移植免疫及其免疫检测ppt课件

移植免疫及其免疫检验移植免疫及其免疫检验P380移 植 免 疫1954年 12月 23日，世界上第一例成功器官移植手术在美国波士顿进行1960年，吴阶平教授开展了国内首例肾移植。 后排左起为 约瑟夫 E默里 、约翰 梅瑞尔和哈特维尔 哈里森医师前排为接受手术的孪生兄弟 机体接受其他个体的细胞，组织或器官后，机体与移植物相互作用所产生的免疫应答。宿主抗移植物反应（ host versus graft rejection， HVGR）移植物抗宿主反应（ graft versus host rejection， GVHR）供者(donor)移植物 (graft) 受者或宿主(recipient or host)移植免疫：按供受者之间的关系： 自体移植 同系移植 同种异基因移植 异种移植按移植物的来源： 尸体供移植 活体供移植recipient移植的分类：（一）主要组织相容性抗原组织相容性：组织器官移植时，供受者相互接受的程度。组织相容性抗原 /移植抗原：存在于组织细胞表面的决定 组织相容性 的同种异型表位。引起强排斥 主要组织相容性抗原引起弱排斥 次要组织相容性抗原第一节 引起排斥反应的靶抗原主要组织相容性复合体 （ major histocompatibility comlex， MHC）指编码 主要组织相容性抗原 的一组紧密连锁的基因群。不仅在控制移植排斥反应中起重要作用，而且在免疫应答和免疫调节中起重要作用。HLA复合体与 HLA分子 /系统HLA复合体1.定位：2.结构： HLA 类基因区 HLA 类基因区 HLA 类基因区HLA分子触发移植排斥的抗原： 类分子尤以 HLA DR最重要 ,其次 B、 A、 DQ、 DP（二）次要组织相容性抗原（ mHA）（三）其他组织相容性抗原1.ABO抗原系统：* 供者与受者 ABO血型不配合受者血清抗体与移植物血管内皮细胞表面的 ABO抗原结合血管内皮细胞损伤和血管内凝血2.组织特异性抗原：移植排斥强度：皮肤肾肝脏第二节移植排斥反应的种类及发生机制一、宿主抗移植物反应（ HVGR）（一）超急性排斥反应移植物血液循环恢复后数分钟至 1 2天内发生的不可逆的 体液 排斥反应。原因：受者体内预存抗供者的 Ab： 供、受者间 ABO等血型不符； 受者血液中含有抗供者白细胞，血小板的 Ab； 非免疫因素：如灌流冲洗不彻底等。（二）急性排斥反应 最常见移植后 1周 3个月内发生的排斥（一）直接识别(direct recognition)：受者 T细胞 TCR特异性识别 供者 APC表面的同种异型 MHC抗原。T细胞 MHC抗原受者 供者（ 2）间接识别 (indirect recognition)： 供者供者 MHC抗原被抗原被 受受者者 APC进行加工、处理进行加工、处理，以抗原肽：，以抗原肽： MHC II类分子复合物的形式类分子复合物的形式提呈给提呈给 受者受者 T细胞细胞 ，使，使之活化，引起排斥反之活化，引起排斥反应。应。机制： 等同于普通外源性 AgCD4 T*特点：出现较晚，强度弱（三）慢性排斥反应发生于移植后数月、甚至数年，是影响移植器官长期存活的主要障碍。二、移植物抗宿主反应 (GVHR)移植物中淋巴细胞，识别受者的同种异型抗原，诱发针对受者的排斥反应。发生条件： 移植物中含一定数量成熟的淋巴细胞 (T细胞 )； 供、受者间组织相容性差 ; 宿主的免疫功能状态低下。常见于： 骨髓、胸腺、脾等移植或大量输血后机制： 供者 CD4+T细胞识别宿主 MHC抗原临表： 炎症性疾病，皮疹、腹泻、肺炎等。Graft versus host disease一、血清学分型法 （ Serological Typing）HLA-A、 B、 C、 DR、 DQ抗原可用血清学方法鉴定，故称为 SD抗原（ Serological defined antigen ）方法： Terasaki等改良的 微量补体依赖的细胞毒试验（ CDC test）该方法简便易行、结果可靠、重复性好，被美国国立卫生研究院（ NIH）认可 ,成为国际通用的标准技术第三节 HLA的分型原理：用一系列已知 抗HLA的标准分型血清 与 待测淋巴细胞 混合 ，借助补体 的生物学作用介导细胞裂解，死亡的细胞可被染料着色。待测淋巴细胞标准抗血清 补体二、细胞分型法（ Cellular Typing）HLA- 类抗原中的 D、 DP抗原过去采用细胞分型法检测，故又称 LD抗原 （ lymphocyte defined antigen）以 混合淋巴细胞培养 （ mixed lymphocyte culture， MLC）为基本技术的 HLA分型法。两个个体淋巴细胞体外培养LD抗原相同 ,不发生刺激LD抗原不相容 ,相互刺激转化可分为 单向 MLC双向 MLC-判断待检细胞的 HLA型别 /LC反应强度的指标-异体器官移植前的 HLA配型三、分子生物学分型法 P388基本原则： 供者与受者间 HLA尽可能相符，以降低移植物组织抗原的免疫原性 非特异性抑制受者的免疫应答 诱导受者对移植物的特异性免疫耐受第四节 排斥反应预防与治疗（一）选择合适的供者多数情况下只检测 HLA-A、 B、 DR不同的器官移植对 HLA配型的要求有所不同骨髓等对 HLA配型要求很高肾、心脏、胰腺等， HLA DR配型重要肝、肺 /心移植主要要求 ABO血型配合，不作 HLA配型对移植后果无明显影响。1.HLA配型 常用方法是 CDC test、 MLC2.HLA交叉配型 与检测预存抗体（ 1）淋巴细胞交叉配合试验无论抗体是针对 类还是 类 HLA，只要细胞毒性超过 10%，则表明受者体内已有细胞毒性抗体，应另选供者；若小于 10%则为阴性，表明供受者匹配。（ 2） T细胞淋巴细胞毒性交叉配型无论反应水平高低，均为移植的禁忌症（ 3） B细胞淋巴细胞毒性交叉配型（ 4）自身交叉配型（肾常规项目）受者血清供者细胞（二）移植物与受体的预处理1.对移植物进行预处理 移植术前应充分清除移植物中的过客白细胞，以减轻排斥反应2.受体的准备移植前应用一定的免疫抑制剂可有效的提高器官移植的成功率。（三）免疫抑制措施1.免疫抑制剂的应用 抑制代谢药物和激素 ：常用的是硫唑嘌呤和环磷酰胺。 抑制 T细胞活化的药物 ：环孢菌素 A(CsA) 抗体及其他生物制剂 ：针对免疫细胞表面抗原的单克隆抗体可用于抑制相应免疫细胞活化及功能2.免疫耐受的诱导（一）体液免疫水平检测相关的免疫指标主要有 ABO血型抗体、其他血型抗体、 HLA抗体、抗供者组织细胞抗体、血管内皮细胞抗体等。常用各种交叉配型、 CDC试验等进行检测。第四节 排斥反应的免疫检测（二）细胞免疫水平检测包括参与细胞免疫的有关细胞数量、功能和细胞因子水平的检测1.外周血 T细胞及其亚类的计数2.4hT细胞转化试验取受者 PBMC加入标记物直接培养 4小时掺入法测其转化率，以预报急性排斥反应危象3.NK细胞活性测定4.血清细胞因子的测定（三）补体水平的检测补体的数量及活性与急性移植排斥反应的发生有密切关系（四）急性时相反应物质的检测C反应蛋