检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质

检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质,一.实验原理： 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。如：.还原性糖的鉴定：还原性糖+.脂肪的鉴定： 脂肪+ 脂肪+ .蛋白质的鉴定：蛋白质+淀粉 +,斐林试剂,砖红色沉淀,苏丹染液,橘黄色,苏丹染液,红色,双缩脲试剂,紫色,碘,蓝色,2,二.目的要求： 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,1、还原糖的检测和观察： 选材 应该选择含 量高.颜色为,糖,白色或近于白色,制备组织样液：,制浆 过滤 取液,三.实验过程:,用一层纱布,的植物组织，,3,以苹果.梨为最好。,可溶性还原糖与斐林试剂在加热的过程中生成砖红色沉淀，说明植物组织样液中含有还原糖。,注入2mL苹果组织样液,注入1mL刚配制好的斐林试剂,水浴加热约2min,呈色反应,变成砖红色,50-650C的温水,甲乙液等量混匀现配现用,振荡、混合摇匀呈现蓝色,4,还原糖有 。 试剂： . （甲液：0.1g/ml 的 , 乙液：0.05g/ml的 .）甲乙液必须 后再加入样 液中， 。 必须 。,葡萄糖，果糖，麦芽糖,用水浴加热,斐林试剂,NaOH,CuSO4,等量混合均匀,现配现用,注意事项：,颜色变化：,浅蓝色,棕色,砖红色,5,思考：1.为什么加入斐林试剂甲液和斐林试剂乙液时必须混合后再加入？,6,因为若先加入NaOH溶液，还原性糖中的还原性半缩醛羟基易被氧化而失去还原性，再加入CuSO4溶液后不能产生Cu2O砖红色沉淀，只有将其先配成Cu(OH)2悬浊液，才可产生砖红色沉淀。,7,2.斐林试剂甲液和乙液既然混合后使用，为什么不能在实验前配制好，一定要使用时临时配制？,8,由一分析可知，鉴定试剂实质上是Cu(OH)2悬浊液，很不稳定，容易生成蓝色Cu(OH)2沉淀，所以应将甲液、乙液分别配制储存，使用时再临时配制。,9,2、淀粉的检测和观察： 取材：,马铃薯匀浆,检测,组织样液2mL,碘液2滴,说明组织样液中存在淀粉。,注意：常用材料：马铃薯 试剂： 。颜色变化： 。,碘液,变蓝,摇匀后变成蓝色,10,3、脂肪的检测和观察：,圆形小颗粒呈橘黄色，说明有脂肪存在。,方法一：待测组织样液+苏丹染液橘黄色,取材：,花生种子(浸泡34h），将子叶削成薄片,方法二：制作子叶临时切片，用显微镜观察 子叶细胞的着色情况。,取最理想的薄片在薄片上滴苏丹染液（23min）去浮色（用50酒精） 制成临时装片,低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒，然后用高倍镜观察,11,注意事项： 切片要薄，如厚薄不均就会导致观察时有的地方清晰有的地方模糊。 酒精的作用是： 。 需使用显微镜观察 使用不同的染色剂染色时间不同颜色变化： 。,洗去浮色,橘黄色或红色,12,3.花生种子浸泡的时间是否越长越好？用染色的花生仁切片，在显微镜下观察脂肪微粒颜色时，制片滴加的水一定要用蒸馏水，为什么不能用自来水？,13,花生种子浸泡时间短了，不容易切片；浸泡时间过长，切下的薄片不容易成型，所以一般是提前浸泡34小时。自来水中含有Ca离子，Mg离子等，易与染色剂发生交换吸附，使染色退去，从而不易观察脂肪粒被染色的情况。,14,4、蛋白质的检测和观察： 选材 应该选择含 丰富 的豆浆或鸡蛋清溶液（避免材料自身的颜色对实 验变化颜色的掩盖）,蛋白质,黄豆浆滤液或蛋清稀释液,制备组织样液,呈色反应,组织样液2mL,双缩脲试剂A液1mL,双缩脲试剂B液4滴,摇匀后变成紫色,说明组织样液中存在蛋白质。,15,（3）注意事项： 试剂： （ A液：0.1g/ml的 ； B液： 0.01g/ml的 ） 先加 ，再加 。 注意：先加入试剂A，造成碱性环境，而只有在碱性环境中，蛋白质才容易与Cu离子发生颜色反应，形成紫色的络合物。 B液要求量适中，否则多余的B液将会与A液发生反应生成大量蓝色Cu(OH)2沉淀而遮盖试验中所产生的紫色。同样为了防止生成较Cu(OH)2沉淀遮蔽实验结果，在配制溶液时，双缩脲试剂B比斐林试剂乙液浓度小得多，这也是斐林试剂和双缩脲试剂不能互换使用的道理。 鉴定前，留出一部分组织样液，以便对比。 用于蛋白质鉴定的蛋清必须稀释，以免实验后粘住试管壁，不易洗刷,双缩脲试剂,A液1ml,B液4滴,NaOH,CuSO4,蛋白质的检测结果,16,斐林试剂与双缩脲试剂的比较：,A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4,甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4,紫色物质生成,砖红色沉淀,先加A液，再加B液，不需加热,甲液与乙液先混再用，且现配现用，需加热,蛋白质,还原性糖,17,2.下列关于实验操作步骤的叙述中，正确的是用于鉴定可溶性还原糖的斐林试剂甲液和乙液，可直接用于蛋白质的鉴定.脂肪的鉴定需要用显微镜才能看到被染成橘黄色的脂肪滴 C.鉴定可溶性还原糖时，要加入斐林试剂甲液摇匀后，再加入乙液用于鉴定蛋白质的双缩脲试剂A液与B液要混合均匀后，再加入含样品的试管中，且必须现配现用,（ ）,18,1、实验原理：,还原性糖+斐林试剂砖红色沉淀还原性糖：葡萄糖、麦芽糖、果糖非还原性糖：蔗糖、淀粉等,+,2、配制斐林试剂：,实验一：还原性糖的鉴定,19,3、材料用具：,如果植物组织中积累的成分是淀粉和蔗糖，那就无法检测到还原性糖。有些植物尽管含有较多的还原性糖，但如果本身含有叶绿素或其他色素，这些色素就会影响实验现象起到遮盖作用。这些都不适宜做实验材料。,苹果和梨是比较理想的实验材料。,20,苹果、研钵、小刀,斐林试剂A液、斐林试剂B液、二氧化硅,量筒、试管架、吸管、试管夹、试管、滴管,漏斗、纱布,火柴、酒精灯、三脚架、石棉网、烧杯,21,4、实验步骤：,取一个洗净的苹果切下一块，去皮，然后切成小块，取一部分切成小块的苹果放在研钵中，加入少许二氧化硅（石英砂），然后研磨，将研钵中加入少量水继续研磨。,将玻璃漏斗插入试管中，在漏斗上垫一层纱布，将组织研磨液进行过滤，得到苹果的组织样液。,用量筒取两毫升组织样液，再用量筒取两毫升新配制好的斐林试剂。,22,取一只试管，将量好的苹果组织样液倒入试管中，然后将量好的斐林试剂倒入试管中，震荡试管使溶液混合均匀，我们可以看到此时溶液呈蓝色。,将这只试管放入盛有开水的大烧杯中，用酒精灯加热煮沸。,溶液的颜色开始是蓝色，然后慢慢变成砖红色。,23,这个实验就证明了，苹果中含有还原性糖的存在。,5、实验现象：,溶液的颜色从蓝色-棕色砖红色。,6、结论：,苹果中含有还原性的糖。,24,还原糖有 。 试剂： . （甲液：0.1g/ml 的 , 乙液：0.05g/ml的 .）甲乙液必须 后再加入样 液中， 。 必须 。,葡萄糖，果糖，麦芽糖,用水浴加热,斐林试剂,NaOH,CuSO4,等量混合均匀,现配现用,注意事项：,颜色变化：,浅蓝色,棕色,砖红色,25,实验一：脂肪的鉴定,1、实验原理：,脂肪+苏丹橘黄色脂肪+苏丹红色,取少量脂肪样液，加入苏丹，震荡，可看到溶液呈了橘黄色，本实验我们用苏丹做染液。,2、材料用具：,芝麻，脂肪含量丰富，但种子颗粒太小，不利于切片制作。玉米，脂肪含量较少，种子颗粒也较小，因此也不适合做实验材料。,花生是比较理想的实验材料我们选用花生,显微镜、镊子、毛笔、吸水纸、刀片、载玻片、盖玻片、培养皿,50%的酒精、苏丹、清水,3、实验步骤：,取一粒浸泡过的花生种子，去皮，分开两片子叶，将子叶切成薄片，然后用毛笔将这些材料放入盛有清水的培养皿中。,取一片载玻片，用纱布擦净，用毛笔取一片最薄的材料，放在载玻片中央。,用滴管在花生种子薄片上滴几滴苏丹染液，染色2至3分钟，用吸水纸吸去花生种子薄片周围的染液。,在薄片上滴1至2滴体积分数为50%的酒精，洗去附色，用吸水纸洗去花生子叶周围的酒精。,在薄片上滴一滴清水，盖上盖玻片，制成临时装片。,在低倍镜下寻找花生种子薄片的最薄处，将这部分移至视野中央。,用显微镜观察花生种子薄片。,我们可以看到细胞中一个个圆形的小颗粒，这就是脂肪颗粒。,低倍镜下观察,高倍镜下观察,显微镜下观察结果,31,4、实验现象：,5、结论：,显微镜下观察到橘黄色的颗粒。,花生种子细胞中含有脂肪。,实验一：蛋白质的鉴定,1、实验原理：,蛋白质+双缩脲试剂紫色络合物,2、材料用具：,豆浆、蛋清、牛奶都是很好的实验材料。,本实验我们用蛋清做实验材料，在用蛋清做实验材料时，要注意将蛋清稀释，如果稀释不够，反应后的产物会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底。,试管架、试管、吸管,蛋清稀释液,双缩脲试剂A液、双缩脲试剂B液、量筒,3、实验步骤：,用量筒量取两毫升的蛋清稀释液。再用脲尿试剂A液,将量取的蛋清液和双缩脲试剂A液分别倒入到试管中，震荡均匀，此时可见试管内仍然是透明的。,再向试管中加入1至2滴双缩脲试剂B液。,震荡均匀，此时可见试管内溶液呈紫色吗，这就表明蛋清液中含有蛋白质。,4、实验现象：,蛋清液呈紫色。,5、结论：,蛋清液中含有蛋白质。,四种物质颜色反应的对比,还原糖,蛋白质,淀粉,脂肪,37,1、鉴定还原糖、脂肪、蛋白质所用的试剂和所出现的颜色分别是（ ）A、斐林试剂（砖红色）、双缩脲试剂（紫色）、苏丹III染液（橘黄色）B、双缩脲试剂（紫色）、斐林试剂（砖红色）、苏丹III染液（橘黄色）C、苏丹III染液（橘黄色）、双缩脲试剂（紫色）、斐林试剂（砖红色）D、斐林试剂（砖红色）、苏丹III染液（橘黄色）、双缩脲试剂（紫色）2、生物组织中普遍存在可溶性还原糖，试回答有关鉴定实验的问题：（1）实验材料的选择，下面哪一组较为适宜（ ）A、西瓜和甜菜B、甘蔗和甜橙C、苹果和梨子D、淀粉和蛋清（2）下述糖类物质中，不能与斐林试剂发生作用生成砖红色沉淀的是（ ）A、葡萄糖B、果糖 C、麦芽糖 D、蔗糖（3）用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程是（ ）A、浅绿色棕色砖红色（沉淀）B、浅蓝色棕色砖红色（沉淀）C、棕色浅蓝色砖红色（沉淀）D、棕色浅绿色砖红色（沉淀）,38,3、在做脂肪鉴定的实验中用到50%的酒精溶液，其作用是（ ）A、消毒B、作为染色的辅助剂C、便于观察D、洗去切片的浮色4、蛋白质鉴定时，事先留出一些黄豆组织样液的目的是（ ）A、与反应后物颜色做对比B、失败后重做一遍C、鉴定可溶性还原糖D、留下次实验用5、（多选）花生子叶薄片用苏丹III染色后，为观察更清楚，需用高倍镜换高倍镜并调好焦距后，发现视野太暗，此时应（ ）A、将反光镜由平面换为凹面B、将反光镜由凹面换为平面C、将小光圈换成大光圈D、将大光圈换成小光圈6.用班氏试剂鉴别健康人的下列四种液体，出现红黄色沉淀的是（ ）A血