实验一微生物实验课介绍及要求.ppt

微生物学实验课介绍微生物学实验课介绍 任课教师 程立忠 王绍辉 张理珉 余泽芬 今天的主要内容今天的主要内容 1 1、实验课的目的；、实验课的目的； 2 2、实验课的内容介绍；、实验课的内容介绍； 3 3、实验课的具体安排和要求；、实验课的具体安排和要求； 4 4、实验安全知识介绍、实验安全知识介绍 5 5、环境及人体表面微生物的检测、环境及人体表面微生物的检测 1 1、实验课的目的、实验课的目的 掌握微生物实验的基本操作技术掌握微生物实验的基本操作技术 并充分得到训练（熟练掌握最好并充分得到训练（熟练掌握最好 ） 2 2、实验课的内容介绍、实验课的内容介绍 实验课开设的意义实验课开设的意义 实验课所涉及的内容实验课所涉及的内容 实验课开设的意义 微生物学是生命科学中最基础的学科之 一，实验技术的独特性和重要性。 促进了多个学科的建立和发展生物 化学、分子生物学、生物工程学、免疫 学、病毒学等等 广泛的应用基础理论研究、工业、 农业、环境、医学、食品等。 实验内容实验内容 无菌操作技术；无菌操作技术； 培养基的制备和消毒灭菌技术；培养基的制备和消毒灭菌技术； 微生物的分离培养纯化技术；微生物的分离培养纯化技术； 菌种的保藏技术菌种的保藏技术 微生物制片染色技术；微生物制片染色技术； 微生物数量和大小测定技术；微生物数量和大小测定技术； 噬菌体的分离纯化及效价的测定；噬菌体的分离纯化及效价的测定； 微生物生理生化反应；微生物生理生化反应； 乳酸发酵的应用乳酸发酵的应用酸牛奶的制作酸牛奶的制作; ; 3 3、实验课的具体安排和要求、实验课的具体安排和要求 实验课学习要求实验课学习要求 实验过程的要求实验过程的要求 实验课安排实验课安排 良好的实验习惯良好的实验习惯 实验报告的形式实验报告的形式 成绩的评定及组成成绩的评定及组成 实验课学习要求实验课学习要求 认真对待，做好预习，加强自主认真对待，做好预习，加强自主 多发现问题，多和教师交流多发现问题，多和教师交流 注重原理，努力创新注重原理，努力创新 实验过程的要求实验过程的要求 实验过程注意安全实验过程注意安全 操作时要预防空气对流操作时要预防空气对流 接种时不要走动和讲话接种时不要走动和讲话 认真做好环境卫生，做到认真做好环境卫生，做到“ “干干干干 净净进来，干干净净出去净净进来，干干净净出去” ” 进出实验室要洗手进出实验室要洗手 实验课安排实验课安排 分组分组两人一组，登记联系电话；两人一组，登记联系电话； 每组准备记号笔和打火机各一个；每组准备记号笔和打火机各一个； 下午实验课改在下午实验课改在1313：3030上，上午的不变。上，上午的不变。 良好的实验习惯良好的实验习惯 不迟到，不缺席，有事提前请假；迟到5分钟 以上以缺席计入实验习惯成绩； 爱护实验用具，注意不要损坏； 实验完成后认真清洗实验用具，并归位摆放 整齐； 离开实验室要经教师检查同意后方可离开； 认真做好值日生工作，有人具体负责安排检 查。 实验报告的形式实验报告的形式 目的要求目的要求 实验原理实验原理 实验材料和器材实验材料和器材 实验方法和步骤实验方法和步骤 实验结果实验结果 思考题及讨论思考题及讨论 成绩的评定及组成成绩的评定及组成 平时成绩（平时成绩（20%20%，安排于实验过程中），安排于实验过程中） 实验习惯（实验习惯（10%10%） 期末考试（期末考试（20%20%，笔试），笔试） 实验报告（实验报告（50%50%） 可能组织就实验内容进行答辩，替代期末考可能组织就实验内容进行答辩，替代期末考 试试 微生物实验用到的仪器设备微生物实验用到的仪器设备 显微镜（光学显微镜（光学普通、相差、微分干涉差普通、相差、微分干涉差 、暗视野；电子、暗视野；电子扫描、透射）；高压蒸扫描、透射）；高压蒸 汽灭菌锅（立式和卧式）；隔水式恒温培养汽灭菌锅（立式和卧式）；隔水式恒温培养 箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振荡培养箱（旋箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振荡培养箱（旋 转式和往复式）；旋涡振荡器；恒温水浴锅转式和往复式）；旋涡振荡器；恒温水浴锅 ；pHpH计；分光光度计（紫外、可见光、红外计；分光光度计（紫外、可见光、红外 、原子吸收等）；离心机；电泳仪、原子吸收等）；离心机；电泳仪、PCRPCR仪仪 、发酵罐、酶标仪、冰箱；微波炉等。、发酵罐、酶标仪、冰箱；微波炉等。 实验用到器械实验用到器械 试管（试管（test tubetest tube） 德汉氏小管（德汉氏小管（Durham tubeDurham tube） 小塑料离心管，又称小塑料离心管，又称EppendorfEppendorf管管 玻璃吸管（玻璃吸管（glassglass pipettepipette） 微量吸管（微量吸管（micropipettemicropipette） ，又称微量加样枪，又称微量加样枪 培养皿（培养皿（petripetri dish dish） 三角烧瓶（三角烧瓶（erlenmeyererlenmeyer flask flask） 载玻片（载玻片（slideslide）和盖玻片（）和盖玻片（coverslipcoverslip） 滴瓶滴瓶(dropper bottle) (dropper bottle) 接种工具接种工具接种环、接种针、接种钩、接种铲、接种环、接种针、接种钩、接种铲、 接种刀、涂布器（玻璃或不锈钢制作）等。接种刀、涂布器（玻璃或不锈钢制作）等。 教材用书教材用书 1 1沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（第三版）北京：高等教育出沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（第三版）北京：高等教育出 版社，版社，19991999（第四版已在出版过程中）（第四版已在出版过程中） 主要参考书 1杜连祥，路福平主编微生物学实验技术 M北京：中国轻工业出版社，2005 2周德庆微生物学实验教程（第2版）M 北京：高等教育出版社，2006 3杨文博主编微生物学实验M北京： 化学工业出版社，2004 4赵斌，何绍江主编微生物学实验M 北京：科学出版社，2002 5东秀珠，蔡妙英主编常见细菌系统分类 和鉴定方法M北京：科学出版社，2001 实验室安全！？实验室安全！？ 实验教学过程中出现的各类突发实验教学过程中出现的各类突发 事故和事件主要有：事故和事件主要有： 1 1、火灾；、火灾； 2 2、触电；、触电； 3 3、跑（漏）水；、跑（漏）水； 4 4、化学品伤害及中毒；、化学品伤害及中毒； 5 5、灼伤；、灼伤； 6 6、割（划）伤。、割（划）伤。 事故预防要求事故预防要求 实验过程严格按照操作规范进行；实验过程严格按照操作规范进行； 对使用的化学药品试剂、仪器设备、实验器对使用的化学药品试剂、仪器设备、实验器 材等清楚其性质和使用注意事项；材等清楚其性质和使用注意事项； 不在实验室进餐、饮水；不在实验室进餐、饮水； 实验室严禁明火取暖，实验用到的加热设备实验室严禁明火取暖，实验用到的加热设备 在人离开时，关闭加热；在人离开时，关闭加热； 清楚实验室或实验楼内配备的防护用具的使清楚实验室或实验楼内配备的防护用具的使 用方法和摆放位置（消防设施用方法和摆放位置（消防设施灭火器、灭火器、 消防用水、防毒面具，冲淋设施消防用水、防毒面具，冲淋设施桌面冲桌面冲 眼器、紧急冲淋设备，通风柜，医药箱等）眼器、紧急冲淋设备，通风柜，医药箱等） 。 事故处理要求事故处理要求 先保护好自身的安全，再施救 不要慌张，冷静按预案处理 认真负责，不推缷责任 逐级上报，不隐瞒事故 学生衣服着火的对策学生衣服着火的对策 以灭火毡包裹该同学，并把其在地上滚动以灭火毡包裹该同学，并把其在地上滚动 其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。 实验室的窗帘布着火的对策 取出灭火器，拔出安全针。 把喷咀对准火源。 按掣使灭火器喷出二氧化碳。 其他同学立刻通知老师。 酒精溅在长桌上并着火的对策 利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用沙盖着。 其他同学立刻通知老师。 打破了烧杯，被碎片割伤流血的对策 以清水冲洗伤口。 贴上干净的消毒胶布。 其他同学立刻通知老师。 化学药品溅进学生的眼睛内的对策 用桌面上冲眼器以大量清水冲洗眼睛。 其他同学立刻通知老师。 学生在倾倒酸时意外地接触到酸的对策 立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。 其他同学立刻通知老师。 实验物品常见警告标识符号实验物品常见警告标识符号 灭火器及其使用方法 实验一：实验室环境及人体表 面微生物的检测 检查实验室空气中及各人手上的微生物（细检查实验室空气中及各人手上的微生物（细 菌为主），并加以统计、比较和描述（数量菌为主），并加以统计、比较和描述（数量 、菌落形态等）。、菌落形态等）。 使学生认识到微生物无处不在，以便在以后使学生认识到微生物无处不在，以便在以后 的实验中重视无菌操作。的实验中重视无菌操作。 强调对微生物感性认识。强调对微生物感性认识。 一、目的要求一、目的要求 因为微生物个体较小，肉眼难以看到， 但其实际上它们广泛分布于室内外、水 、空气和土壤中；环境微生物的检测及 观察有利于建立起“微生物无所不在、 无孔不入”的概念，形成自身良好的卫 生习惯，认识到在微生物实验中无菌操 作的重要性。 二、实验原理二、实验原理 平板培养基含有微生物生长所需的营养成平板培养基含有微生物生长所需的营养成 分，当不同来源的样品接种于培养基上，分，当不同来源的样品接种于培养基上， 在适宜温度下培养，在适宜温度下培养，1212天内每一菌体细胞天内每一菌体细胞 即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形 成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）；每成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）；每 种微生物都有其特有的菌落形态，一般情种微生物都有其特有的菌落形态，一般情 况下一个菌落对应一个微生物活细胞，这况下一个菌落对应一个微生物活细胞，这 样就可以统计不同微生物在某样品中的数样就可以统计不同微生物在某样品中的数 量。量。 三、实验材料及器材三、实验材料及器材 牛肉膏蛋白胨培养基平板牛肉膏蛋白胨培养基平板 3 3个；个； 洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培养箱等。洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培养箱等。 四、实验方法及步骤四、实验方法及步骤 1 1、实验室空气中微生物检查、实验室空气中微生物检查 2 2、手上微生物检测、手上微生物检测 取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板，打开皿盖取一无菌牛肉膏蛋白胨琼脂平板，打开皿盖 （扣放，开始计时），使培养基暴露于空气（扣放，开始计时），使培养基暴露于空气 中中3030分钟，盖上皿盖，在分钟，盖上皿盖，在3737下倒置培养下倒置培养 24482448小时，观察结果，统计微生物数量。小时，观察结果，统计微生物数量。 1 1、实验室空气中微生物检查、实验室空气中微生物检查 取一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板，用记号笔取一个牛肉膏蛋白胨琼脂平板，用记号笔 在平板底部（外面）划线等分成在平板底部（外面）划线等分成2 2半，用手半，用手 指在其中一半上摩擦几下（不能把培养基指在其中一半上摩擦几下（不能把培养基 划破）；然后用肥皀洗手，用同一手指在划破）；然后用肥皀洗手，用同一手指在 另一半上摩擦几下，在另一半上摩擦几下，在3737下倒置培养下倒置培养 24482448小时，观察结果，统计比较洗手前后小时，观察结果，统计比较洗手前后 的微生物数量及菌落种类。的微生物数量及菌落种类。 2 2、手上微生物检测、手上微生物检测 附：菌落特征描写方法如下附：菌落特征描写方法如下 大小 大小 大、中、小、针尖状。可先将整大、中、小、针尖状。可先将整 个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大 、中、小的标准，或由教师指出一个大小、中、小的标准，或由教师指出一个大小 范围。范围。 颜色颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、黄色、金黄色、灰色、乳白色、 红色、粉红色等。红色、粉红色等。 干湿情况干湿情况 干燥、湿润、粘稠干燥、湿润、粘稠 形态形态 圆形、不规则等圆形、不规则等 高度高度 扁平、隆起、凹下扁平、隆起、凹下 透明程度透明程度 透明、半透明、不透明透明、半透明、不透明 边缘边缘 整齐、不整齐整齐、不整齐 五五 、思考题、思考题 1 1、将你在平板上观察到的结果填入下表、将你在平板上观察到的结果填入下表 样样样样品品 来源来源 菌落数菌落数 ( (近似近似值值值值 ) ) 菌落菌落 类类类类型型 特征描写特征描写 大小大小形形态态态态干湿干湿高度高度 透明