基因克隆所要用到的实验仪器.ppt

实验仪器使用培训实验仪器使用培训 南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 台式高速离心机 紫外可见分光光度计 高压灭菌器 凝胶成像系统 PCR仪 水平电泳槽 电泳仪 恒温培养箱 恒温摇床 干燥箱 恒温水浴箱 旋涡振荡器 超净工作台 台式高速离心机 （Eppendorf 5415D或5418） 5415D使用 5415D Operating 5418使用 紫外可见分光光度计 （Eppendorf Biophotometer） 操作过程（主体） 注意事项 l1 为了尽量减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于 0.1A，吸光值最好在0.11.5A。在此范围内颗粒的干扰相对较小 ，结果稳定。样品的浓度不能过低或者过高。 l2 混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值； l3 混合液中不能有气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈； l4 必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则测定浓度结果差 异太大； l5 换算系数和样品浓度单位选择要一致； l6 不能采用窗口磨损的比色杯； l7 样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积（50l）； l8 使用时避免接触比色杯的光面。 高压灭菌器 （日本HVE-50） 操作过程 l1、插上电源插头，打开开关，按“POWER ON/OFF”键开启电源。 l2、确认压力表读数为0，将LOCK/UNLOCK杆推向右边，打开盖子，向灭菌锅内 注水直到看到水漫过底盘中心的孔（大约需要2.5升水，灭菌腔每天需换水一次 ） 。 l3、确认排汽瓶中的水位界于HIGH和LOW之间，否则取出该塑料瓶倒水或加水若干 。 l4、装入待灭菌物，盖上盖子，将LOCK/UNLOCK杆推向左边。（连续灭菌时，第 2次操作前请确保灭菌腔温度已降至50以下。） l5、按“MODE”键选择工作模式，根据需要检查和修改温度、时间设定值。 l按“MODE”键，会依次出现“MODE1，2，3，1”，其中： l“MODE1”为对琼脂类半固体的灭菌方式（有保温使其不凝结的功能）； l“MODE2”为对液体类物质的灭菌方式； l“MODE3”为对器具类物质的灭菌方式（如玻璃器皿、陶瓷器皿、不锈钢器皿等）。 l6、按“START/STOP”键，仪器即开始灭菌过程。若确实需要停止灭菌，再按该键 一次仪器即退回待机状态。 l7、灭菌完毕，待温度下降，压力表读数为0时，将LOCK/UNLOCK杆推向右边， 打开盖子。（保温状态时需先按“START/STOP”停止运行。若仪器进入节电模式需 先按任意键恢复面板显示后方可进行其它操作）。 l8、取出灭菌物（小心避免蒸汽及灭菌物烫伤手脸）。 l9、按“POWER ON/OFF”键关闭电源，断开开关，拔下插头。待仪器充分冷却后， 擦干表面冷凝水，并进行灭菌腔排水。 注意事项 l1、当排汽瓶中的水位高于“HIGH”标记时，在 灭菌前将水倒出至“LOW”标记。 l2、为避免阻塞管系，应每天换水一次；该设备 准备长时间停用时，要将灭菌锅内的水排空。 l3、当内腔脏了以后，要清洗腔体（注意清洗时 不要损伤下面的温度探头）。 l4、清洗外壁的方法： l（1）用布沾着稀释后的中性洗洁剂擦去顽固污渍； l（2）用干布擦去表面湿气。 凝胶图像处理系统 （Tanon-1600全自动系统） 操作过程（主体） l一、开启总电源。 l二、开启电脑至Windows处于正常工作状态。 l三、打开主机上层箱内的电源开关。 l四、双击桌面上的“GIS”图标，进入软件。 l五、拍摄： （一）打开拍摄界面 （二）把胶置于凝胶成像仪上 （三）打开相应灯源的电源开关（如用紫外灯源 ，请勿肉眼无防护 直接观测） （四）经电脑控制进行拍摄、保存图像 （五）拍摄完毕请立即关闭灯源电源 l六、工作完毕，关闭软件窗口 l七、关闭主机上层箱内电源开关 l八、关闭电脑 凝胶图像拍摄（详细） l步骤： l1、打开电源总开关。（位于凝胶分析仪 的左侧的开关） l2、将凝胶放入暗箱内台灯上。 l3、打开GIS分析软件，点击快捷栏上的“ 拍摄”按钮，系统出现以下界面： 4、打开反射白灯灯开关。 调节光圈大小。是画面内能观察到图像 在计算机显示屏上观察凝胶是否已全部在显示区域内：如果凝胶不 在画面中央，重新移动凝胶位置；如画面未能将凝胶拍全，调节变 焦。 5、关闭反射灯开关，打开透射灯开关。 6、观察计算机上显示的图像，重新调节光 圈大小注意避免图像过亮出现光晕。调节 焦距，使图像清晰。 注意事项 l1、若机箱控制面板与计算机同时进行控制时， 机箱面板的控制优先。 l2、若长时间不进行拍摄，请将机箱总电源关闭 。 l3、实验完毕以后请不要将暗箱式抽屉完全关闭 ，以保证暗箱内空气流畅。 l4、电脑没有杀毒软件，必须固定一个不带病毒 的U盘，以防机器中毒，导致瘫痪。 PCR仪 （PE2400型） 水平电泳槽 （百晶BG-subMIDI） 电泳仪 （EC电泳系统105/320） 恒温培养箱 （一恒DHP-9052） 恒温摇床 （智城ZHWY-200H、HWY200） 电