的训练。要点：一、常用动物捉持方法 小鼠捉持 家兔捉持二、常用动物给药方法 小鼠灌胃；皮下注射；腹腔注射；肌肉注射；尾静脉注射； 家兔灌胃；耳缘静脉给药；三、常用动物取血方法 小鼠后眼眶静脉丛取血用拇指和食,中指捏住鼠颈部,利用捏紧的压力,使静脉丛淤血.将一特制硬玻璃吸管(约长15cm,前端拉成管壁略厚的毛细管),从内眼角插入眼睑和眼球之间,轻轻香眼底方向移动，并略加捻转，血即自然顺便玻璃管流出。 眼眶动脉、静脉取血左手抓住小鼠，拇指和食指尽量将头部皮肤捏紧，使眼球突出，用无钩弯镊将眼球摘除，将鼠倒置，血即流出1. 小鼠捉持法 以右手捉小鼠尾，将小鼠放于粗糙面上，向后轻拉小鼠尾部，使小鼠固定于粗糙面上。用左手的拇指、食指和中指捏住小鼠两耳及头部皮肤，无名指、小指和掌心夹住背部皮肤和尾部，使头部朝上，颈部拉直但不宜过紧，以免窒息（见图11）。另一种捉持方法是只用左手，先用食指和拇指抓住小鼠尾巴，后用手掌及小指和无名指夹住其尾部，再以拇指及食指抓住两耳和头部皮肤（见图12）。前者易学，后者便与快速捉拿给药。图11 小鼠的捉拿方法1 图12 小鼠的捉拿方法22. 小鼠灌胃以左手捉持小鼠，头部朝上，使其头颈充分拉直。右手拿起装有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面紧沿上腭进入食道（见图13）如插入正确，灌胃针头容易进入，如遇阻力，可能插入气管，应退出再插。灌胃液最多不超过0.1ml。 图13小鼠的灌胃法图14小鼠的皮下注射法3. 小鼠皮下注射 将小鼠至于铁丝网上，左手抓住小鼠，以拇指扣食指捏起背部皮肤，右手持注射器刺入背部皮下注射药液。（见图14）。另一种方法可由两人合作，一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住尾巴，另一人左手捏起背部皮肤，右手持注射器（针头不宜过粗，选用5号或6号针头）将针头刺入背部皮下。旋转注射器出针，否则药液将会从针眼处漏出。4.小鼠肌肉注射 左手拇指和食指抓住小鼠头部皮肤，小指、无名指和手掌夹住鼠尾及一侧后肢，将针头刺入后肢外侧部肌肉。如两人合作，一人左手抓住小鼠头部皮肤，右手拉住尾巴，另一人持注射器（选用4号或5号针头）。注射量：每腿不宜超过0.2ml。5小鼠腹腔注射 左手持小鼠（方法同灌胃），腹部朝上，头部下斜，右手持注射器（选5号或6号针头），以10角从下腹左侧或右侧（避开膀胱）朝头部方向首先刺入皮下，然后再以45角刺入腹腔，注射药液（见图15）。两次进镇，防止漏液：针头与富强的角度不宜太小，否则易进入皮下；正腹部进针，以刺破膀胱；穿刺部委不宜太深或太近于上腹部，避免刺破内脏。常用注射量为0.5ml，不宜超过1.0ml。图15小鼠的腹腔注射法6小鼠尾静脉注射 将小鼠置特制的铁皮固定器内，露出尾巴，涂搽75%乙醇，使血管扩张。将鼠尾拉直，选择一条扩张最明显的血管，用拇指及中指拉住尾尖，使之压迫尾根保持血管充血扩张，用4号注射针头以约角（几乎平行）刺入尾静脉内，缓缓将药液注入（见图16）。如针头没有插入静脉内，推入药液有阻力多，而且局部辩白。此为注入皮下的表现，应重新穿刺。因此，为静脉注射时，必须从近尾端静脉开始，这样可以重复注射数次，以便失败后可在第一次穿刺点的上方重新进行，小鼠尾静脉注射的药液量一般为0.21.0ml。图16小鼠的尾静脉注射法家兔的捉持和给药方法1、捉持 一手抓紧背部皮肤，轻轻将兔提起，另一手托住臀部，使兔成坐位姿势（见图17）。图17兔捉持方法1、2、3均为不正确的捉兔方法，1可损伤两肾脏；2可造成皮下内出血；3可损伤两耳；4、5均为正确的捉持方法，颈后部皮较厚，可以抓，并用手托住兔体。将兔仰卧，一手抓住颈部皮肤，另一手顺其腹部摸至膝关节。另一人用绳带捆绑兔的四肢试图腹部向上固定在土手术台上。头部则用兔头固定夹固定。2、灌胃将兔固定于兔箱内，用木制开口器由齿列间插入口内，并向内上方转动直至兔舌被淹压出为止，然后将导尿管从开口器中的小孔插入沿上腭后壁轻轻地送入食道，约1520cm左右，已达胃部（见图18）。注意不能插入气管，可将导尿管的外端侵入水内，观察有无气泡放出。无气泡方能注入药液，药液推完后再注入45ml水或少许空气，以便将导尿管中的药液全部推至胃中。而后将导尿管迅速拔出，否则水可由导尿管中滴至气管内。图18家兔的灌胃法3、静脉注射将兔头固定于兔箱内，先拔去耳背面外侧静脉处的毛（便于认清静脉），然后用左手拇指和中指捏住耳尖部，食指点在兔耳注射处下面。右手持注射器（选用6号针头），先耳尖端开始注射，约以5角刺入，刺入后用左手拇指、食指及中指捏住针头接头处及兔耳加以固定，以防突然挣扎时针尖脱出血管（见图19）。注射时，注意不能有气泡注入，否则兔将立即死亡。常用注射量为10ml以上），应缓缓注射药液。如插入血管，药液推入容易，如插在血管外，则有丘状突起，应拔出针头，在近心端重新注射。针头拔出时必须用棉球压住注射部位以防出血。图19家兔的耳缘静脉思考题1.小鼠灌胃时应注意哪些问题 2.兔静脉注射时应注意哪些问题 3.兔灌胃时应注意哪些问题实验二: 不同给药途径对药物作用的影响(4学时)目的 观察不同给药途径对尼可刹米作用的影响。器材 注射器（1mll）、小鼠灌胃器、玻璃钟罩等。药品 5尼可刹米溶液。动物 小鼠。方法小鼠3只，称重，编号甲、乙和丙。先观察正常活动，如呼吸、活动度和运动协调程度等。然后将甲、乙、丙鼠以5尼可刹米溶液0.2m1/10g体重，分别灌胃、皮下和腹腔注射，观察给药后各鼠是否出现兴奋、惊厥等症状，并记录出现症状的时间和小鼠的最终结局。结果 将观察结果列表比较。给药途径出现症状出现症状时间小鼠结局甲鼠灌胃乙鼠皮下注射丙鼠腹腔注射实验三：药物对小鼠自主活动的影响（4学时）【目的】 观察药物对小鼠自发活动的影响，以分析药物作用表现为兴奋作用还是抑制作用。【原理】自发活动是正常动物的生理特征。自发活动的多少往往能反映中枢兴奋或抑制作用状态。镇静催眠药地西泮（安定）等中枢抑制药均可明显减少小鼠的自发活动。小鼠自发活动增减的程度与抑制药的作用强度成正比。【器材】 钟罩、注射器（1ml2）、天平。【药品】 0.5安定溶液。【动物】 小白鼠【方法】 取小白鼠2 只，称体重，分别放入两个钟罩内。待小鼠安静后，分别进行腹腔注射0.5安定溶液20mgKg，然后观察两只小鼠的活动。【结果】鼠号剂量药前活动情况药后活动情况起效时间甲鼠乙鼠实验四 药酶诱导剂及抑制剂对戊巴比妥钠催眠作用的影响（4学时）目的 以戊巴比妥钠催眠时间作为肝药酶体内活性指标，观察苯巴比妥及氯霉素对戊巴比妥钠催眠时间的影响从而验证它们对肝药酶的诱导及抑制作用。实验材料器材架盘药物天平、秒表、注射器(1mL)。药品生理盐水、0.75苯巴比妥钠、0.5氯霉素、 0.4戊巴比妥钠。动物小白鼠，1822g。实验方法1取小鼠6只,随机分为药酶诱导组(甲)、药酶抑制组(乙)和对照组(丙)。甲组腹腔注射0.75苯巴比妥钠 10mL/kg(75mg/kg) ，乙组及丙组均按10mg/kg腹腔注射生理盐水，每天次，共两天。2于第三天，乙组腹腔注射0.5氯霉素10mL/kg(50mg/kg)，甲组及丙组腹腔注射等容积的生理盐水，半小时后，甲、乙、丙三组分别腹腔注射0.4戊巴比妥钠10mL/kg(40mg/kg)。3结果与处理（1）观察小鼠反应，记录各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠时间，翻正反射消失及恢复时间，计算戊巴比妥钠催潜伏期(从腹腔注射该药到翻正反射消失的间隔时间)及催眠时间(从翻正反射消失到翻正反射恢复的间隔时间)。上述数据记入自行设计的表内。（2）根据实验结果说明苯巴比妥钠及氯霉素对戊巴比妥钠催眠作用的影响。注意事项10.5氯霉素溶液用下法配制：以干燥注射器吸取市售氯霉素注射液(0.25g2mL)1mL，加入24mL蒸馏水中，边加边振摇,充分混匀后即成。若稀释液有结晶析出，可在水浴中温热溶解后使用，吸取氯霉素注射液的注射器应预先干燥，否则，氯霉素可能在注射器中析出结晶，并堵塞注射器针头。该溶液亦可采用氯霉素琥珀酸钠粉针剂配制，其每支0.69g(相当于纯氯霉素0.5g)，加蒸馏水100mL溶解即成。2本实验过程中，室温不宜低于20否则,由于温度较低戊巴比妥钠代谢减慢，使动物不易苏醒。讨论题1从理论解释苯巴比妥钠及氯霉素对戊巴比妥钠催眠时间的影响。2试讨论药酶诱导剂及药酶抑制剂与其他药物合用时，将会产生的药物相互作用以及临床应注意的问题。实验五：药物的镇痛作用（4学时）罗通定和中药延胡索的镇痛作用（化学刺激法）【目的】了解化学刺激法的实验原理，观察罗通定和中药延胡索的镇痛作用。【原理】腹膜有广泛的感觉神经分布，把醋酸等化学刺激物注入腹腔，可使小鼠很快产生疼痛反应，表现为腹部两侧内凹、躯体扭曲和后肢伸展，统称为扭体反应。哌替啶（度冷丁）或吗啡可明显抑制扭体反应的发生，从而证明其镇痛作用。【器材】天平、小鼠笼、注射器（1ml）、针头（5 号）【药品】0.2%罗通定溶液、延胡索水煎液、0.6%醋酸溶液（0.05%酒石酸锑钾溶液）、生理盐水【动物】雌性昆明种小鼠，体重202g【方法】取小鼠6只，分成甲、乙、丙3 组，每组2 只，标记、称重。观察正常活动。给药：甲组腹部注射0.2%罗通定1ml/10g，乙组延胡索灌胃0.15ml/10g，丙组等量生理盐水灌胃，记录给药时间。药后30min，各组小鼠均腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.05%酒石酸锑钾溶液）0.1ml/10g，观察10min内各组出现扭体反应的动物数。【结果】综合全实验室结果填入下表组别鼠数扭体反应数无扭体反应数镇痛百分率罗通定组延胡索组生理盐水组【注意事项】醋酸溶液宜新鲜配制，也可用新配制的0.05%酒石酸锑钾溶液。室温不能低于10，否则不易发生扭体反应。给药组比对照组减少扭体发生率50%以上才能认为有镇痛效力。小鼠体重轻，扭体反应发生率低。实验六：茵陈蒿汤对家兔胆总管胆汁流量的影响（6学时）目的 学习复方茵陈蒿汤的利胆作用。原理 肝脏分泌的胆汁经胆总管流入十二指肠，茵陈蒿汤具有清湿热，退黄疸功效，能促进胆汁排出，使胆汁流量增加。器材 兔解剖台、总胆管引流用塑料管、剪毛刀、血管钳、眼科镊、注射器、5号针头、纱布、药棉、丝线、台秤。药品 茵陈蒿汤水煎醇沉液1.34g/ml、生理盐水、3%戊巴比妥钠。动物 家兔。方法 取禁食8-12小时家兔1只，用3%戊巴比妥钠1ml/kg耳缘静脉注射后，仰位固定于兔解剖台上。上腹部剪毛，从剑突下腹部正中线切开皮肤约6-10cm。沿正中腹白线切开腹壁，找到胃幽门部及其相连的十二指肠。用手指轻轻翻转幽门及其相连的十二指肠上部，可见开口于十二指肠的胆总管壶腹部，并可向右上方追踪到胆总管。用眼科镊分离出胆总管一小段，在胆总管下穿二根丝线。先在胆总管离十二指肠壁1.5cm处结扎一根丝线，不剪断，用作牵引胆总管用。提起牵引丝线，由于胆总管已被结扎阻断，可见上段胆总管内充满绿色胆汁。在牵引丝线上方0.2-0.3cm处剪开胆总管管一小口，插入内径为1-2mm的胆汁引流用塑料导管深2-3mm，结扎固定。通过此引流导管将胆总管内胆汁引流出体外，用量杯可计数流出的滴数或毫升数。用5号针头从兔耳缘静脉推注下列药物，每给一种药物，均观察给药前十分钟及给药后胆汁流量（每分钟滴数或每10分钟毫升数）。（1）生理盐水2.5ml/kg（2）茵陈蒿汤2.5ml/kg结果 观察并列表说明用药前后胆汁流量的变化情况实验七： 药物对家兔的利尿作用（6学时）【目的】观察呋塞米对尿液排泄的影响【原理】呋塞米为强效利尿剂，作用于肾脏肾小管髓袢升支粗段髓质及皮质部。本实验采用膀胱插管法收集药前药后尿液，通过比较药前、药后尿量，观察呋噻米的利尿作用。【器材】兔手术台一个，普通剪、手术刀、虹膜剪、止血钳各一把、兔灌胃器一套、量杯或者量筒（10ml1、50ml1）、注射器（50ml1、5ml1、1ml1）、导尿管、纱布、缝合线。【药品】3%戊巴比妥钠溶液，1%呋塞米注射液，生理盐水，液体石蜡【动物】家兔（雄性）【方法