中药化学第五章2课件

（二） 、 吸附柱色谱操作技术n 吸附柱色谱的制备n 上样n 洗脱1、吸附柱色谱的制备（ 1）层析柱的选择层析柱一般使用下端带有活塞的玻璃管，柱的直径与高度比为 1:10 40，柱的大小一般以能装样品的 30 50倍量 的吸附剂 （通常为 100目左右） 为好。（ 2）装柱先将空色谱柱清洗干净，干燥后在色谱柱管 底部铺一层脱脂棉 ，再加一层厚约 0.5cm的 石英砂 ，然后选择具体的方法。1）干法装柱： 直接用小漏斗将吸附剂均匀装入柱内的方法；2）湿法装柱： 将吸附剂装入盛有洗脱液的柱内，或将吸附剂与适量的洗脱剂混合成混悬液均匀装入柱内的方法。（ 3）装柱要点干法装柱 时要用橡皮槌轻轻 敲打 色谱柱，使 吸附剂装填连续、紧密；湿法装柱 要连续缓慢地倒入色谱柱内， 打开 色谱柱 下端活塞 ，低速放出洗脱剂，使吸附剂慢慢沉降注意继续补充洗脱液，保持流速， 确保液面高于吸附剂的表面 同时轻轻敲打柱壁，至吸附剂沉降完全。要求柱中吸附剂充填均匀，柱体内不能出现空气泡、疏密不均或裂缝。为增强分离效果提高分离速度可在 柱面覆盖一层 干净、均匀的 细沙 。2、 加样 :又称上样或样品上柱。多将 样品溶于少量洗脱剂 中，小心的加入层析柱顶端的平面内；也可将样品与易挥发溶剂混合后，再与吸附剂吸收、挥干挥发性溶剂后，撒布于柱的上端；有时也可用 多层园形滤纸 吸收样品溶液，再平放到柱的上端。柱层析加样的基本要求是 均匀薄饼样层（体积小浓度高） 。上样量为吸附剂的 1/601/30 。3、 洗脱：洗脱操作的目的是要 将加入的样品 中各个组分 先后 从上往下 带出来 ，并能分开收集各成分。洗脱的过程中， 上端溶剂不能干 ， 分段收集是关键 ；作定性检查合并相同成分。TLC时 Rf为 0.2 0.3的溶剂系统是最佳的洗脱系统，梯度洗脱。4. 应用 柱色谱分离能力比薄层分离能力更强，效果更好，尤其对结构相似、性质接近、采用薄层难以分离的成分分离效果好。（三） 聚酰胺 色谱操作1.制备 （ 1）含义（ 2）类型 薄层色谱、柱色谱（ 3）制备薄层色谱 购买预制品柱色谱 湿法装柱 ，将聚酰胺粉用 水 浸泡1h后，搅匀 装柱 。聚酰胺柱色谱分离成分时，洗脱液必须 以水为基本溶剂进行洗脱 。（三） 聚酰胺 色谱操作2、 聚酰胺 色谱的分离原理酰胺键与被 分离物 质 的 氢键 作用是聚 酰胺 吸附作用的主要原因。聚酰胺吸附力的影响因素 ： 1:形成氢键的能力与 溶剂 有关水中有机溶剂中碱性溶剂中常用溶剂对聚酰胺洗脱能力顺序如下：水甲醇或乙醇丙酮稀氢氧化钠液或稀氨溶液甲酰胺或二甲基甲酰胺尿素水溶液。2： 化合物分子结构 ：在含水溶剂中，化合物分于结构对氢键缔合影响有以下几点： 化合物分子中能 形成氢键的基团越多 ，被聚酰胺 吸附越强 。如： 成键基团所处的位置不同，被吸附的强度也不同。一般 间位、对位的吸附力强于邻位的吸附力 。如： 分子中 芳香核、共轭双键多者被吸附强度大，少者则被吸附强度小 。如： 能形成 分子内氢键者被吸附强度减小 。如：n 常用于分离黄酮类、酚类、醌类等化合物，分离效果好。对鞣质的吸附几乎不可逆，则常用于粗提物中鞣质的除去。小结：柱色谱步骤：装柱 上样 洗脱1、装柱问题1）吸附剂多细？2）方法？3）湿法用什么液体？4）怎么装？100目干法、湿法洗脱剂 底垫 棉 顶铺沙 干敲湿开洗脱 剂、浓吸附剂的 1/60 1/30慢、保平2、上样问题1）溶剂是？浓度是？2）量是？3）操作要点？3、洗脱问题1）怎么选？2）用多少？选 TLC时 Rf为 0.2 0.3的展开剂保持一定液面高度直至成分全流出4、评价分离能力比薄层强。5、聚酰胺柱色谱操作与一般柱色区别1）多用湿法装柱。2）溶剂是水。3）洗脱液必须是水溶性溶剂。第三节 分配色谱一、分配色谱原理：分配原理 ，即在展开过程中，各成分在固定相 (s)和流动相 (m)之间作连续不断的分配，由于各成分在两相间的 分配系数不同 ，因而可以达到相互分离的目的。以 Cs表示某成分在固定相中的浓度，Cm表示某成分在流动相中的浓度。则分配系数 K Cs/CmK越大，说明该成分在固定相中的分配浓度越大，反之越小。一般来说，混合物中各成分分配系数相差越大，越易分离。二、分配色谱基本构成要素n 4个基本构成要素：支持剂固定相流动相被分离成分 （一）支持剂（载体）载负固定相的介质。应该具备的基本条件： 中性多孔的粉末、无吸附活性、 在洗脱剂之中 不溶解 ；所能够吸收固定相的量，最好能达载体本身重量的 50%以上；能使流动相自由的通过载体所吸收的固定相，并且不影响溶剂系统的组成和性质。能够满足这些条件的载体：硅胶：含水 17%。 吸水量 50以上硅藻土 ：惰性多用。吸水量 100纤维素 ：惰性，常用。（二）固定相1、种类：极性和亲水性溶剂：一般为 水 及 各种水溶液（酸、碱、盐与缓冲液）、 甲酰胺、低级醇 （亲水性）等。亲脂性溶剂：硅油、液体石蜡、石油醚等。2、 选用原则：分离 亲水性成分 ，选用 极性和亲水性溶剂为固定相 。分离 亲脂性成分 ，选用 亲脂性溶剂为固定相。（三）流动相亲脂性溶剂 ：石油醚、苯、卤代烷类、脂类、酮类（如丁酮）、醇类（丁醇、戊醇）等或者它们的混合物。 极性和亲水性溶剂 ： 水、水溶液、与水互溶的有机溶剂。选用原则（与固定相互不相溶）：分离亲水性成分，选用亲脂性溶剂为流动相。分离亲脂性成分，选用极性和亲水性溶剂为流动相。（四）被分离成分n 被分离成分 极性大 ，则选用 极性大的固定相和极性小的流动相 ；被分离成分 极性小 ，则选用 极性小的固定相和极性大的流动相。 （使 K大）三、分配色谱的类型1、 按形式分 ：纸色谱、薄层色谱、柱色谱。2、 按相的极性分 ：正相色谱、反相色谱正相色谱 ：固定相的极性 大于 流动相的极性，则极性小 的成分 先被展开或洗脱 。常用于分离极性较大的成分反相色谱 ：固定相的极性 小于 流动相的极性，则极性大 的成分 先被展开或洗脱 。常用于分离极性小的脂溶性化合物 四、分配色谱的技术操作n 纸色谱n 分配薄层色谱n 分配柱色谱（一）纸色谱n 含义以滤纸纤维为惰性载体的平面分配色谱。n 纸色谱的主要组成u 支持剂：滤纸纤维u 固定相：滤纸纤维中所含的水分。通常可含有 20% 25%。u 流动相：常用的是含水的有机溶剂，如水饱和的正丁醇、正戊醇等。平面色谱中又叫展开剂。n 操作